首页 > 文献资料
-
大鼠胃壁细胞GnRH受体的定位及GnRH类似物对壁细胞内钙的影响
目的观察促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)受体在培养的大鼠胃粘膜壁细胞中的定位,并探讨GnRH类似物阿拉瑞林(alarelin)对壁细胞内游离钙动员的机制.方法采用免疫组织化学和原位杂交技术;应用Ca2+指示剂Fluo-3-AM作为细胞内钙离子的荧光探针,对负载培养的胃壁细胞,应用激光共聚焦显微镜技术检测单个细胞内钙荧光强度的变化.结果大鼠胃壁细胞呈GnRH受体免疫反应阳性,阳性物质位于细胞质,细胞核为阴性;同样壁细胞内可检测到GnRH受体mRNA杂交信号,阳性物质位于细胞质,细胞核为阴性;胞内Ca2+浓度变化为:1.在Hank液中,GnRH类似物浓度为10-8、10-7、10-6 mol/L时,胃壁细胞内Ca2+浓度逐渐升高,其峰高(峰值减去静息值)分别为7.1±1.4、12.1±1.7、16.8±2.2.其达峰时间也逐渐增快,分别为34.2±6.4s、18.9±1.2s、10.4±2.3s.相邻两组间其峰高及达峰时间均存在显著性差异(P＜0.05),且呈明显剂量依赖性.2.在D-Hank液(去除外钙)中,阿拉瑞林可轻度短暂升高胞内Ca2+;用内罗啶孵育后再加入阿拉瑞林也可轻度短暂升高胞内Ca2+,二者无显著性差异.3.当用拉西地平孵育后再加入阿拉瑞林,可明显抑制胞内Ca2+的增加.4.当用PLC(磷酸脂二酶)抑制剂和PKC(蛋白激酶C)抑制剂孵育后,再加阿拉瑞林,其胞内Ca2+升高仍受到抑制,明显小于单独应用10-6 mol/L的阿拉瑞林组(P＜0.01).结论大鼠胃壁细胞能自身表达GnRH受体;GnRH类似物可明显升高胃壁细胞内Ca2+浓度,且胞内Ca2+的增加主要源于外钙的内流,部分源于内钙的释放.其中细胞外钙的内流主要是通过L-型钙通道实现的.
-
大鼠胃底平滑肌细胞5-HT受体的信号转导通路的研究
目的以5-HT引起胞内Ca2+变化为指标,研究大鼠胃底平滑肌细胞5-HT受体的信号转导机制.方法采用Ca2+指示剂Fluo-3/AM负载培养的胃底平滑肌细胞(SFSMC),共聚焦显微术检测细胞内钙荧光强度的变化.结果基础状态下SFSMC[Ca2+]i荧光强度(fluorescence intensity,FI)为26.4±1.5,5-HT 10 μmol*L-1使荧光强度缓慢升高;这一作用与细胞外钙内流和内钙释放有关; 10 μmol*L-1米安舍林(mianserin)可部分拮抗5-HT升高[Ca2+]i的作用,钙拮抗剂拉西地平(lacidipine)、G蛋白拮抗剂NEM均能完全抑制5-HT升高[Ca2+]i的作用;5-HT引起[Ca2+]i的升高被PLC抑制剂部分地取消;PKC激动剂拮抗了5-HT引起的钙动员,而PKC特异性抑制剂D-鞘氨醇取消了这一抑制作用.结论 5-HT部分通过激动了胃底平滑肌细胞的G-蛋白偶联的5-HT2B受体引起细胞去极化,从而激发L型钙通道使外Ca2+内流,并促进SR上的ryanodine受体的开放,引起[Ca2+]i升高.而这一升高[Ca2+]i的作用又受到PLC和PKC的调控.
-
氟哌啶醇季铵盐衍生物对血管平滑肌细胞钙离子的影响
目的研究氟哌啶醇季铵盐衍生物(F2)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞内钙离子荧光强度的影响。方法用Ca2+荧光染料Fluo-3-AM 负载细胞，在激光扫描共聚焦显微镜上测定细胞内游离钙的变化。结果在含氯化钙（1.26 mmol*L-1）的细胞外液中，30 mmol*L-1 KCl使细胞内钙荧光强度迅速增强，4种浓度F2（0.1、1、10、100 μmol*L-1）作用3 min时，使KCl诱导细胞内钙荧光强度分别降至64%±9%，(n=16, P<0.05)、16%±5%，(n=20,P<0.01)、0.6%±0.8%，(n=20,P<0.01)、0.1%±0.3%，(n=15,P<0.01)，呈量效依赖关系。结论 F2通过阻断细胞膜电压依赖性钙通道降低平滑肌细胞内钙浓度。
关键词： 氟哌啶醇季铵盐 血管平滑肌细胞 激光扫描共聚焦显微镜 Fluo-3-AM 钙 -
5-羟色胺对培养胃底平滑肌细胞内游离钙动员的影响
目的研究5-HT诱导胃底平滑肌细胞内钙动员的机制. 方法采用Ca2+指示剂Fluo-3/AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的胃底平滑肌细胞，共聚焦技术检测细胞内钙荧光强度的变化. 结果基础状态下SFSMC［Ca2+］i荧光强度( FI)为264±15，5-HT 10 μmol*L-1使荧光强度的变化ΔFI为16.5±2.6；细胞外无钙时,5-HT升高［Ca2+］作用被减弱,但除去细胞外钙，并使用内罗啶(ryanodine)孵育后，5-HT不再引起荧光强度的变化；10 μmol*L-1米安舍林（mianserin）可部分拮抗5-HT升高［Ca2+］i的作用，赛更定(cyprohetadine)不能抑制5-HT升高的胞内钙；Mn9202和拉西地平（lacidipine）均能完全抑制5-HT升高［ Ca2+］i的作用. 结论 5-HT可通过促进外钙内流及钙池（SR）释放使［Ca2+ ］i升高；在胃底平滑肌5-HT升高胞内钙部分通过5-HT2受体，而不是通过5-HT1C受体；5-羟色胺通过L 型钙通道促外钙内流；二氢吡啶类钙拮抗剂能通过阻滞L型钙通道，而完全抑制5-HT促胞内钙升高的作用.
