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长期酒精暴露对SMS2-/-小鼠肝脑的损伤及机制
目的 观察长期酒精暴露引起的肝脑损伤与氧化应激的关系,探讨酒精引起多系统损伤的机制,神经酰胺在酒精暴露诱导海马应激损伤中的调节作用.方法 建立C57BL/6J野生小鼠和神经鞘磷脂合成酶2基因敲除(SMS2--/-)小鼠酒精暴露模型,利用HE和Masson染色观察肝脏细胞和结构变化,透射电子显微镜观察肝脏超微结构变化,免疫荧光染色法观察对照组与模型组小鼠海马CA1区氧化应激引起的阳性细胞数量变化,免疫印迹技术检测海马组织c-Fos、核因子-κB(NF-κB)激活蛋白的相对表达量.结果 酒精暴露导致野生型和SMS2--/-小鼠肝细胞脂肪变性和肝纤维化,并有Mallory小体形成和炎症细胞浸润.免疫组织化学染色显示,酒精暴露后野生型和SMS2--/-小鼠海马c-Fos、NF-κB阳性细胞表达增多(P＜0.01)且具有剂量依赖性;与相同处理条件的野生型小鼠相比,SMS--/-小鼠海马c-Fos、NF-κB阳性细胞表达较多(P＜0.05).免疫印迹技术检测各组间小鼠海马组织c-Fos、NF-κB蛋白相对表达量与上述结果一致.结论 长期酒精暴露引起肝脏和神经系统损伤的病理基础是氧化应激和炎症反应;神经酰胺参与酒精暴露诱导与促进肝脑细胞损伤的过程;酒精、胰岛素抵抗和神经酰胺相互作用造成肝脑损伤.
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长期酒精暴露引起小鼠胰岛素抵抗:神经酰胺的可能作用
目的 探讨长期酒精暴露与胰岛素敏感性之间的关系并探讨其相关的分子机制;观察神经酰胺在酒精引起胰岛素抵抗过程中的可能作用.方法 建立C57BL/6J野生型(WT)小鼠和神经鞘磷脂合成酶2基因敲除(SMS2-/-)3月龄小鼠的长期酒精暴露模型,两基因型小鼠又分为对照组、中剂量酒精组和高剂量酒精组,共计90只.建模5个月后,用血糖仪测定小鼠空腹血糖值,用酶学法检测血清胰岛素浓度,并计算胰岛素抵抗指数.利用免疫荧光染色法观察各组小鼠海马CA1区胰岛素受体底物2(IRS2)阳性细胞表达情况,免疫印迹法检测小鼠海马组织IRS2蛋白的相对表达量.结果 1.长期酒精暴露导致WT和SMS2-/-小鼠空腹血糖值和胰岛素抵抗指数升高,且具有剂量依赖性(P＜0.05);但SMS2-/-小鼠随着酒精剂量的增加胰岛素抵抗指数升高幅度较小.2.免疫组织化学染色显示,酒精暴露诱导WT和SMS2-/-小鼠海马IRS2阳性细胞数降低,有剂量依赖性(P＜0.05);与相同处理条件的WT小鼠相比,酒精诱导SMS2--小鼠海马IRS2阳性细胞数降低增多(P＜0.05).3.免疫印迹法检测各组间小鼠海马组织IRS2蛋白相对表达量与上述结果一致.结论 长期酒精暴露可引起胰岛素抵抗,IRS2蛋白表达降低,且存在剂量依赖性,因此酒精导致IRS2表达下降可能是胰岛素抵抗的分子机制之一;神经酰胺可能参与酒精暴露诱导IRS2表达下降的过程,且有促进胰岛素抵抗形成的作用.
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孕期酒精暴露诱导神经鞘磷脂合成酶2基因敲除小鼠海马苔藓细胞凋亡
目的 探讨神经酰胺对孕期酒精暴露所诱导的小鼠神经细胞凋亡的影响.方法 建立神经鞘磷脂合成酶2基因敲除(SMS-/-2)小鼠和野生型(WT)小鼠的孕期酒精暴露模型,将出生后的不同基因型仔鼠(共360只)分为对照组和酒精组.用酶学法检测生后0 d(P0)仔鼠血清神经鞘磷脂(SM)含量,利用免疫荧光染色法观察对照组与模型组各年龄点仔鼠齿状回苔藓细胞凋亡数量的变化,免疫印迹法检测P7、P14仔鼠海马组织Caspase-8、Caspase-3激活蛋白的相对表达量.结果 酒精暴露后仔鼠血清SM水平降低,且具有剂量依赖性(F=41.08,P<0.05);SMS-/-2仔鼠血清SM水平低于同组WT仔鼠(F=53.34,P<0.01).酒精诱导WT和SMS-/-2仔鼠苔藓细胞凋亡(F=15.61,P<0.05),有剂量依赖性和长时程效应,与同年龄、相同处理条件的WT仔鼠相比,SMS-/-2仔鼠苔藓细胞凋亡数量较多(F=11.72,P<0.05).Western blotting检测结果 与免疫荧光结果 一致.结论 SMS2基因缺失使血清SM水平降低,可引起神经酰胺在体内蓄积;神经酰胺促进酒精暴露诱导神经细胞凋亡的过程;孕期酒精暴露主要通过死亡受体途径诱导神经细胞凋亡的发生.
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急性酒精暴露脑功能改变的静息态fMRI
目的 通过静息态fMRI检测健康成年人饮酒前后脑分数低频振幅(fALFF)的改变,探讨急性酒精暴露后脑功能变化特点.方法 共纳入健康成年男性19名,通过3.0T MR仪器采集饮酒前后脑静息态功能数据,计算标准化fALFF值,并进行配对t检验比较其差异.结果 酒精暴露下fALFF值明显降低的脑区包括:右侧角回/枕中回、右侧额上回眶部、右侧额上回背内侧(P均＜0.001);fALFF值增加的脑区包括:右侧颞上回后部、右侧中央岛盖,右侧颞上回颞极部(P均＜0.001).结论 健康成年人饮酒后静息态脑网络发生广泛性改变,并存在功能增强和减弱脑区.
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长期酒精暴露对小鼠海马及大脑皮质神经细胞的影响
探讨长期酒精暴露时,小鼠中枢神经系统神经细胞的数量、形态及其超微结构等的改变.选择60天左右的成年小鼠,建立长期酒精暴露动物模型.采用免疫细胞化学及DiI(1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethy lindocarbocyanine perchlorate)散射等方法标记中枢神经系统神经细胞核抗原、树突棘及突触等结构.结果显示长期酒精暴露能够促进小鼠中枢神经系统中神经细胞凋亡,同时抑制神经干细胞的增殖,从而使中枢神经系统神经细胞数量减少.长期酒精暴露还可导致神经细胞的树突棘密度降低,神经细胞之间的连接结构——突触的数量减少,并且突触超微结构也可出现一定的改变.神经细胞及其树突棘的密度以及突触超微结构的改变提示神经细胞功能可能低下,它可能是酗酒引发神经系统损害的原因之一.
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腺苷A2A受体在孕期酒精暴露抑制新生大鼠RRDA中的研究
目的 探讨腺苷A2A受体在孕期酒精暴露中所致子代呼吸抑制中的作用机制.方法 使用电生理方法研究腺苷A2A受体在孕期酒精暴露抑制予代延髓呼吸中枢基本节律性呼吸放电(rhythmic respiratory discharge activities,RRDA)中的作用,使用Western blot和qRT-PCR检测延髓呼吸中枢面神经后核内侧区神经元腺苷A2A受体(adenosine A2A receptor)以及受体mRNA表达的变化.结果 腺苷A2A受体参与孕期酒精暴露对子代延髓呼吸中枢抑制作用,孕期酒精暴露降低腺苷A2A受体功能.结果 表现为酒精暴露组延髓面神经后核内侧区神经元腺苷A.受体水平表达下调,P＜ 0.05,有统计学意义.结论 下调腺苷A2A受体和受体mRNA表达而降低腺苷A2A受体对RRRDA的调节作用可能是孕期酒精暴露抑制子代延髓中枢呼吸功能的机制之一.
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凹顶藻萜类化合物对酒精暴露大鼠氧化损伤保护作用
目的 观察凹顶藻萜类化合物(Laumncia tetpenoids extract,LTE)对酒精暴露大鼠的抗氧化水平及HO-1酶活性的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 60只雄性Wistar大鼠随机分为6组.酒精模型组(B组)给予乙醇4.8 g/kg bw·d灌胃;LTE低、中、高剂量干预组(C、D、E组)分别给予LTE 25、50、100 me/kg bw·d;甘利欣药物组(F组)给予甘利欣200 mg/kg bw·d灌胃.空白对照组(A组)给予等体积蒸馏水.除空白组外,酒精剂量均同模型组.实验进行6w.分别测定血清及肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧物酶(GSH-Px)活性,丙二醛(MDA)含量.对肝组织切片进行免疫组化染色,观察肝内血红素氧化酶-1(HO-1)免疫阳性细胞的组织分布,并对其灰度值和光吸收密度值进行定量分析.结果 与A组比,B、F组血清及肝匀浆SOD活力下降, C、E组血清SOD活力比B组升高,有一定的量效关系.B组大鼠血清及肝匀浆GSH-Px活力较A组下降,而D组较B组显著升高.与A组比,B组血清及肝匀浆MDA含量较A组升高,而D、E组血清和肝匀浆MDA含量较B组显著降低,且有一定的量效关系.与A组比,B组HO-1活力显著降低.D、E、F组HO-1活力比B组升高明显.结论 LTE可增强酒精暴露大鼠体内抗氧化的活性,减少脂质过氧化产物的生成,诱导HO-1活性增强,从而对酒精造成的机体氧化损伤表现出相应的保护效应.
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海藻萜类化合物对酒精暴露大鼠抗氧化作用
目的 观察凹顶藻萜类化合物(LET)对酒精暴露大鼠的抗氧化作用,并探讨可能的机制.方法 60只雄性Wistar大鼠随机分为6组.酒精模型组给予乙醇7.2g/(kg·d);LET低、中、高剂量干预组分别给予LET 25,50,100 mg/(kg·d);甘利欣药物组给予甘利欣200 mg/(kg·d)灌胃;空白对照组给予等体积蒸馏水.除空白组外,酒精剂量均同模型组.实验进行7 d后,取血,留取肝组织.电镜观察肝组织超微结构,检测血清和肝匀浆中抗氧化酶的活力.结果 电镜下观察到酒精模型组肝细胞内线粒体肿胀,Kupffer细胞周围可见胶原纤维.LET各干预组胞浆内可见少量脂滴.LET低剂量干预组血清及肝匀浆超氧化物歧化酶(SOD)活力分别为(282.39±78.89)、(294.87±162.96)高于模型组[(90.73±48.52)(208.64±43.32)](P＜0.05);LET中剂量干预组血清及肝匀浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力分为(245.76±10.64)、(1474.11±402.38),LET、高剂量干预组GSH-Px活力(258.67±7.15)、(1877.24±643.O),均高于模型组(218.75±10.24)(953.56±341.84)(P＜0.05).结论 LET可增强酒精暴露大鼠体内抗氧化酶的活性:改善超微结构的病理损伤,从而对酒精造成的机体氧化损伤起保护作用.
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凹顶藻萜类化合物对酒精暴露大鼠肝脏bcl-2和bax表达的影响
目的 了解凹顶藻萜类化合物(LTE)对酒精暴露大鼠肝脏超微结构及凋亡相关基因bcl-2和bax表达水平的影响.方法 Wistar大鼠随机分组,每日予50%酒精4.8 g·kg-1·d-1灌胃,建立酒精暴露模型;试验组每日分别给予LTE 25、50、100 mg/kg灌胃给药;正常对照组给予等体积蒸馏水.应用透射电镜观察大鼠肝细胞超微结构的变化,免疫组化染色法检测bcl-2和bax表达水平及bcl-2/bax值.结果 酒精模型组大鼠肝细胞脂肪变形,电镜下观察到轻度炎性细胞浸润,线粒体肿胀变形,粗面内质网扩张断裂,试验组的肝细胞破坏程度均有不同程度减轻,bcl-2表达水平显著升高,bax表达水平显著降低,bcl-2/bax比值升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 一定剂量LTE可明显改善酒精暴露大鼠肝细胞超微结构病理变化,并使bcl-2/bax上调,从而减轻酒精性肝损伤.
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孕期酒精暴露对子代小鼠视皮质N-SMase/Cer的影响
目的 探讨孕期酒精暴露后子代小鼠大脑视皮质神经酰胺(ceramide,Cer)和中性鞘磷脂酶(sphingomyelinase,N-SMase)的变化趋势.方法 通过建立孕期酒精暴露模型鼠,利用免疫荧光技术和荧光分光光度法检测各实验组Cer和N-SMase的变化趋势.结果 孕期酒精暴露后子代小鼠大脑视皮质神经细胞Cer含量和N-SMase酶活性较对照组明显增加,差异具有统计学意义.结论 孕期酒精暴露可导致子代小鼠视皮质神经细胞N-SMase酶活性增加,水解鞘磷脂生成Cer,终诱导细胞凋亡.
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探讨长期酒精暴露对视网膜的损伤
目的：探讨患者长期酒精暴露对视网膜的损伤。方法选取野生型(wild type,WT)小鼠27只,酒精暴露建立动物模型,利用荧光抗体染色法观察视网膜胶质细胞的变化。结果长期酒精暴露后,小鼠视网膜胶质细胞出现损伤,如Müller 细胞 GS 染色减弱、星形胶质细胞数量减少,并且呈剂量依赖性(P <0.05)。结论长期酒精暴露可通过改变视网膜的胶质细胞 Müller 细胞和星形胶质细胞的数量和形态对视网膜造成损伤,且呈剂量依赖性。
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酒精暴露对肺损伤的影响机制研究进展
酒精暴露可造成肝和胃损伤,有研究表明它对肺部也造成极大损害.本文主要阐述酒精暴露对肺损伤的影响,主要从以下三方面进行讨论:(1)酒精暴露直接损伤肺,分别通过降低纤毛的清除功能、抑制咳嗽和呕吐反射、增加口咽部定植菌、损伤肺泡上皮Ⅱ型细胞功能以及影响肺代谢等途径损伤肺.(2)酒精暴露通过影响免疫系统间接损伤肺,主要抑制先天性免疫细胞(肺泡巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞)的功能以及适应性免疫细胞(T细胞)的功能.(3)酒精暴露通过"肠-肝-肺轴"间接损伤肺,肝脏是肠道后的第一道生理屏障,肺脏是肠道后的第二道生理屏障.以期为酒精性肺损伤的防治提供策略和方法.
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孕期酒精暴露致子代小鼠心肌致密化不全样改变
目的 探讨孕期酒精暴露致子代小鼠心肌致密化不全样改变的关系.方法 对孕期3.5～18.5 d的母鼠用56％酒精以5 mL/kg的剂量灌胃,收集孕期第19.5天子代小鼠心脏标本,电子透射显微镜观察肌丝、线粒体及肌浆网等心肌细胞超微结构,HE染色观察心室肌层结构,小鼠心脏超声心动图观察成年鼠心脏舒缩功能及心室肌层改变.结果 实验组子代心脏电镜下发现肌丝排列紊乱、溶解的现象;31.25％子代小鼠(5/16)的左心室肌呈非致密化样改变[病变组N/C值为(2.49±0.68),对照组N/C值为(0.62±0.23);t=10.397,P=0.000],且心脏体积变小,病变室腔明显扩大;成年后心脏超声提示实验组小鼠心功能减退、室间隔/左室后壁增厚.结论 孕期大量酒精暴露可致子代小鼠心室肌出现高度肌小梁化及心肌压实缺乏等改变,孕期酗酒可能是子代心肌致密化不全的病因之一.
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小鼠孕期酒精暴露可诱导仔鼠齿状回苔藓细胞的丢失
目的:探讨小鼠孕期酒精暴露对仔鼠齿状回苔藓细胞的影响,并进一步观察神经鞘磷脂合成酶2基因敲除(sphingomyelin synthase 2 knockout,SMS2-/-)与孕期酒精暴露和苔藓细胞丢失之间的关系.方法:采用PCR法对各分组仔鼠进行鉴定,利用SMS2-/-小鼠建立孕期酒精暴露模型,收集P14仔鼠,进行水迷宫实验,观察仔鼠寻台时间；然后利用免疫荧光染色法观察各分组仔鼠齿状回苔藓细胞数量的变化,免疫印迹技术检测P14仔鼠海马组织GluR2/3蛋白的相对表达量.结果:(1)与对照组相比,酒精组仔鼠的寻台时间相对较长(P＜0.05),而SM2-/-组仔鼠的寻台时间与野生组无明显的差异(P＞0.05)；(2)酒精组仔鼠齿状回GluR2/3的阳性细胞数明显少于对照组(P＜0.05),且SMS2基因敲除后,与野生组仔鼠相比,SMS2-/-组仔鼠齿状回GluR2/3的阳性细胞数无明显差异(P＞0.05).结论:(1)酒精可诱导齿状回苔藓细胞的丢失,且降低GluR2/3的阳性表达；(2)SM2基因的敲除对酒精诱导苔藓细胞丢失的作用相对较小；(3)苔藓细胞的丢失在一定程度上降低近期记忆功能,酒精可促进记忆功能的恶化.
