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△NP63和HSP27在宫颈癌的表达及意义
目的探讨宫颈癌中△NP63和HSP27的表达及意义.方法应用免疫组化SP法检测20例慢性宫颈炎上皮、30例宫颈上皮不典型增生和50例宫颈癌中△NP63和HSP27蛋白的表达.同时对35例宫颈鳞状上皮细胞癌进行mRNA杂交.结果宫颈癌中△NP63蛋白表达率76%;HSP27蛋白表达率74%;表达率及强度明显高于慢性宫颈炎及轻、中度不典型增生上皮(P＜0.05),与重度不典型增生差异不显著(P＞0.05).宫颈腺癌中△NP63无表达.HSP27表达率低(1/3).在宫颈鳞状细胞中△NP63蛋白和mRNA的表达率及强度,低分化高于中、高分化,与临床分期密切相关;HSP27蛋白和mRNA的表达率及强度,中、高分化高于低分化,与临床分期无相关性.结论△NP63、HSP27可能与宫颈鳞状细胞癌的发生及预后有关.
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镍冶炼工人肺癌组织中△Np63蛋白表达的变化
采用蛋白质免疫组织化学(SP)法检测镍冶炼工肺癌细胞、非镍工肺癌细胞和正常肺成纤维组织中△Np63的表达,以探讨镍冶炼厂工人肺癌的发生及相关蛋白△Np63的变化.镍冶炼工肺癌组织中△Np63的蛋白表达量,与正常肺间质细胞相比增加77.29％,与非镍工肺癌细胞中△Np63的表达量相比增加26.73％,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).提示△Np63的过度表达可能参与了肺癌发生的重要阶段,在发病机制中起到重要作用.
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白藜芦醇对镍精炼烟尘致大鼠肺组织△Np63表达的干预
观察染镍尘大鼠肺组织△Np63的表达,研究白藜芦醇对镍染毒大鼠肺损伤的保护作用.取雄性Wistar大鼠肺部灌注毒物制备肺损伤模型,受试物为采集自某镍工厂车间的镍精炼沉降尘.按大鼠体重随机分为模型组、白藜芦醇高剂量组(600 mg/kg)和低剂量组(300 mg/kg),经口灌胃给药,另设正常对照组,常规喂养10周.观察染毒大鼠体重、状态的变化,通过免疫组织化学的方法观察肺组织中△Np63的表达.HE染色结果表明,镍精炼烟尘对大鼠肺部造成的损伤明显;而在白藜芦醇干预下,肺部损伤减弱.经Kruskal-Wallis H秩和检验:x2=18.3085,P＜0.0001,三组的蛋白质表达强度有显著差异.随着白藜芦醇浓度增高,△Np63表达降低.提示白藜芦醇干预下的大鼠肺组织中△Np63表达明显降低,说明白藜芦醇对镍致大鼠肺损伤有明显的保护作用.
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RNAi抑制△ANp63表达对头颈鳞癌细胞增殖的影响
目的 研究 △△Np63促进头颈鳞癌细胞增殖及存活的作用及相关分子机制.方法 筛选高表达△Np63 的头颈鳞癌细胞系,采用RNAi方法分别抑制△Np63及P63表达.RT-PCR、Western印迹、MTT法、流式细胞术等检测细胞增殖和细胞周期等生物学行为改变;并检测相关周期调控蛋白的表达.结果 △Np63在FaDu细胞中高表达,定位于细胞核.抑制△Np63及P63表达后,FaDu细胞增殖能力明显下降(t=3.66,P＜0.01),发生G1期细胞周期阻滞;CDK抑制物P21及P27蛋白表达上调,P53表达上调.结论 △Np63对FaDu细胞增殖及存活发挥主导作用,△Np63通过抑制p21、p27的表达,促进肿瘤细胞的生长和增殖.
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p53基因家族在人不同分化的肺鳞癌组织中的表达研究
目的 通过检测p53、△Np63和△Np73在肺鳞癌组织中的表达水平及与临床参数间的关系,探讨其在肺鳞癌发生、发展中的意义.方法 应用免疫组化方法,在149例不同分化的肺鳞癌组织和39例癌旁组织中检测p53、△Np63和△Np73的表达水平.结果 在肺鳞癌组织切片中p53、△Np63和△Np73蛋白阳性表达率分别为64.4%(96/149)、85.9%(128/149)和77.2%(115/149),均明显高于癌旁组织(P<0.05);p53、△Np63和△Np73在肺鳞癌组织中的表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05);而与患者性别、年龄、临床分期、有无淋巴结转移等无关.结论 p53、△Np63和△Np73是一组有价值的诊断肺鳞癌的指标,可能作为癌基因在肿瘤的发生机制中促进肿瘤的进展.
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喉鳞癌中△Np63和△Np73的表达及临床意义
目的 通过研究喉鳞癌中△Np63和△Np73的表达及与患者各临床病理参数的关系,探讨其在喉鳞癌发生、发展中的作用.方法 采用免疫组化二步法,检测40例喉鳞癌及相应癌旁组织中△Np63和△Np73的表达情况.结果 △Np63和△Np73在喉鳞癌组织中的阳性表达率分别为85%(34/40)和82.5%(33/40).喉癌组织中△Np63和△Np73的表达显著高于相应癌旁组织(P＜0.001).△Np63在喉癌组织中的表达与肿瘤分化程度有关(P＜0.05);而与患者性别、临床分期、有无淋巴结转移等无关.△Np73在喉癌组织中的表达与患者性别、肿瘤分化程度、临床分期、有无淋巴结转移等无关(P＞0.05).喉癌组织中△Np63和△Np73的表达无显著相关性(r=0.16,P＞0.05).结论 △Np63和△Np73可能作为癌基因维持肿瘤细胞干细胞样的增殖特性,在喉鳞癌的发生、发展中发挥重要作用,并可能成为喉癌成瘤机制研究中的重要靶点.
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p21Waf1/Cip1蛋白在侧腭突MEE/MES消失过程中的表达及意义
目的:探讨p21 Waf1/Cip1(p21)蛋白与调控p21的相关蛋白Jag1、Jag2、Notch1在正常胎鼠和腭裂模型侧腭突胚胎上皮,特别是胚胎腭中线上皮细胞、胚胎腭中线上皮带中的表达及变化,初步研究p21蛋白在胚胎腭中线上皮细胞、胚胎腭中线上皮带消失过程中的作用.方法:实验组为全反式维A酸(all-trans retinoic acid,atRA)诱导建立的C57BL/6J胎鼠腭裂模型,对照组用同等剂量玉米油喂养孕鼠.在鼠孕期第13.5天(gestation day,GD13.5)、GD14.5、GD15.5、GD16.5解剖取得胎鼠腭突,吖啶橙染色观察腭突形态,免疫组织化学染色检测p21与Jag1、Jag2、Notch1在胎鼠侧腭突上皮的表达.结果:实验组Jag1、Jag2、Notch1、p21在各个时间点均呈阴性表达.在GD14.5、GD15.5,对照组Jag1、Jag2、Notch1、p21在胚胎腭中线上皮带细胞内均有阳性表达.在GD15.5,对照组胚胎腭中线上皮带消失,腭突基本融合;实验组则胚胎腭中线上皮细胞未消退,形成腭裂.在GD16.5,Jag1、Jag2、Notch1在侧腭突所有被覆上皮仍有阳性表达,p21仅在鼻腔侧有微弱阳性表达.结论:在胎鼠侧腭突发育过程中,存在Jag1、Jag2、Notch1、p21特定时空的差异表达.结合前期试验,提示p21参与侧腭突上皮的凋亡与分化,尤其参与了△Np63在胚胎腭中线上皮细胞、胚胎腭中线上皮带消失过程中的作用.
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下咽鳞状细胞癌△Np63与上皮间质转化分子标志物的相关性及临床意义
目的 探讨下咽鳞状细胞癌(hypopharyngeal squamous cell carcinoma,HSCC)中△Np63和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子标志物表达的相关性及临床意义.方法 收集第二军医大学长海医院耳鼻咽喉头颈外科2013年1月至2016年11月收治的98例HSCC患者的肿瘤组织及癌旁正常组织标本.采用免疫组织化学法检测肿瘤组织、癌旁正常组织以及肿瘤不同区域中△Np63、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达,采用Spearman等级相关检验分析各蛋白表达强度的相关性,采用秩和检验比较各蛋白表达强度与患者临床病理特征的关系.结果 在HSCC组织中△Np63、vimentin的表达强度高于癌旁正常上皮组织(P＜0.01),而E-cadherin的表达强度低于癌旁正常上皮组织(P＜0.01).与肿瘤中央区相比,肿瘤边缘区可见△Np63、E-cadherin的阳性表达强度下降,vimentin的阳性表达强度上升(P均＜0.05).在HSOC组织中,△Np63与Dcadherin的表达强度呈正相关(rs=0.409,P＜0.01),与vimentin的表达强度呈负相关(rs=-0.333,P＜0.05).△Np63的表达强度与肿瘤T分期、有无淋巴结转移、病理分化程度及临床分期等临床病理特征均无关.E-cadherin和vimentin的表达强度与病理分化程度及有无淋巴结转移有关 (P＜0.05).结论 △Np63的异常表达与HSCC的发生、发展有关,其对EMT可能具有抑制作用.
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应用组织芯片研究p63及其同系物在肺癌中的表达
目的 研究p63蛋白及其同系物TAp63、△Np63在肺癌组织中的表达,并初步探讨其生物学意义.方法 选取183例肺癌、30例肺良性病变的石蜡标本,应用组织芯片技术和免疫组织化学方法观察三种蛋白在肺良、恶性病变中的表达情况.结果 p63蛋白及其同系物TAp63、△Np63三者在肺鳞状细胞癌、腺癌、细支气管肺泡癌、小细胞癌的表达具有一致性(r＞0.75,P＜0.01),且在鳞状细胞癌中的表达率均高于其它类型(P＜0.01);在鳞状细胞癌中△Np63表达率(74.6%)略高于TAp63(67.2%),但无统计学意义(P＞0.05).三种蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤大小、有无淋巴结转移及临床分期不相关(P＞0.05).p63、TAp63及△Np63在肺癌旁组织或肺良性病变的肺泡上皮细胞和支气管纤毛柱状上皮不表达,而只表达于支气管上皮的基底细胞和支气管腺的肌上皮细胞.结论 p63基因在不同类型的肺癌中作用不同,在鳞状细胞癌的发生发展中起着重要的作用.两种同系物TAp63和△Np63在鳞状细胞癌中也呈高表达,其机制有待研究.p63可作为肺鳞状细胞癌与其它类型癌鉴别的重要依据.
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子宫内膜、正常早孕和自然流产蜕膜组织中△Np63的表达
目的 观察△Np63蛋白在自然流产蜕膜组织中的表达,探讨△Np63在胚泡植入和早期妊娠维持中的作用.方法 收集自然流产的蜕膜27例组织(其中胚胎停止发育23例、习惯性流产1例及不全流产3例),正常早孕蜕膜66例,非妊娠期子宫内膜组织57例(其中增生期33例,分泌期24例),用sP免疫组化染色法观察ANp63的表达.结果 △Np63广泛表达于腺上皮和间质细胞中.增生期和分泌期子宫内膜中△Np63主要表达在腺上皮,蜕膜组织中△Np63在间质蜕膜细胞中的有较强的表达.流产组△Np63蛋白阳性率为55.6%,明显低于增生期的90.9%、分泌期的87.5%及正常早孕组的86.4%(P<0.05).△Np63高表达率在分泌期组及流产组分别为16.7%和11.2%,明显低于增生期的63.6%和正常早孕组的57.6%(P<0.01).结论 △Np63可能参与子宫内膜的生理周期变化,并与子宫内膜向早孕蜕膜组织转化及维持早孕关系密切.
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△Np63在喉癌中的表达及意义
目的:探讨喉癌中△Np63蛋白表达及其与临床病理的关系.方法:应用免疫组化SP法检测喉癌和正常喉黏膜中△Np63蛋白的表达.结果:喉癌中△Np63的阳性表达率为75.0%,正常喉粘膜中的阳性表达率为15.0%,组间比较差异具有显著性(P＜0.01).阳性表达率与组织学分级有关(P＜0.05).结论:△Np63可能与喉癌的发生、分化和预后有关,可以作为喉鳞癌和腺癌鉴别诊断的依据.
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△Np63在食管鳞癌组织中的表达及意义
目的 探讨p53基因家族新成员截短型p63(△Np63)在食管鳞癌组织中的表达及其意义.方法 采用RT-PCR法检测50例食管鳞癌及50例正常食管组织中△Np63 mRNA的表达情况,分析其与食管鳞癌患者各临床病理指标的关系.结果 △Np63 mRNA在食管鳞癌组织中的阳性表达率(74.0%)及表达水平(1.036±0.157)均显著高于正常食管组织(40.0%,0.954±0.110),并且其在食管鳞癌组织中的阳性表达率及表达水平与分化程度和淋巴结转移密切相关(P＜0.05).结论 在食管鳞癌组织中存在△Np63的过表达,并且这种表达可能与食管鳞癌的浸润、转移有关.
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Delta N p63蛋白在膀胱癌组织中的表达及意义
目的:探讨Delta N p63(△Np63)蛋白在膀胱移行细胞癌(TCCB)中的表达及意义.方法:采用SP免疫组织化学法检测43例TCCB患者肿瘤组织、11例对照组膀胱组织△Np63蛋白的表达,并分析△Np63蛋白表达与TCCB临床分期、病理分级的关系.结果:43例TCCB组织中△Np63蛋白表达阳性率为100%(43/43),对照组膀胱组织中△Np63蛋白表达的阳性率为18.2%(2/11),TCCB组△Np63蛋白表达的阳性率明显高于正常组,差异有显著性(P＜0.05).不同临床分期肿瘤组织中△Np63蛋白表达的阳性率及强度,各组间△Np63蛋白表达的阳性率及表达强度差异无显著性(P＞0.05).不同病理分级肿瘤组织中△Np63蛋白表达的阳性率及强度,各组间△Np63蛋白表达的阳性率及表达强度差异无显著性(P＞0.05).结论:TC-CB组△Np63蛋白表达水平均明显高于正常组,提示△Np63与TCCB的发生密切相关,可能为TCCB发生的重要促进因素,△Np63蛋白表达水平与TCCB的临床分期、病理分级没有相关性,故△Np63在TCCB进展中的作用有待进一步研究.
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宫颈癌前病变中△NP63与HPV16 E7表达的研究
目的:研究宫颈上皮内瘤变中△NP63和HPV16 E7 mRNA的表达情况,寻找用于临床评估CIN病变进展趋势的生物学标志物.方法:收集临床71例薄层液基细胞标本,采用SP免疫组化法检测细胞中△NP63的蛋白表达,RT-PCR法检测残留标本中HPV16 E7的mRNA转录情况.结果:1.△NP63定位于异常鳞状上皮细胞和腺细胞,在CIN中表达高于炎症组(P＜0.05);2.HPV16 E7在CIN中表达明显高于炎症组(P＜0.05);3.CIN中△NP63与HPV16 E7的检测结果具有较好的一致性.结论:△NP63可作为CIN的生物学标志物辅助细胞学筛查;△NP63可间接反映HPV16 E7的转录情况,有利于临床评估高危型病毒HPV16的致瘤能力.
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△Np63基因对TCCB5637细胞侵袭作用的影响
目的:研究△Np63基因对TCCB 5637细胞侵袭功能的影响.方法:针对△Np63基因的不同靶点设计并化学合成具有阳性转染率的siRNA,用脂质体法转染TCCB 5637细胞,并根据转染的方式将实验分组为:空白对照组、空载体组、阴性质粒组和干扰质粒组;采用实时荧光定量PCR、Western blot检测各组中△Np63的mRNA、蛋白的表达;采用激光共聚焦显微镜对转染干扰质粒前后的△Np63蛋白进行定位;采用细胞计数法及MTT法来检测△Np63基因对TCCB 5637细胞侵袭能力和异质粘附能力的影响.结果:△Np63蛋白定位于TCCB 5637细胞的细胞核区域;与空白对照组比较,空载体组和阴性质粒组TCCB 5637细胞中△Np63的mRNA、蛋白的表达水平无明显变化(P＞0.05);平均细胞穿越数和异质粘附性无明显变化(P＞0.05);而干扰质粒组TCCB5637细胞中△Np63的mRNA、蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05),平均细胞穿越数明显增加(P＜0.05),异质粘附性明显下降(P＜0.05).结论:△Np63基因能明显促进TCCB 5637细胞的侵袭能力.
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P16、△NP63在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及相关性研究
目的 探讨P16、△NP63蛋白在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达、意义及其相关性.方法 采用免疫组化SP法检测42例宫颈鳞癌,90例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN),25例慢性宫颈炎组织石蜡切片中P16、△NP63蛋白的表达.结果 (1)从慢性宫颈炎组织、CIN到宫颈鳞癌,P16、△NP63的表达均递增,差异有统计学意义(P＜0.01).(2) P16蛋白表达与宫颈癌患者的年龄、临床分期及癌细胞分化程度无关,△NP63蛋白表达与宫颈癌患者年龄、临床分期无关,与癌细胞分化程度呈负相关,在分化程度差的肿瘤组织中表达增高(P＜0.05).(3)在CIN和宫颈鳞癌中,P16与△NP63蛋白表达呈正相关(rs=0.6226,P＜0.01).结论 P16、△NP63参与了CIN、宫颈鳞癌的发生、发展,其免疫组化检测对宫颈癌的早期诊断有参考价值.
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△Np63和VEGF在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义
目的 探讨△Np63和VEGF在膀胱移行上皮癌(TCCB)中的免疫组化表达及与膀胱癌发生发展中可能的作用和相互关系.方法 用免疫组化染色方法对56例膀胱移行上皮癌组织行△Np63和VEGF检测,将结果与病理分级、分期和预后进行分析.结果 膀胱移行细胞癌中△Np63和VEGF阳性表达率明显高于正常膀胱粘膜(P<0.05).△Np63和VEGF在低分化、浸润性癌组织中的阳性表达率明显高于高分化、浅表性癌组织,在复发病例中的阳性表达率显著高于初发病例,2个标记物在膀胱癌的病理分级、分期和预后之间表达差异有统计学意义(P<0.05).采用Spearman等级相关性分析,△Np63与VEGF呈正相关.结论 △Np63在膀胱癌中的异常表达是膀胱癌组织向浸润性发展和恶性程度增加的重要原因之一,可能通过促进肿瘤血管生成发挥促癌作用,△Np63可能是判断TCCB预后的生物学指标.
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siRNA干扰△Np63基因表达对人宫颈癌Siha细胞增殖及凋亡影响研究
目的 通过抑制宫颈癌细胞株Siha中△Np63的表达,探讨△Np63对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 将宫颈癌细胞株Siha分为实验组和对照组,实验组转染△Np63的特异性siRNA,对照组转染阴性对照siRNA.实时荧光定量PCR(QRT-PCR)及蛋白质印迹法检测Siha细胞转染前后△Np63基因在mRNA及蛋白水平的变化;CCK8法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 实验组Siha细胞转染siRNA后,△Np63的mRNA表达为0.32±0.06,低于阴性对照组0.95±0.08(t=10.92,P＜0.05).实验组Siha细胞转染siRNA后,△Np63的蛋白表达为0.32±0.09,低于阴性对照组1.00±0.06(t=9.78,P＜0.05).实验组Siha细胞生长速度明显低于阴性对照组,实验组Siha细胞凋亡率为2.13±0.75,低于阴性对照组14.19±1.36(t=15.36,P＜0.05).结论 人宫颈癌细胞株中存在△Np63的表达,特异性siRNA可下调宫颈癌细胞株Siha中△Np63基因的表达,对细胞的增殖具有负性调节作用,并能诱导细胞凋亡.
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△Np63在早孕小鼠子宫内膜表达规律的研究
目的:初步探讨p53基因家族新成员--截断型p63(△Np63)在小鼠生殖中的作用.方法:收集动情周期各期和早孕2 d、3 d、4 d、5 d小鼠子宫内膜,共8组,每组10只小鼠.运用RT-PCR技术检测△Np63 mRNA的表达规律;免疫组织化学SP法检测小鼠子宫内膜中△Np63蛋白的表达情况.结果:1)RT-PCR:动情前期△Np63 mRNA明显高表达;动情间期和动情期表达减弱;动情后期表达极低;早孕期间小鼠子宫内膜△Np63 mRNA表达较未孕组高,并逐渐增强,孕5 d达高峰.2)免疫组织化学:△Np63蛋白在间质细胞胞浆表达,表达规律基本上与mRNA水平的表达规律相似.结论:△Np63在动情前期高表达,可能与子宫内膜间质细胞增殖、生长有关;在早孕期间高表达,说明它很可能进一步促进间质细胞分裂,顺利转化成蜕膜细胞,进而有利于提高窗口期子宫的容受性.
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肾细胞癌组织中△Np63和MDM2蛋白的表达及其临床意义
目的 探讨△Np63和MDM2蛋白在肾细胞癌组织中的表达及其与肿瘤侵袭与转移的关系.方法 应用免疫组织化学SP法,检测76例肾细胞癌和14例正常肾组织中△Np63和MDM2蛋白的表达.结果 肾癌组织与正常肾组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异有显著性(F=28.34、22.57,q=6.471～12.529,P<0.05);不同病理类型的肾癌组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异均无显著性(q=0.093～2.169,P>0.05);不同临床分期肾癌组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异有显著性(F=24.59、10.82,q=4.694～11.971,P<0.05).△Np63和MDM2蛋白的表达存在着显著相关性(rs=0.513,P<0.05).结论 △Np63和MDM2蛋白可以作为反映肾细胞癌侵袭和转移潜能的生物学指标.
关键词： 肾肿瘤 △NP63 原癌基因蛋白质c-mdm2 免疫组织化学
