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拓扑酶抑制剂ISO-1对小鼠胚泡植入的影响
目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)拓扑酶抑制剂ISO-1对小鼠胚泡植入的影响及其作用机制.方法 将150只妊娠3d小鼠随机分为5组,即低、中、高剂量组及1%二甲基亚砜(DMSO)和生理盐水(NS)两个对照组.低、中、高剂量组分别按2、6、18 mg/kg一次性腹腔注射ISO-1,对照组注射等量1%DMSO或NS;妊娠4d各组小鼠处死一半,取出子宫进行HE染色,免疫组织化学SP法检测MIF蛋白的表达,原位杂交检测MIF mRNA的表达;妊娠8d处死另半数妊娠小鼠,观察胚胎数,测量子宫脏器系数.结果 与对照组比较,低、中剂量组小鼠胚胎数和子宫脏器系数差异不显著(P>0.05);高剂量组胚胎数显著提高(P<0.05),而子宫脏器系数差异不显著(P>0.05);光镜观察未发现各组妊娠小鼠子宫内膜结构的明显差异;MIF蛋白和mRNA主要表达于小鼠子宫内膜的基质细胞团,但实验组阳性细胞的吸光度值与对照组相比差异不显著(P>0.05).结论 ISO-1可能具有促进小鼠胚泡植入的作用,且此作用具有一定的剂量依赖性;ISO-1可能通过拮抗MIF的生物学作用促进小鼠胚泡的植入.
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ISO-1对结直肠癌生长和微血管形成的影响
目的 观察选择性巨噬细胞移动抑制因子(MIF)互变异构酶活性抑制剂ISO-1对结直肠癌生长及其微血管形成的影响,并探讨其可能机制.方法 MTT法检测不同浓度ISO-1(0.01-100umol/L)在不同时间点(24、48和72 h)对CT26细胞增殖的影响.盲肠造疝原位移植瘤块术建立小鼠结直肠癌模型.将30只成功建模小鼠随机分为3组,分别每周两次腹腔注射相同体积ISO-1(0.2 ml,20 mg/kg)、5%DMSO和无菌生理盐水(NS).治疗后每周两次观察小鼠盲肠肿瘤大小,第4周时处死小鼠.ELSIA法测定小鼠血清中VEGF浓度;CD31染色标记血管内皮细胞测定肿瘤微血管密度(MVD).结果 在体外,ISO-1明显抑制CT26细胞增殖.在体内,ISO-1明显抑制小鼠肿瘤生长,第4周ISO-1组和DMSO组的抑瘤率分别为25.22%和9.65%,差异有统计学意义(P<0.01);并且,ISO-1组移植瘤质量明显小于DMSO组[(1.50±0.14)g比(1.80±0.14)g,P=0.017];与DMSO组比较,ISO-1降低小鼠血清中VEGF的水平[(14.62±6.49)ng/L比(63.34±10.22)ng/L,P<0.01]及肿瘤组织MVD[(16.6±3.7)比(35.8±7.3),P=0.002].结论 ISO-1抑制结直肠癌细胞增殖及原位移植瘤生长,其机制可能为LSO-1抑制MIF生物学活性,从而抑制肿瘤细胞增殖、下调VEGF表达与MVD.
关键词： 结直肠肿瘤 巨噬细胞移动抑制因子 血管生成抑制剂 ISO-1 微血管密度 -
巨噬细胞移动抑制因子抑制剂对妊娠晚期大鼠急性坏死性胰腺炎胰腺及胎盘损伤的保护作用及量效关系
目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)抑制剂ISO-1腹腔注射给药对妊娠晚期大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠胰腺和胎盘的保护作用及其量效关系.方法 SPF级妊娠晚期SD大鼠30只,随机(随机数字法)分为5组(n=6):假手术组(SO组)、ANP组、ISO-1预处理低剂量组(1.75 mg/kg,T1组)、中剂量组(3.5 mg/kg,T2组)和高剂量组(7.0 mg/kg,T3组).胆胰管逆行注射5％牛磺胆酸钠制备ANP模型.预处理组于造模前30 min经腹腔按低、中、高剂量注射溶解IOS-1的10％DMSO(2 mL/kg)溶液,SO组、ANP组于造模前30 min经腹腔注射10％ DMSO(2 ml/kg),术后6 h处死大鼠.测定大鼠血清中AMY、LIP、ALT及AST水平,光镜下观察大鼠胰腺、胎盘的组织病理变化.多个样本均数比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验.结果 ANP组AMY、LIP、ALT和AST的水平(U/L)分别为(7 101.4±1 032.3)、(2 939.0±638.8)、(240.3±50.3)和(472.6 ±27.5),高于SO组的(2 268.7±293.8)、(681.1±109.9)、(56.4±15.3)和(110.9±15.5),差异具有统计学意义(P＜0.05);T1组AMY、LIP、ALT、AST的水平(U/L)为(4 349.5±439.5)、(1 968.9±515.2)、(155.0±41.8)和(373.7 ±64.9),低于ANP组,差异具有统计学意义(P＜0.05);T2组AMY、LIP、ALT、AST的水平(U/L)为(3 459.7±459.2)、(1 268.6±367.8)、(110.5±20.6)和(281.8±66.8),低于T1组,差异具有统计学意义(P＜0.05);T3组AMY、LIP、ALT、AST的水平(U/L)为(3 288.4±583.7)、(1198.1 ±328.5)、(100.6±13.2)和(272.9±66.5),同T2组比较差异无统计学意义(P＞0.05).ANP组胰腺、胎盘的病理评分分别为(12.3±1.5)分和(6.3±0.8)分,高于SO组(4.7±1.2)分和(0.5±0.5)分,差异具有统计学意义(P＜0.05);T1组胰腺、胎盘病理评分为(10.5±1.6)分和(5.1±0.7)分,低于ANP组,差异具有统计学意义(P＜0.05);TT2组胰腺、胎盘病理评分为(8.3±1.0)分和(3.0±0.6)分,低于T1组,差异具有统计学意义(P＜0.05);T3组胰腺、胎盘病理评分为(8.0±1.4)分和(2.8±0.8)分,同T2组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 腹腔给予MIF抑制剂ISO-1对妊娠晚期大鼠A NP大鼠胰腺及胎盘具有保护作用,T2组(3.5 mg/kg)为改善妊娠晚期ANP大鼠胰腺及胎盘损伤安全、有效的佳剂量.
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巨噬细胞移动抑制因子在盐敏感性高血压大鼠肾损伤中的表达及意义
目的 研究盐敏感性高血压大鼠肾损伤中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的变化及MIF抑制剂(ISO-1)对肾脏的保护作用.方法 40只健康雄性SD大鼠,行左肾摘除术后存活30只,随机分为3组:空白组8只,皮下注射等量的植物油,饮用自来水.其余用作造模:皮下注射醋酸去氧皮质酮(DOCA)油剂(30mg·kg-1·周-1),饮用1％ NaCl,0.2％KCl盐水,8周后取其中造模成功的大鼠16只,随机分为模型组和干预组,每组8只.第9周开始干预组以ISO-1 200 μg/kg隔日皮下注射,模型组和空白组以等量的生理盐水皮下注射,持续4周.各组大鼠每周监测收缩压.于0、4、8、12周检测24 h尿蛋白定量.实验完成后处死大鼠,取右肾标本,做HE染色后观察肾脏组织病理改变,半定量分析肾小管的损伤程度.Western印迹法检测肾组织中MIF蛋白的表达.结果 12周时,与空白组比较,模型组的收缩压[(112.41 ±0.87)mm Hg vs(175.12 ±0.89) mm Hg],24 h尿蛋白量[(3.53±0.30)mg vs(19.66 ±0.48)mg],MIF的表达量[(0.0515±0.0005) vs (0.6525±0.0282)]明显增高(P均＜0.05),肾脏尤其肾小管的病理损伤较空白组明显加重;与模型组比较,干预组的收缩压[(175.12 ±0.89)mm Hg vs (139.23±1.12)mm Hg],24 h尿蛋白量[(19.66 ±0.48)mg vs(7.71±0.84)mg],MIF的表达量[(0.6525±0.0282)vs(0.5564 ±0.0007)]明显降低(P均＜0.05),肾脏尤其肾小管的病理损伤较模型组减轻.结论 MIF可能参与盐敏感性高血压大鼠肾脏损伤的过程,ISO-1可减轻MIF对肾脏的损伤,保护肾脏.
关键词： 盐敏感性高血压 肾损伤 巨噬细胞移动抑制因子 ISO-1 -
ISO-1在卵巢癌侵袭中的作用
目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子MIF特异抑制剂(S,R)-3-(4-羟苯基)-4,5-二氢-5-异噁唑乙酸甲酯( ISO-1)对卵巢癌细胞增殖、侵袭的作用以及对血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factorreceptor-2,VEGFR-2)的影响,为卵巢癌CD74靶向治疗奠定基础.方法 不同浓度ISO-1作用于人卵巢癌细胞SKOV3、A2780,对照组以相应浓度的稀释液处理.MTT法检测卵巢癌细胞增殖,L-多巴色素甲酯测定M IF互变异构酶活性,微孔迁移法检测卵巢癌细胞体外侵袭,RT- PCR检测mRNA表达情况.结果 ISO-1能显著抑制人卵巢癌细胞SKOV3、A2780的增殖及其MIF互变异构酶活性(P＜0.05),且两者呈正相关性(SKOV3:r=0.841,P＜0.01；A2780:r=0.862,P＜0.01)；50 μmol/L ISO-1作用于卵巢癌细胞SKOV3、A2780细胞24 h后,其穿透聚碳酸酯膜的能力显著降低(P＜0.05),同时卵巢癌细胞的CD74、VEGFR-2的mRNA水平显著降低(P＜0.05).结论 ISO-1通过抑制CD74的活性下调VEGF、VEGFR-2的表达,从而抑制卵巢癌细胞的增殖及侵袭.
关键词： ISO-1 卵巢癌细胞 巨噬细胞移动抑制因子 血管内皮生长因子受体-2 CD74 -
ISO-1对糖尿病大鼠心肌中巨噬细胞游走抑制因子表达的影响
目的:检测巨噬细胞游走抑制因子(MIF)在糖尿病大鼠心肌中的表达,探讨MIF在糖尿病心肌病变中的作用和用ISO-1[(S,R)-3-(4-hydroxypheny l)-4,5-dihydro-5-ISO-1xazole acetic acid methyl ester]干预后对MIF表达水平的影响及意义.方法:雄性SD大鼠30只,随机分为正常对照(NOR)组、糖尿病(DM)组和ISO-1组,每组各10只.用超声多普勒观察大鼠心脏左室舒张功能及免疫组织化学染色法检测各组大鼠心肌中MIF的表达.结果:与NOR组比较,DM组与ISO-1组舒张早期心室充盈速度大值(E值)与舒张晚期心室充盈速度大值(A值)的比值(E/A)明显降低(P＜0.01),且DM组低于ISO-1组(P＜0.01)；NOR组心肌MIF表达水平显著低于DM组及ISO-1组(P＜0.01),且ISO-1组低于DM组(P＜0.01).结论:MIF可能参与糖尿病心肌病的发生,其表达水平对预测心脏左室舒张功能障碍有重要价值,早期应用MIF抑制剂可能延缓糖尿病心肌病的发生,具有潜在治疗价值.
关键词： 糖尿病心肌病 巨噬细胞游走抑制因子 ISO-1 -
背根神经节巨噬细胞迁移抑制因子参与调控神经病理性疼痛的机制研究
目的 探讨脊髓背根神经节(DRG)巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)对神经病理性疼痛的作用及可能的调控机制.方法 成年雄性SD大鼠随机分为3组(n=8):假手术组(Sham组)、坐骨神经结扎(CCI)模型对照组(以下简称CCI组)、ISO-1组(CCI+鞘内注射ISO-1).鞘内置管5 d后予以左侧坐骨神经结扎.CCI组和ISO-1组连续14 d鞘内注射10％DMSO 10μl或含ISO-130μg的DMSO 10μl,每天1次.在术前1天,术后第1、3、5、7、10及14天(给药2 h后)测定机械痛阈值;在第7和14天取大鼠DRG,ELISA检测肿瘤坏死因子 α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的表达变化,Western blot检测MIF表达变化,并于第14天记录受损坐骨神经传导速度(CV).结果 与Sham组比较,术后CCI组机械痛阈值均降低(P<0.05);与CCI组比较,ISO-1组术后第10和14天机械缩足反射阈值均升高(P<0.05).与Sham组比较,CCI组第7和14天背根神经节MIF、TNF-α、IL-1β 表达上调(P<0.05);与CCI组比较,ISO-1组第7和14天MIF、TNF-α、IL-1β表达下调(P<0.05).神经电生理的结果显示,与Sham组比较,CCI大鼠坐骨神经的CV降低,差异有统计学意义(P<0.05);ISO-1组与CCI组大鼠坐骨神经的CV比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 鞘内注射MIF拮抗剂ISO-1可以减轻大鼠机械痛敏,下调DRG MIF、TNF-α 和IL-1β 表达,但不能修复受损坐骨神经.MIF拮抗剂ISO-1可能通过抑制脊髓背根神经节炎症反应,减轻大鼠神经病理性疼痛.
关键词： 神经病理性疼痛/神经痛 巨噬细胞迁移抑制因子 ISO-1 促炎细胞因子 -
ISO-1对大肠癌细胞侵袭的影响
目的 研究选择性MIF互变异构酶活性抑制剂ISO-1对人大肠癌细胞侵袭的影响并探讨其可能的机制.方法 实验组用0.01～100 μmol/L的ISO-1作用于大肠癌细胞Lovo,对照组为相应浓度的DMSO处理;MIF互变异构酶活性通过L-多巴色素甲酯测定;微孔迁移法检测ISO-1对Lovo细胞体外侵袭的影响;ELISA法测定ISO-1作用后培养上清中MIF蛋白水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ISO-1对Lovo细胞MMP-9和IL-8 mRNA表达的影响.结果 较高浓度ISO-1(10～100 μmol/L)均能明显抑制MIF互变异构酶活性,但不影响细胞外分泌MIF蛋白水平;100 μmol/L ISO-1作用24 h Lovo细胞穿透聚碳酸酯膜显著减少,与对照组比较差异有显著性(153土13 vs 204±10,P＜0.05);100 μ mol/L ISO-1作用24 h Lovo细胞表达MMP-9和IL-8 mRNA水平显著降低,与对照组比较差异有显著性(MMP-9 mRNA:0.518 7±0.072 vs 0.6757±0.026.P＜0.05;IL-8 mRNA:0.1541±0.019 vs 0.2081±0.030,P＜0.05).结论 选择性MIF活性抑制剂ISO-1降低了Lovo细胞的侵袭,其可能机制为ISO-1抑制了MIF互变异构酶活性并下调MMP-9和IL-8的表达.
关键词： 大肠肿瘤 巨噬细胞移动抑制因子 互变异构酶活性 ISO-1 RT-PCR -
巨噬细胞移动抑制因子及其拮抗剂ISO-1在病理性瘢痕发病机制中的作用
目的:探究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)参与病理性瘢痕发病的具体机制,以及其拮抗剂ISO-l对病理性瘢痕来源成纤维细胞的影响.方法:收集正常皮肤、正常瘢痕以及病理性瘢痕标本,行HE以及免疫组化染色.利用组织块培养法分离培养人成纤维细胞,予以不同浓度ISO-1干预(0～ 100μmol/mL).TUNEL染色检测细胞凋亡,Western blot以及RT-PCR检测成纤维细胞特异性蛋白以及PI3K/Akt/mTOR通路的表达情况.结果:MIF在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩中表达强于正常瘢痕和正常皮肤.无干预组凋亡细胞较少,予以不同浓度ISO-1干预后,凋亡率逐渐上升.各组各时间点组间迁徙率比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).随着干预浓度上升,Ⅰ型胶原蛋白、纤连蛋白以及结缔组织生长因子的蛋白和mRNA表达量均下降.活化PI3K以及活化Akt表达量随着ISO-1浓度增加而下降.结论:MIF在不同类型瘢痕组织中表达存在差异,ISO-1通过PI3 K/Akt/mTOR通路抑制成纤维细胞生物学行为.
关键词： 巨噬细胞移动抑制因子 病理性瘢痕 ISO-1 成纤维细胞 -
MIF、MMP-9、ISO-1与大肠癌的关系
MIF刺激大肠癌细胞的增殖、分化以及抑制肿瘤细胞的凋亡,MMP-9促进大肠癌血管的生成和肿瘤细胞增殖,促进肿瘤侵袭与扩散,ISO-1通过抑制MIF互变异构酶活性、降低了MMP-9表达,从而抑制大肠癌细胞的增殖、浸润.
