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蝙蝠呼肠孤病毒感染BHK-21和Vero-E6细胞形态发生的比较观察
目的 通过对蝙蝠呼肠孤病毒在BHK-21和Vero-E6细胞形态发生的比较研究,筛选出该病毒的佳宿主细胞.方法 将感染呼肠孤病毒XJV株的BHK-21和Vero-E6细胞用戊二醛、锇酸固定,制成超薄切片,用透射电镜观察.同时测定病毒滴度.结果 XJV在2种细胞中的适应程度小同,XJV更适于在BHK-21细胞中增殖.XJV在2种细胞中的形态发生不同,在BHK-21细胞中形成的包涵体呈典型的晶格状排列,在Vero-E6细胞中形成的包涵体呈杂乱的球状.XJV用BHK-21和Vero-E6细胞育传5代,病毒滴度分别为10~(5.5)TCID_(50)/ml和10~(4.5)～TCID_(50)/ml.结论 BHK-21细胞是蝙蝠呼肠孤病毒XJV株的佳宿主细胞.
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治疗用马抗SARS-CoV免疫球蛋白体外抗SARS-CoV的研究
目的研究3个批号的治疗用马抗SARS-CoV免疫球蛋白在体外对SARS-CoV的抑制作用. 方法确定SARS-CoV BJ-01株毒力后,采用MTT法确定药物对Vero-E6细胞的毒性.将一定量的SARS-CoV BJ-01株病毒液加入培养好的Vero-E6细胞中,置37℃,5% CO2孵箱中培养不同时间后加入以大无毒浓度开始的不同浓度的药物继续培养,采用MTT法检测药物对病毒的抑制作用. 结果 3个批号的治疗用马抗SARS-CoV免疫球蛋白不同时间点的治疗指数(TI):2 h组>6 h组>12 h组>24 h组;200307批>200306批>200308批. 结论治疗用马抗SARS-CoV免疫球蛋白在体外均有抗SARS-CoV作用,其中200307批的抗病毒效果好,为其用于SARS治疗提供了实验依据.
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抗SARS冠状病毒药物细胞筛选模型的建立及应用
目的:建立抗SARS冠状病毒(SARS-CoV)药物细胞筛选模型,应用于抗SARS-CoV药物的筛选,为SARS的防治奠定基础.方法:将一定数量的细胞接种96孔板,根据药物的作用机制采用不同的给药途径,以观察到的细胞病变(cytopathic effect,CPE)为指标,按照Reed-Muench法,计算药物的细胞半数中毒浓度 (TD50)和抑制细胞半数病变的有效浓度( IC50).结果与结论:Vero-E6细胞接种SARS-CoV后24 h即可出现CPE,且CPE明显,便于观察,可作为抗SARS病毒药物细胞筛选模型.依此模型筛选了3类87种药物,确认6种药物在Vero-E6细胞上具有抑制SARS病毒的作用.该模型的建立也为其他的抗病毒药物的筛选提供了技术平台.
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基于Vero E6细胞的抗SARS药物筛选方法的构建
目的构建基于Vero-E6细胞的抗SARS药物筛选模型.方法运用四唑氮化合物(MTS)方法,对由SARS病毒(BJ-01)引起的对Vero-E6细胞的细胞毒性作用进行检测.首先优化了实验条件(检测了MTS不同孵育时间和不同接种细胞数对测试结果的影响,并绘制了病毒滴度曲线);在检测化合物的抗病毒作用时,首先将细胞接种于96孔板中,加入待测药物和BJ-01病毒,48 h后用显微镜观察细胞形态变化,96 h后加入MTS和电子耦联剂(PMS)的混合溶液,在490 nm检测其吸光度.结果对4 000多种化合物的抗SARS病毒作用进行了检测.获得10种可能有抗SARS病毒作用的药物.结论基于Vero-E6细胞的MTS检测方法提供了一种快速、安全和方便的抗SARS药物筛选方法.
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提纯G3PD的修饰蛋白
目的：从猴的肾上皮细胞(Vero-E6)内提取具有促进细胞生长作用的3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PD)的修饰蛋白(modifier protein, MP)。方法：将培养液中K+的浓度降低到3.2 mmol/L,在Vero-E6细胞内将产生G3PD的修饰蛋白，用亲和层析及阴离子高效液相层析纯化而获取这种修饰蛋白。结果：蛋白的分子量大约为62 kDa,Westem及免疫吸附实验证实：随着细胞外液中K+的浓度降低，该种蛋白也相应增多，在低k溶液2 h后达大值，与G3PD的活性相平行。结论：从猴的肾上皮Vero-E6细胞分离出G3PD的修饰蛋白，有促进G3PD的活性、增进细胞生长的作用。
关键词： Vero-E6细胞 钾缺乏 修饰蛋白 3-磷酸甘油醛脱氢酶 细胞增殖 -
牛副流感病毒3型在不同细胞中的复制动力学分析
目的 对牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)在Vero-E6、MRC-5和MDBK 3种细胞中的复制动力学进行分析.方法 将BPIV3分别接种至Vero-E6、MRC-5和MDBK 3种细胞,盲传3代,逐日观察细胞病变(CPE)情况;采用直接免疫荧光抗体法检测3种细胞盲传3代后BPIV3的增殖情况;将病毒滴度为1.0×104 TCID50/ml的BHV3分别接种至MDBK和Vero-E6单层细胞中,培养7d,逐日测定各细胞中的病毒滴度.结果 BPIV3在MDBK细胞中盲传1代即可观察到明显的CPE;在Vero-E6细胞中盲传2、3代可见CPE;在MRC-5细胞中盲传3代未见CPE.在MDBK细胞中盲传3代可检测到较强荧光信号;在Vero-E6细胞中盲传3代荧光强度较弱;在MRC-5细胞中盲传3代未检测到荧光信号.BHV3在MDBK和Vero-E6细胞中分别于培养第5和6天时病毒滴度达峰值,分别为1.2×1010和1.0×105 TCID50/ml.结论 BPIV3在MDBK细胞中的复制动力强于Vero-E6细胞,适用于培养该病毒,MRC-5细胞不适用于培养BPIV3.
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新疆出血热病毒免疫荧光试验检测结果报告
目的 了解新疆出血热(XHF)的自然界分布状况.方法 对采自塔里木盆地、准噶尔盆地、伊犁谷地和东疆盆地23个县(市)的96份病原材料分别接种Vero-E6细胞,病原材料经细胞培养后,胰酶消化制备细胞片,应用免疫荧光试验(IFA)对细胞片进行病毒检测.结果 96份病原材料中,检出新疆出血热病毒颗粒阳性材料16份,分布地区包括巴楚、于田、轮台、民丰、尉梨、莫索湾、吐鲁番和木垒.结论 巴楚、于田、轮台、尉梨、莫索湾和木垒地区存在新疆出血热的自然界分布,而民丰和吐鲁番仅从羊血液标本中查出阳性,不能说明该地区存在新疆出血热的自然界分布.
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用Vero-E6细胞大量增殖恙虫病立克次体的研究
目的为了探讨建立一种简便而可靠的恙虫病立克次体增殖方法,以得到较大量的恙虫病立克次体.方法采用了以Vero-E6细胞增殖恙虫病立克次,并且对Vero-E6感染细胞的培养条件进行了改进.结果成功地使恙虫病立克次体在Vero-E6细胞中得到大量增殖.结论改进后的Vero-E6细胞培养法可以获得大量的恙虫病立克次体,该方法既经济又适用.
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水痘带状疱疹病毒蚀斑减少中和试验
[目的]建立水痘带状疱疹病毒中和抗体测定方法.[方法]用VZV1毒种制备中和抗原,以50pfu左右病毒量加待测血清36℃中和1h,接种Vero-E6单层细胞,烛缸法培养10d后,用结晶紫染色,计数pfu;以中和后pfu减少50%的血清高稀释度为中和抗体滴度.[结果]VZV1在Vero-E6细胞上形成的蚀斑呈椭圆形,平均φ0.85mm,边界清晰;经试验3只VZV1免前家兔血清中和抗体滴度<1:2,免后分别为1:16、1:31、1:64;5份中和抗体阳性血清经重复测试3次,中和抗体多相差1个滴度;24份血清同时测定VZV中和、荧光、酶标抗体的GMT比值为1:1.83:46.25.[结论]VZV蚀斑减少中和试验特异性、重复性良好,可用于VZV疫苗免疫效果考核.
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汉滩病毒感染诱导热休克蛋白70表达
为了解汉滩病毒感染后细胞的应激反应及HSP70的表达与病毒复制的关系,在汉滩病毒A9株感染Vero-E6细胞后,用免疫组织化学及核酸分子原位杂交法,对细胞HSP70基因的表达进行了检测.结果表明,汉滩病毒感染细胞4h后即可诱导Vero-E6细胞表达HSP70,表达可持续至感染后5d,且HSP70在细胞内的分布也有改变.提示汉滩病毒可直接诱导HSP70的高表达.
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板蓝根抗肾综合症出血热病毒的研究
目的了解板蓝根对肾综合症出血热病毒的作用.方法将板蓝根加入吸附肾综合症出血热病毒的培养细胞,培养后用荧光检测.结果一定浓度的板蓝根有抗肾综合症出血热病毒的作用.结论高浓度板蓝根对肾综合症出血热病毒有杀灭或抑制作用,临床上可用高浓度板蓝根注射液治疗肾综合症出血热.
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一氧化氮对HSV-1在HeLa细胞和Vero-E6细胞中增殖的影响
以硝普钠作一氧化氮供体,观察不同剂量一氧化氮存在条件下HSV-1在HeLa细胞和Vero-E6细胞中增殖情况.结果表明:一氧化氮对HSV-1在Vero-E6细胞中增殖有明显抑制作用,而对HSV-1在HeLa细胞中增殖无明显影响.提示一氧化氮的抗病毒作用存在着细胞敏感性差异.
