首页 > 文献资料
-
高危型人类乳头状瘤病毒负荷量对宫颈上皮细胞DNA倍体的影响
目的 探讨高危型人类乳头状瘤病毒(HPV)感染对宫颈上皮细胞DNA倍体改变的影响. 方法 按要求选取120例既做薄层液基细胞学检查,同时又做高危型HPV-DNA检查的宫颈病变患者的宫颈脱落细胞学标本,采用二代杂交捕获法检测HPV-DNA(代表病毒负荷量),流式细胞术检测宫颈上皮细胞DNA倍体改变(DNA指数DI和S期细胞峰百分比SPF). 结果 HPV-DNA与宫颈上皮细胞DI及SPF存在正相关性(rs分别为0.755和0.845,P＜0.05)；随着宫颈病变的加重,HPV负荷量和上皮细胞DNA倍体的改变趋势存在一致性. 结论 高危型HPV感染可以促进宫颈上皮细胞的增生或癌变.
-
人乳头状瘤病毒基因分型在宫颈组织病变筛查中的应用
宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤,近年来国内外的研究进一步提示人乳头状瘤病毒(HPV)不同亚型对宫颈上皮细胞的致病力不同,而且存在较大差异.HPV是一种小的双链DNA病毒,可以特异性地感染人皮肤黏膜的鳞状上皮细胞,引起多种良、恶性病变.研究发现99%以上的宫颈癌有HPV感染,HPV是宫颈癌的主要致病因子[1].世界上发现的.HPV已有110余种亚型,其中20余种与宫颈癌密切相关,根据其致癌性分为高危型和低危型两大类.我们研究HPV亚型与宫颈组织病变的相关性,为宫颈癌的筛查防治提供可靠的理论依据.
-
大鼠宫颈上皮细胞的原代培养
目的 探索大鼠宫颈上皮细胞的培养方法.方法 分离大鼠宫颈上皮细胞,采用上皮细胞培养无血清培养基,添加牛脑提取物和表皮生长因子(EGF)进行培养.结果 大鼠宫颈上皮细胞培养8d后,可以在显微镜下观察到宫颈上皮细胞从组织碎片中移出,大片贴在培养瓶壁上,成集落状生长.结论 使用上皮细胞无血清培养基添加EGF、牛脑提取物可以实现大鼠宫颈上皮细胞的原代培养.
-
宫颈上皮细胞稳定性FH检测在宫颈癌筛查中的应用价值
目的 探讨子宫上皮细胞稳定性还原态铁原卟啉自由体(FH)检测在宫颈癌及宫颈癌前病变的应用价值.方法 2014年3月至2017年2月该院经病理学证实的宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈癌、宫颈良性病变与宫颈正常患者共500例,均行子宫上皮细胞稳定性FH检测和宫颈液基细胞学(TCT)检测,比较两种检测方法的敏感度及特异度.结果 FH检测敏感度为88.0％,特异度为89.6％,误诊率为10.4％,漏诊率为12.0％;TCT敏感度为91.2％,特异度为90.4％,误诊率为9.6％,漏诊率为8.8％.如将TCT与FH进行联合检测,且只要有一项阳性即认定为阳性,则联合筛查的敏感度为89.6％(240/268),特异度为96.7％(222/232),与病理结果符合率为92.4％(462/500).结论 宫颈上皮细胞稳定性FH检测的灵敏度、特异度与TCT检测结果接近,且操作简单、成本低廉,适用于基层女性的宫颈癌筛查.如将二者进行联合检测,则会提高检出率.
-
成人宫颈上皮细胞的原代培养及影响因素
目的:探讨采用无血清培养基(Ker-SFM)原代培养成人宫颈上皮细胞的效果和影响因素.方法:取65例因子宫良性病变切除子宫患者的宫颈组织,采用diapaseⅡ和胰蛋白酶-EDTA消化法获得宫颈上皮细胞悬液,于上皮细胞专用Ker-SFM中培养,采用免疫细胞化学法测定细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的表达,对细胞纯度进行鉴定,并用透射电镜及扫描电镜观察细胞形态.结果:培养成功率69.23％ (45/65),原代培养12 ～15天细胞生长达80％以上,早期细胞生长状态良好,传代至3代,细胞出现生长衰退.细胞鉴定E-cadherin阳性,vimentin染色阴性,电镜观察细胞符合上皮细胞特点.影响培养成功率的因素主要包括患者年龄大小、取材处组织有无损伤、子宫离体时间、术前是否有阴道或宫颈炎症以及培养基的选择.结论:采用酶消化法及Ker-SFM培养可获得纯度较高的成人宫颈上皮细胞,可作为宫颈癌基础研究的实验模型.
-
白介素-10基因的表观遗传与宫颈癌研究进展
在宫颈癌的发生发展过程中,其中白介素-10 (IL- 10)有明显的抗慢性炎症及细胞免疫抑制作用,并且其介导的免疫调节与DNA的损伤修复和凋亡途径有直接关系[1],所以备受关注.局部IL- 10的过表达,抑制细胞介导的免疫应答,阻止HPV感染的清除,造成肿瘤细胞的免疫逃逸,引发子宫颈癌.研究发现,除传统意义的DNA遗传信息外,还存在大量DNA序列之外的遗传调控信息,即表观遗传学信息(Epi-genetic information).表观遗传学(Epigenetic)是指基因的DNA序列未发生改变,而基因表达却发生了可遗传的变化,并导致表型的变异.在宫颈上皮细胞和IL - 10来源的外周血单核细胞中,CpG甲基化和组蛋白乙酰化的数据表明除基因多态性的潜在影响之外[2,3],表观遗传也影响人IL - 1O启动子的活性,而其高表达可抑制细胞介导的免疫应答来促进某些肿瘤的进程.该文主要就表观遗传学对IL - 10的调控机制及其在子宫颈癌中的研究进展做一综述.
-
成人宫颈上皮细胞的原代培养及鉴定
目的:探索采用无血清培养基原代培养成人宫颈上皮细胞的方法.方法:以成人的宫颈上皮组织为研究对象,采用胰蛋白酶-EDTA消化法获得宫颈上皮细胞悬液,于上皮细胞专用无血清培养基中培养,采用免疫细胞化学法测定细胞中角蛋白及波形蛋白的表达,对细胞纯度进行鉴定.结果:原代培养10-15天细胞融合达60％,传代至4-6代,细胞出现生长衰退.早期细胞生长状态良好,细胞纯度在90％以上.结论:采用酶消化法及K-SFM无血清培养基培养可获得纯度高的成人宫颈上皮细胞.
-
妊娠及非妊娠妇女宫颈感染人乳头瘤病毒的基因亚型检测及分析
目的：探讨妊娠及非妊娠妇女宫颈感染人乳头瘤病毒（human papilloma virus ，HPV ）的基因分型情况。方法：收集2012年2月-2013年5月在复旦大学附属金山医院妇产科门诊就诊的684例育龄期女性（非妊娠妇女）和857例妊娠妇女的宫颈上皮细胞标本，采用基因扩增及基因芯片技术对宫颈上皮细胞进行H PV基因亚型检测。结果：非妊娠妇女检出 H PV感染195例（感染率28．5％），主要的感染类型为HPV43、16、58等。妊娠妇女检出HPV感染102例（感染率11．9％），主要的感染类型为HPV43、16、58等。妊娠妇女中＜30岁、30～40岁、＞40岁的 HPV感染率分别为10．9％、15．1％、30％，非妊娠妇女中＜30岁、30～40岁、＞40岁的患者H PV感染率分别为25．3％、25．2％、32．2％。结论：妊娠妇女H PV感染率低于非妊娠妇女，两组HPV感染型别基本相同，HPV43、16、58型感染是该院妇产科门诊患者的主要感染型别，非妊娠妇女随年龄增长感染率明显升高。
-
艾滋病患者外周血单个核细胞核纹理分析
2003年,Simon[1]发现在某些病毒感染下外周血中增多出现的非典型淋巴细胞的形态以及核酸、酸性磷酸酶、糖原等含量都有一定变化.2005年,Guillaud等[2]以染色宫颈上皮细胞纹理特征为基础计算了人类乳头瘤病毒(HPV)的阳性概率,揭示了细胞染色质凝聚纹理特征与HPV的相关性.因此我们将Curvelet变换特征系数图像的累积信号强度、图像的几何不变矩、表面曲率等特征融合起来,用偏小二乘回归方法建模,分析艾滋病患者外周血单个核细胞核纹理改变与患者体内病毒载量间的关系.将图形图像变化与DNA、RNA、蛋白质等分子(变化)联系起来,是计算机图形图像处理技术在实验医学中的一种应用尝试.
-
FISH检测宫颈上皮hTERC基因扩增制片方式的比较及初步临床应用
目的 探讨荧光原位杂交技术(FISH)检测宫颈细胞hTERC基因扩增研究中脱落细胞样本采集及制片的佳方法.方法 采集在浙江省台州市中心医院就诊的99例患者的宫颈脱落细胞,分别应用新鲜细胞直接涂片、生理盐水制片、TCT(液基薄层细胞技术)低渗制片三种方法取材制片后再应用双色间期FISH法检测宫颈脱落细胞hTERC基因的表达率,并通过对比分析三种取材制片法的杂交成功率、载玻片背景清晰比例、无/少信号比例选择FISH检测宫颈细胞hTERC基因扩增研究中脱落细胞样本采集及制片的佳方法.结果 直接涂片法、生理盐水制片法、TCT低渗制片法的杂交成功率分别是46.2%(12/26)、55.1%(16/29)、和81.8%(36/44),TCT低渗片与直接涂片法和生理盐水制片法比较有统计学差异(p<0.05);三种制片方法的玻片背景清晰比例分别为34.6%(9/26)、48.2%(14/29)和70.4(31/44)%,各组之间有统计学差异(P<0.05);3组的无/少信号比例分别为15.3%(4/26)、13.7%(4/29)和13.6%(6/44),各组之间无统计学差异(P>0.05).结论 应用双色间期FISH技术检测宫颈脱落细胞TERC基因时,以TCT低渗制片操作方法简单快速,玻片背景为清晰,杂交成功率高.
-
人正常宫颈上皮细胞的体外分离及细胞活性比较
目的:在传统上皮细胞消化分离方法基础上加以比较,探求一种佳宫颈上皮细胞的体外分离方法.方法:取10例新鲜的正常宫颈组织,将同一组织分成大小相同的3部分,采用3种不同的消化方法(胰蛋白酶消化法、Ⅰ型胶原酶消化法、Ⅱ型中性蛋白酶+胰蛋白酶联合消化法)获取正常宫颈上皮角质细胞悬液,采用罗丹明B(SRB)法测定其细胞活性,同时比较其贴壁率.结果:胰蛋白酶组、Ⅰ型胶原酶组、Ⅱ型中性蛋白酶+胰蛋白酶联合消化组的细胞活性分别为0.9335、0.9544、0.9438,两两比较差异显著(P＜0.01);Ⅰ型胶原酶消化组的细胞贴壁率显著高于其他两组(P＜0.01).结论:Ⅰ型胶原酶消化法是一种理想的分离宫颈上皮细胞的方法.
-
siRNA干扰syk基因对永生化宫颈上皮细胞增殖和侵袭的影响
目的:用小干扰RNA(siRNA)干扰人永生化宫颈鳞状上皮细胞系H8中脾酪氨酸激酶(syk)的表达,观察syk表达降低对细胞增殖和侵袭能力的影响,初步探讨syk在宫颈癌侵袭转移中所起的作用及其表达改变可能影响到的下游靶基因.方法:用siRNA syk干扰永生化宫颈上皮细胞内syk的表达,并以转染control siRNA的细胞作为对照,转染48h后,分别用qRT-PCR和Western blot方法评价干扰效果；在24,48,72h用MTT法检测干扰后细胞增殖情况；Transwell检测细胞侵袭能力；并用qRT-PCR和Western blot方法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达.结果:siRNA干扰syk后能显著降低永生化宫颈上皮细胞系H8内syk mRNA及蛋白的表达(P＜0.01).Syk表达降低并未影响永生化宫颈上皮细胞系H8的增殖(P＞0.05),但能使永生化宫颈上皮细胞系H8的侵袭能力显著增强(侵袭细胞数115.57±10.31 vs 39.76±8.79,P＜0.01),且syk表达降低后MMP-9的mRNA和蛋白表达均显著增加(P＜0.01).结论:syk表达降低导致永生化宫颈上皮细胞的侵袭能力增加,可能与其表达降低后使MMP-9表达增加相关,syk表达降低与宫颈癌的侵袭转移密切相关.
-
女性生殖道沙眼衣原体感染时局部免疫因子变化的研究
目的:研究沙眼衣原体(CT)对女性生殖道感染患者局部生殖道上皮免疫状态的影响. 方法:(1)选取2006年4月至8月被诊断为生殖道沙眼衣原体感染患者及无生殖道感染的生育年龄女性,每组各60例,取其阴道灌洗液,用ELISA方法比较IL-8,TNF-α,HD-5水平;(2)采用与沙眼衣原体类似来源的脂多糖(LPS),刺激体外培养的正常宫颈上皮细胞,检测LPS刺激后不同时间点TNF-α,HD-5水平.结果:沙眼衣原体组与正常组相比,阴道灌洗液IL-8,TNF-α,HD-5均升高,有明显差异.体外实验结果表明,LPS刺激体外培养的宫颈上皮细胞,0、24、48h细胞培养液中TNF-α,HD-5水平均增加,且呈现时间依赖性.结论:沙眼衣原体感染可影响女性生殖道局部免疫状态,体外实验证实宫颈上皮细胞可能参与了上述过程.
-
2686例已婚女性宫颈细胞中人乳头瘤病毒基因型分析
目的：了解南京市已婚女性宫颈上皮细胞中HPV感染和基因型分布情况。方法：选择2012年1月1日至2012年12月31日在我院妇科门诊行妇科检查的2686例患者的宫颈上皮细胞标本,采用基因扩增及基因芯片检测技术对26种HPV基因进行检测和分析。结果：2686例已婚女性中 HPV 阳性者711例(26.47%),其中高危型 HPV (HR-HPV)感染者617例,感染率22.97%,占86.78%(617/711)；单一基因型感染556例,感染率20.70%,占78.20%,多重基因型感染155例,感染率5.77%,占21.80%。52型148例,占20.82%,其余依次为16型(18.57%)、58型(14.63%)、61型(8.58%)、56型(8.16%)。167例感染16和18型中一种或两种基因型,感染率6.22%(167/2686),占23.49%(167/711),240例感染52和58型的一种或两种基因型,感染率8.94%(240/2686),占33.76%(240/711)。结论：南京市已婚女性宫颈上皮细胞中HPV 52和58型感染率高于宫颈癌疫苗基因型(16和18型)；第二代宫颈癌疫苗,如包含HPV52和58型可能会给中国和其他亚洲国家女性提供更高的保护力。
-
感染2型单纯疱疹病毒对人宫颈上皮细胞自噬活性及IFN-β、IL-6表达的影响
目的 探讨2型单纯疱疹病毒(HSV-2)对人宫颈上皮细胞HCE自噬及干扰素β(IFN-β)、IL-6表达的影响.方法 将体外培养的人宫颈上皮细胞HCE分为观察组和对照组,观察组用Vero细胞病毒接种HSV-2,对照组正常培养不进行处理.收集对照组和观察组感染HSV-2后1、4、11、18、22 h的细胞,采用免疫荧光法(FITC)检测各组细胞荧光强度,采用Western blotting法检测各组细胞LC3Ⅱ表达量;收集对照组和观察组感染HSV-2后1、4、11、18、22 h的细胞,采用ELISA法检测上清液IFN-β、IL-6.结果 感染HSV-2后观察组细胞荧光强度、LC3Ⅱ表达量及上清液IL-6、IFN-β水平迅速升高,与对照组相比,P均<0.05.至感染后4 h观察组细胞荧光强度、LC3Ⅱ表达量及上清液IL-6、IFN-β水平均达到峰值,然后缓慢下降.结论 感染HSV-2可以提高人宫颈上皮细胞自噬活性及IFN-β、IL-6表达,且感染早期效果较强.
-
2886份样本的液基薄片细胞学检测
人体细胞学检查包括宫颈上皮细胞异常筛查,胸水、腹水、脑脊液、痰液、尿液、脱落细胞,支气管镜刷片细胞及各种细针穿刺细胞,临床应用极为广泛.4年前笔者所在医院引进了液基薄层制片技术,作为新技术用于妇科宫颈细胞学的检测中通过与统制片比较,明显提高了癌前病变的检出率,克服了传统制片的不足,在癌变检出率及诊断准确率上均优于传统涂片.现将应用体会介绍如下.
-
生殖道沙眼衣原体感染相关的生物学标志评估
目的：探讨可以评估生殖道沙眼衣原体感染相关的生物学指标。方法选取2014-08—2015-12间诊断为生殖道沙眼衣原体感染的32例育龄妇女为感染组。选取同期无感染的32例育龄妇女为未感染组。采用ELISA法对比2组HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6的表达。同时利用脂多糖（ LPS）刺激体外培养的正常宫颈上皮细胞，对比LPS刺激后细胞与正常细胞不同时间点的HD-5、TNF-α水平变化。结果感染组HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6表达均显著高于未感染组。LPS刺激后细胞在感染1d、2d后的HD-5、TNF-α水平均显著高于正常细胞，差异均有统计学意义（ P﹤0.05）。结论沙眼衣原体属于生殖道感染的重要病菌，应注意检查及预防。
-
正常宫颈上皮细胞原代培养体系的改良
目的:探索一种高效、可重复的正常宫颈上皮细胞原代培养方法.方法:取60例正常宫颈组织,分成2组,分别采用Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25 g/mL胰蛋白酶-EDTA(中性蛋白酶联合法)及Ⅰ型胶原酶消化分离后进行原代培养,比较两种分离效果;观察采用中性蛋白酶联合法消化不同时间对分离效果的影响.观察添加体积分数5%FBS dK-SFM培养基与单纯dK-SFM培养基培养原代宫颈上皮细胞的生长曲线差异,并用形态学、广谱角蛋白免疫细胞化学染色鉴定细胞来源.结果:正常宫颈上皮细胞原代培养总成功率为40%.中性蛋白酶联合法成功率、分离所得细胞密度、原代细胞融合时间及细胞纯度均高于Ⅰ型胶原酶消化法(P<0.05).中性蛋白酶消化20 h的分离效果优于消化16和24 h(P<0.05).体积分数5%FBS dK-SFM培养基原代培养的宫颈上皮细胞增殖活性高于单纯dK-SFM培养基(P<0.05).细胞生长状况良好,可在体外传代至5~6代,并可冻存与复苏,免疫细胞化学染色显示广谱角蛋白表达阳性.结论:Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25 g/mL胰蛋白酶-EDTA分离法和体积分数5% FBS dK-SFM培养基培养原代正常宫颈上皮细胞,高效、可重复性好.
关键词： 原代培养 宫颈上皮细胞 中性蛋白酶 角质细胞无血清培养基 -
阴道镜早期筛查宫颈癌的临床分析
目的 评价阴道镜对早期宫颈癌检测的作用,做到早发现、早诊断、早治疗,降低宫颈癌的发生率,提高妇女的生活质量.方法 一人一个套管,利用阴道镜的放大原理,可准确观察宫颈上皮细胞形态和血管,发现病变部位,然后对病变部位进行活检,减少误差,以提高早期确诊率.结果 在1623例患者中,发现CIN(上皮细胞肉瘤样增生)Ⅰ-Ⅲ62例,占3.8%;宫颈癌原位癌2例;宫颈癌15例,占0.8%;诊断敏感率为100%,特异度为96.5%.结论 阴道镜在癌前病变及早期宫颈癌筛查中具有重要的应用价值.
-
已婚女性宫颈上皮细胞中人乳头瘤病毒基因分型2000例分析
目的:探讨江苏省南京地区2000例已婚女性官颈上皮细胞中23种HPV感染基因型的分布情况.方法:宫颈上皮细胞标本取自江苏省南京市扬子石化集团公司的2000例已婚女性,采用基因扩增及基因芯片技术对其宫颈上皮细胞进行23种HPV基因型别进行检测和分析.结果:2000例已婚女性宫颈上皮细胞标本中检出HPV感染者205例,HPV总感染率为10.25％(205/2000),其中单一型别阳性检出率为8.80％ (176/2000).单一型别感染中HPV43型33例,其阳性检出率为1.65％ (33/2000),是主要的感染型别；其次HPV58型22例,其阳性检出率为1.10％(22/2000).混合型HPV感染29例,其阳性检出率为1.45％(29/2000)；其中HPV16型混合感染占34.48％ (10/29),是混合型感染的主要型别:其次是HPV43型混合感染占31.03％(9/29).29岁以下、30～39岁、40～49岁和50岁以上HPV感染率分别为10.00％、7.24％、11.45％和12.96％.结论:HPV43型、58型单一型别及16型和43型的混合型是感染南京地区2000例已婚女性的主要基因型别,且发病人群呈现低龄化趋势.基因芯片技术可检测出宫颈上皮细胞标本中的多种HPV基因型,对女性宫颈癌的预防及病因学的研究具有重要的作用.
