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原发性高血压的基因治疗
基因治疗为高血压的长效(数周、数月或数年)治疗提供了可能.高血压病基因治疗的临床前研究运用了两种策略:1.将功能基因导人体内增加扩血管蛋白物质.2.将反义脱氧寡核苷酸(AS-ODN)或反义DNA导人体内,抑制缩血管基因的功能.为达到此目的,已建立了两种基因导入方法:1.将AS-ODN直接注射人人体或附着于阳离子脂质体注入.2.利用含完整DNA的病毒载体.目前,临床前研究资料提示高血压病的基因治疗是可行的,但在临床用于人的基因治疗前还需进行深入研究,一些理论问题还尚待解决.
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人DNA MTase反义基因转染诱导E-钙黏附蛋白高表达
目的观察人DNA MTase反义基因转染后肝癌细胞系SMMC-7721 E-钙黏附蛋白表达的变化.方法用基因重组技术构建包含人DNA MTase正、反义基因片段的真核表达载体;采用脂质体法将其转染入肝癌细胞系SMMC-7721;采用RT-PCR法观察DNA MTase 基因mRNA、E-钙黏附蛋白基因mRNA表达变化;以甲基化特异的PCR法检测E-钙黏附蛋白基因启动子区域甲基化状态的改变;以免疫组化和流式细胞法检测E-钙黏附蛋白表达变化.结果正、反义真核表达载体构建成功并转染入SMMC-7721细胞,其中DNA MTase 基因mRNA表达减低,E-钙黏附蛋白基因mRNA表达上调,E-钙黏附蛋白基因启动子区域呈现去甲基化状态,E-钙黏附蛋白表达上调.结论抑制DNA MTase基因的表达可使肝癌SMMC-7721细胞中E-钙黏附蛋白基因启动子区域去甲基化和表达增加;DNA MTase通过诱导启动子区域高甲基化,可使E-钙黏附蛋白基因低表达.
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反义核酸技术在胶质瘤治疗中的进展
反义核酸(Antisense nucleic acids)技术是分子遗传学和肿瘤基因治疗上颇受重视的课题.遗传学者以反向遗传学角度,利用反义核酸特异性阻断细胞内单一基因表达,研究特定基因的功能,不影响其它基因的正常功能.因而,此技术对阐明单个基因在肿瘤发生、发展中的作用有重要意义;反义核酸技术也是基因治疗中较具吸引力的手段之一.利用此项技术 ,针对与肿瘤发生、发展起重要作用的几种癌基因或抑癌基因的突变体以及自分泌生长因子及其受体的基因,设计反义核酸,在转录或翻译水平封闭异常基因,使其编码产物不表达或低表达,阻断肿瘤细胞内异常信号传导,使肿瘤细胞转入正常轨道或抑制肿瘤细胞生长或诱导肿瘤细胞凋亡.
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正反义人DNA(5-胞嘧啶)甲基转移酶基因片段真核表达载体的构建
DNA(5-胞嘧啶)甲基转移酶[DNA (Cytosine-5)-methyltransferase,DNMT]以组织特异的方式识别、催化和调节半甲基化的DNA子链胞嘧啶残基,并维持DNA甲基化模式[1].异常的DNA甲基化方式与人的某些肿瘤和发育异常有关[2～6].为探讨反义DNA片段对肝癌细胞株的阻抑作用,并阐明与恶性表型有关的癌相关基因转录和DNA甲基化水平的关系,我们采用PCR克隆技术进行构建DNMT正、反义基因片段真核表达载体的研究,现介绍如下.
关键词： 人DNA(5-胞嘧啶)甲基转移酶 真核表达载体 反义DNA -
反义核酸的研究及其应用
对反义核酸的概念、作用机制及反义核酸类药物必需符合的条件等有关分子生物学研究进展进行了综述.介绍了几种人工合成的反义核酸及其应用前景,并就研究中需要解决的问题做了探讨.
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广泛表达人Fas配体的转基因小鼠发生轻微类移植物抗宿主疾病
目的：建立Fas配体(FasL/CD95L)转基因小鼠并研究FasL广泛表达的生理效应.方法：原核显微注射法产生转基因小鼠，巢式PCR和Southem-blot鉴定转基因的整合及其完整性，半定量RT-PCR分析FasL mRNA水平，免疫荧光检测FasL蛋白质的表达，组织切片染色检查形态学变化，流式细胞仪检测脾脏αβT细胞百分比.结果：获得2只含置于CMV启动子控制下人FasL cDNA的建立者小鼠.Fl代杂合体小鼠的大部分组织可检测到人FasL中等程度的表达.转基因小鼠发育正常，但脾、睾丸、肺和肝局部区域形态异常，具有轻微类移植物抗宿主疾病特征.与野生型对照相比，来源于二个建立者的转基因小鼠αβT细胞在脾脏的百分比分别减少了约32％和24％.结论：广泛表达FasL可导致轻微类移植物抗宿主疾病.
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反义猪α(1，3)半乳糖转移酶转基因小鼠的人鼠异种反应性降低
研究体内α(1，3)半乳糖转移酶α(1，3)GT反义抑制降低Galα(1，3)Gal(Gal表位)异种抗原的作用。方法：原核显微注射法产生转基因小鼠，PCR和Southern-blot鉴定转基因的整合，RT-PCR检测小鼠α(1，3)GT的表达，组织学染色检查脾脏形态，免疫荧光检测Gal表位，流式细胞仪分析人血清中异种天然抗体(IgM和IgG)和补体(C3c)对鼠源细胞的结合。结果：猪反义α(1，3)半乳糖转移酶转基因小鼠发育正常，但部分杂合体小鼠脾脏有细胞坏死特征。转基因小鼠细胞表面Gal表位数量明显减少。与野生型对照相比，转基因小鼠多种组织的细胞对人血清异种天然抗体的结合降低30％-60％，对补体的结合降低40％-50％。结论：通过反义基因抑制α(1，3)半乳糖转移酶的表达能有效降低人异种反应性。
