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正常和视神经损伤后Nogo(N-18)在金黄地鼠视网膜的表达
目的观察Nogo-A蛋白在金黄地鼠视神经受损后不同时间点视网膜各层的表达,探讨Nogo-A蛋白的分布. 方法采用眶内眼球后2mm视神经切断术,动物分别存活3d、5d、7d后,取眼球固定、冰冻后做水平切片,分别进行Nogo(N-18)抗体的免疫组织化学染色,显微镜观察Nogo-A蛋白的表达. 结果在视网膜各层均有不同程度的Nogo-A蛋白表达;存活3d、5d、7d后在节细胞层表达强烈,其中3d的反应明显;随着存活时间的延长,Nogo-A蛋白表达的节细胞层细胞数量逐渐下降. 结论 Nogo-A蛋白并非神经胶质所特有的分泌物质;视网膜Nogo-A蛋白表达的分布范围和表达程度与视神经受损后的时间相关.
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原代培养大鼠嗅球成鞘细胞Nogo(N-18)的共聚焦激光扫描显微镜观察
目的观察原代培养的成年大鼠嗅球成鞘细胞(OECs)Nogo(N-18)蛋白的表达,探讨Nogo与成鞘细胞促进神经再生作用的关系. 方法原代培养嗅球OECs,采用免疫组织化学和双标免疫荧光细胞化学技术,结合激光共聚焦扫描显微镜观察. 结果原代培养的嗅球OECs的Nogo(N-18)免疫细胞化学反应呈阳性,Nogo(N-18)蛋白主要分布于胞浆,而在胞膜及突起分布较少. 结论嗅球(OECs)含有Nogo-A蛋白,提示Nogo-18蛋白在嗅神经系统可能没有决定抑制轴突再生的作用.
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nogo基因及其相关蛋白与中枢神经再生的研究进展
哺乳动物体内大部分组织如肌肉、皮肤、肝脏和外周神经损伤后均有很强的再生能力,而大脑和脊髓组成的中枢神经系统(CNS)却很难再生,损伤后的轴突及神经元几乎不能再生,导致损伤后功能迟迟不能恢复.CNS缺乏自我再生和修复能力一直是神经科学界的难点和热点.
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大鼠PAG内Nogo-A在痛觉调制过程中角色的探索
目的:用脑内核团微量注射和免疫组化等方法,观察大鼠中脑导水管周围灰质( periaqueductal gray,PAG)内“勿动蛋白”-A(Nogo-A)、P物质(substanceP,SP)和降钙素基因相关肽(calcitoningene-related peptide,CGRP)表达的变化,研究探讨Nogo-A在痛觉调制过程中的角色,以及它在大鼠PAG内与CGRP、SP和内源性阿片系统在痛觉调制过程中的相互作用.方法:选用雄性SD大鼠32只,随机等分为4组:空白对照组8只,分别向PAG内注射0.9％生理盐水1μl;模型对照组、吗啡组和纳洛酮组各8只,首先单侧后爪掌心皮下注射1％的福尔马林0.1 ml复制炎症痛敏大鼠模型,3d后分别向PAG内注射等量0.9％生理盐水、吗啡或纳洛酮各1 μl,60 min后取大鼠大脑PAG区脑组织,采用免疫组化法观测各组大鼠PAG内Nogo-A、SP和CGRP免疫反应阳性神经元的表达差异.结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠PAG内Nogo-A的表达量显著降低(P＜0.01),CGRP及SP显著增高(P＜0.01)；与模型对照组比较,吗啡组大鼠PAG内Nogo-A的表达量显著增高(P＜0.01),CGRP及SP显著降低(P＜0.05),而纳洛酮组PAG内Nogo-A的表达量显著降低(P＜0.05),CGRP及SP显著增高(P＜0.05).结论:(1)炎症痛敏大鼠PAG内Nogo-A的表达量比正常降低,而CGRP及SP显著增高；(2)阿片肽可增加PAG内Nogo-A的表达,并降低CGRP及SP的表达.
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Nogo蛋白及其受体在中枢神经再生中的作用
Nogo蛋白是抑制动物中枢神经再生的髓鞘内活性分子,含有两个完全独立的具有抑制活性的结构域:位于细胞内的氨基-Nogo和位于细胞表面的Nogo-66.Nogo蛋白及其受体的发现是中枢神经损伤修复分子机制的重大突破.大多数Nogo分子分布于内质网膜,少数分布于细胞表面.Nogo蛋白、少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白通过Rho的激活而抑制神经元生长,而神经营养因子受体p75NTR是激活Rho的重要因素.Nogo-A抑制背根神经节神经元轴突生长及3T3成纤维细胞延伸生长,呈剂量依赖性,并能被单克隆Nogo-A抗体和AS Bruna所阻断.Nogo在新生儿缺氧缺血性脑损伤中的作用尚有待研究.
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局灶性脑缺血大鼠海马Nogo-A受体的动态表达
目的 探讨局灶性脑缺血大鼠海马Nogo-A受体(Nogo-recepter,NgR)的动态表达.方法 电凝右侧大脑中动脉建立大鼠局灶性脑缺血模型,免疫组织化学染色检测脑缺血后不同时间点缺血侧海马CA1、CA2和CA3区NgR表达.结果 缺血侧海马CA1和CA2区在脑缺血后第1天NgR表达上调,CA3区在第2天表达上调；第5天CA1、CA2和CA3区NgR表达均降至低；第28天CA1、CA2和CA3区NgR表达再次上调.结论 缺血侧海马NgR表达在不同区域呈现不同的变化特点,但总体变化趋势呈现出“两峰一谷”的现象,提示NgR在脑缺血后不同时期可能具备不同的功能.
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脑缺血再灌注恢复期大鼠梗死周围组织GFAP、NSE、SYN、Nogo-A表达与神经功能转归的相关性
目的 探讨脑缺血再灌注恢复期大鼠梗死周围组织胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、突触素(synaptophysin,SYN)、神经突生长抑制因子-A(neurite outgowth inhibito-A,Nogo-A)表达与神经功能转归的相关性.方法 线栓法制作大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)2 h再灌注模型,模型制作后28、35、42和49 d改良神经功能缺损评分(modified neurological severity score,mNSS),并采用免疫组化方法检测脑梗死周围组织GFAP、NSE、SYN、Nogo-A表达.结果 大鼠脑缺血再灌注后随着时间推移,mNSS评分逐渐下降,除第35天(5.11±0.737)与第42天(4.54±0.519)、第42天与第49天(4.29±0.488)无显著差异外,其余各时间点均有显著差异(P均<0.05).GFAP阳性细胞数量从第28天至第49天逐渐减少,其中第42天(51.00±13.59)和第49天(44.38±11.94)显著少于第28天(69.00±15.10)(P<0.05).NSE表达的累积光密度(integrated optical density,IOD)逐渐增高.第28天(6 218.57±1 864.25)与第42(9 414.00±2 491.12)和第49天(12 522.50 ±3 106.99),第35天(7 343.40±1533.35)与第49天差异显著(P均<0.05),其余各时间点无显著差异.SYN表达IOD逐渐增高,第49天(66 503.00±12 834.61)显著高于第28天(43 905.14 ±13 208.59)(P<0.05).Nogo-A阳性细胞数量逐渐减少,第49天(42.13±14.45)显著少于第28天(59.57±15.25)(P<0.05).GFAP表达与mNSSn评分呈正相关(r=0.993,P=0.007),NSE(r=-0.954,P=0.044)、SYN(r=-0.992,P=0.008)表达与mNSS评分呈负相关.结论 大鼠脑缺血再灌注后恢复期神经功能转归与GFAP表达下调、NSE和SYN表达上调相关.
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Nogo-66蛋白氨基酸肽的克隆及在原核细胞的表达
目的:克隆编码Nogo-66氨基酸多肽基因,构建原核重组表达载体,并诱导其在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达.方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增出编码Nogo蛋白环外-66氨基酸多肽基因,将其克隆于T载体PMD18-T,酶切鉴定后再亚克隆于原核表达载体pET-42a(+),酶切及测序证实序列正确后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白-Nogo-66.结果:克隆了编码Nogo蛋白环外-66氨基酸多肽基因,构建了融合蛋白的重组表达质粒,融合蛋白的表达随着时间延长增加.结论:获得了编码Nogo蛋白环外-66氨基酸多肽基因及其原核表达产物,对研究Nogo蛋白的生物学功能及其mAb的制备奠定基础.
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中枢神经系统轴突再生抑制蛋白及其信号转导通路
哺乳动物成年后中枢神经系统的再生能力明显下降,而外周神经仍保留一定的再生能力,这使人们认识到中枢神经系统再生能力差,除形成胶质斑痕是再生的物理障碍外,可能也因为中枢神经系统缺少神经生长因子,存在神经生长的抑制因子所致,科学家们也在寻找证据来证明这一假说.
关键词： 中枢神经系统轴突再生抑制蛋白 信号转导通路 Nogo蛋白 MAG OMgp -
Nogo与中枢神经再生
Nogo基因编码三种蛋白质:Nogo-A、Nogo-B、Nogo-C,它们对损伤后中枢神经系统(CNS)的再生具有抑制作用,Nogo受体(NgR)是一种糖基醇磷脂结合蛋白,是Nogo的一种功能性细胞表面受体,神经营养因子受体p75NTR是NgR的共受体,三者的相互作用介导了Nogo的中枢神经抑制活性.本文概述了Nogo、NgR和p75NTR在CNS再生抑制中的作用机制,各自的重要性,抑制的调节机制,以及目前研究的突破和疑点,并展望了未来研究和应用的前景.
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Nogo与中枢神经再生
Nogo蛋白是抑制成年动物中枢神经再生的髓鞘内活性分子,含有两个完全独立的具有抑制活性的结构域:位于细胞内的amino-Nogo和位于细胞表面的Nogo-66.Nogo蛋白及其受体的发现是中枢神经创伤性损伤修复分子机理研究的重大突破.本文概述Nogo及其受体的结构、功能和它们在中枢神经再生中的作用,并且展望其可能的临床应用前景.
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Nogo-A受体在局灶性脑缺血大鼠梗死灶周围皮层中的表达及细胞内定位
目的 探讨局灶性脑缺血大鼠梗死灶周围Nogo-A受体(NgR)的表达及细胞内定位.方法 电凝右侧大脑中动脉建立大鼠局灶性脑缺血模型,免疫组织化学染色检测脑缺血后第5、14、28天脑缺血大鼠梗死灶周围皮层NgR表达及其细胞内定位,并与假手术大鼠相应部位皮层NgR表达作比较.结果 脑缺血大鼠梗死灶周围皮层NgR表达第5天低于假手术大鼠,在第14、28天明显高于假手术大鼠.在假手术大鼠皮层、脑缺血大鼠皮层第5天NgR表达主要表达在神经胞体,脑缺血大鼠第14、28天皮层NgR轴突远端的表达增强.结论 梗死灶周围皮层NgR表达在缺血后的不同时期表达量及细胞内定位不同,可能与其功能有关.
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Nogo蛋白及其基因多态性与肿瘤发生发展相关性的研究进展
Nogo基因被命名为轴索生长抑制因子(Neurite growth inhibitor,又称RTN4),由其编码的Nogo蛋白是一种跨膜功能蛋白,属于网状蛋白家族成员之一.近年来,有关Nogo蛋白与疾病相关性研究成为人们关注的热点.Nogo蛋白分布广泛且具有抑制中枢神经系统(CNS)轴突再生和参与细胞凋亡等作用,因而Nogo蛋白在肿瘤细胞发生发展中可能起一定的作用[1～2].
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Nogo蛋白及其受体与中枢神经再生
成人中枢神经损伤后不能再生.除了与胶质疤痕的空间阻碍作用和促神经生长因子的缺乏以外,主要是由于中枢神经系统中存在着抑制神经细胞生长的抑制因子.其中,Nogo蛋白作为抑制中枢神经系统再生的重要的物质[1],越来越受到人们的重视.
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Nogo-A/B蛋白在RCS大鼠视网膜色素变性过程中的表达
目的 观察髓磷脂抑制蛋白Nogo-A/B在遗传性视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)遗传模型皇家外科学院大鼠( Royal college of surgeons rat,RCS)视网膜变性发展过程中的表达并探讨其意义.方法 按出生后视网膜变性的发展程度将RCS-p+(视网膜含色素的变性大鼠)分为P15d、P30d、P60d和P90d 4组,采用相应时期的RCS-rdy+p+(视网膜含色素的正常大鼠)作为对照,5只/时间点,利用免疫组织化学技术及免疫印迹检测2组(共40只)RCS视网膜上Nogo-A/B蛋白的表达趋势.结果 与对照组相比,①P15d、P30d RCS-p+大鼠视网膜各层结构和细胞数目无明显变化,仅节细胞数目轻微减少；P60d、P90d大鼠视网膜外核层(outer nuclear layer,ONL)和内核层(inner nuclear layer,INL)结构出现明显紊乱,细胞数目的减少以ONL和神经节细胞层(ganglion cell layer,RGC)层为主.②IH显示Nogo-A/B蛋白在RCS-p+大鼠各时间段视网膜表达均为阳性,P15d开始出现,随变性过程呈升高趋势,主要表达在INL和RGC层,阳性细胞数目显著高于对照组.③WB免疫印迹检测结果显示P15d、P30d、P60d和P90d Nogo-A蛋白表达量分别为(0.82737±0.212 92)、(1.110 19±0.089 99)、(1.315 52±0.028 57)、(1.268 81±0.080 42),与对照组相比有显著差异(P＜0.05).Nogo-B2蛋白与Nogo-A蛋白表达趋势一致,但总体表达量较低.结论 Nogo-A蛋白可能参与了视网膜色素变性过程中视神经损伤后的再生修复抑制.
关键词： 视网膜色素变性 Nogo蛋白 皇家外科学院大鼠(RCS) -
Nogo蛋白的羧基端与连接蛋白26相互作用及在小鼠内耳中的表达
目的 筛选和鉴定连接蛋白26(connexin 26, CX26)的相互作用蛋白质,并分析其在小鼠耳蜗的表达,探讨CX26在胞内核糖体合成后的运输、装配和在胞膜形成间隙连接的生理过程中可能相关的蛋白质.方法 应用酵母双杂交技术筛选CX26的相互作用蛋白质.聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)法扩增正常人GJB2(CX26)全长编码区,基因重组的方法定向克隆于第3代酵母双杂交系统的诱饵质粒pGBKT7,用构建的诱饵pGBKT7/CX26筛选人胎脑cDNA文库,获得CX26的相互作用蛋白质的初步阳性克隆,再用这些克隆分别与CX26酵母双杂交去除假阳性.对阳性克隆的插入子DNA进行测序、生物信息学分析.用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法分析相互作用蛋白质编码基因的mRNA在小鼠内耳的表达.结果 1个阳性克隆的插入子DNA全长867 bp,前525 bp为编码区.DNA序列及编码读框均与Nogo蛋白的编码基因RTN4的编码区终止密码子前525 bp(包括终止密码子)及终止密码子后非翻译区238 bp完全相同,编码Nogo蛋白的3个异构体Nogo-A、Nogo-B和Nogo-C的羧基端的174个氨基酸残基.RT-PCR分析示RTN4的mRNA在小鼠内耳表达.结论 Nogo蛋白的羧基端与CX26相互作用,Nogo蛋白在内耳表达.Nogo可能参与了CX26蛋白在内耳细胞的转运或间隙连接功能的生理过程.
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Nogo蛋白在心血管疾病中的研究进展
Nogo家族是由Reticulon 4基因编码的蛋白质产物,主要包括Nogo-A、Nogo-B和Nogo-C,研究证实其具有抑制神经轴突再生的作用.近年研究发现Nogo蛋白在心血管调控、细胞凋亡、抑制肿瘤生长等方面也具有重要作用.现就Nogo蛋白在心血管系统中的研究进展做一简要综述.
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Nogo蛋白在正常大鼠视神经视网膜的表达
目的:采用免疫荧光组织化学方法观察Nogo蛋白在正常视网膜视神经的表达分布.方法:正常大鼠5只,多聚甲醛灌注固定,摘取双侧带视神经约0.5 cm之眼球,冰冻切片,免疫荧光组织化学染色,激光共聚焦显微镜观察NogoA/B,NogoC的分布.结果:Nogo蛋白在正常视神经和视网膜水平切面均有表达,而且其分布不均匀,表达强度因组织层次不同而异.NogoA/B在视神经和视网膜的神经纤维层、节细胞层、内网层、内核层、外网层、外核层均出现,其中以节细胞层,内核层和外核层明显.NogoC在视神经,视网膜的神经纤维层,节细胞层,内网层,内核层表达较为强烈,外网层、外核层有少量表达.结论:Nogo蛋白在视网膜,视神经均有表达,其特点可为进一步研究中枢神经系统损伤后再生与修复提供新的思路.
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Nogo-66受体单链RNA干扰对大鼠脊髓半切损伤的治疗效应
目的 观察Nngo-66受体(NgR)单链RNA干扰(siRNA)对大鼠脊髓半切损伤的治疗效应. 方法 建立大鼠脊髓半切损伤模型,脑室内注射筛选出的有效NgR siRNA,采用运动功能评分、辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪、HE染色等方法,评价NgR siRNA对损伤脊髓的治疗效应. 结果 神经功能评分示,从第4周起,siRNA治疗组的运功功能恢复好于等渗盐水组和空白对照组,但差异无统计学意义.HRP逆行神经示踪示,治疗组多数可于脊髓前角见较多的标记细胞,与等渗盐水组和空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).HE染色示脊髓损伤后8周,等渗盐水组和对照组的损伤区纤维排列紊乱,siRNA组部分大鼠损伤区见有较连续的纤维通过.结论NgR siRNA可促进脊髓损伤后的神经再生修复.
