首页 > 文献资料
-
类孟买型ABO基因的检测
为研究类孟买型ABO基因的分子基础,在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,用PCR-SSP法对5例类孟买型样本进行ABO血型的基因定型,并进行ABO基因第6、第7外显子测序.结果表明,本研究的5例类孟买血型样本,经PCR-SSP法基因定型,其ABO基因型分别为A102B1、A102B1、A102O1、A102B1、B1O1;经直接测序实验,该5例样本的ABO基因测序结果与PCR-SSP基因定型结果相一致,未检测出新的点突变.结论:应用PCR-SSP方法可对类孟买型个体进行常规ABO基因定型,具有简便、快速、可靠的特点.
关键词： 类孟买型 ABO基因 聚合酶链反应-序列特异性引物扩增 DNA直接测序 -
ABO变异型B305血型基因亚型的鉴定及序列分析
目的:研究和鉴定1例ABO变异型B3亚型的分子生物学特性.方法:在标准血型血清学方法鉴定的基础上,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)、ABO基因第6、7外显子PCR产物直接测序及克隆测序等方法进行ABO亚型基因分型和序列分析.结果:先证者红细胞含有弱B抗原,同时血清中含有抗-A抗体.PCR-SSP结果显示样本基因型为BO1.直接测序分析发现261 delG,297A/G、425 T/C、526C/G、657C/T、703A/G、796C/A、803 G/C和930G/A 8个位点杂合.克隆测序得到两个等位基因B305和O01.B305等位基因序列与B101等位基因序列比对仅第425位碱基为T＞C突变,导致多肽链M142T替换.结论:α-1,3半乳糖基转移酶基因425位碱基T＞C突变产生B305等位基因,导致B抗原表达减弱.
-
ABO变异型A102Bw33血型基因亚型遗传学鉴定
目的:对1例血清学检测为ABw亚型的样本进行了分子生物学研究及鉴定.方法:在标准血型血清学方法鉴定的基础上,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)、ABO基因第6、7外显子PCR产物直接测序及克隆测序等方法进行ABO亚型基因分型和单倍型分析.结果:先证者红细胞含有A和B抗原,同时血清中含有抗-B抗体.PCR-SSP结果显示,样本基因型为A1B.直接测序分析发现,297A/G、467C/T、526C/G、657C/T、703A/G、803G/C和930G/A 7个位点杂合.克隆测序得到2个等位基因A102和Bw33.Bw33基因序列与B101基因比对仅第796位碱基为A＞C突变,796C是A基因的特性.结论:796碱基A＞C突变导致产生Bw33的表型,其血清中产生抗-B抗体.
-
罕见Ael05/B101亚型鉴定及输血探讨
目的:应用分子生物学方法鉴定ABO正反定型不一致的患者,并探讨合理的输血策略.方法:在常规血型血清学鉴定的基础上,应用吸收放散法鉴定弱血型抗原;PCR方法扩增ABO基因的7个外显子及侧翼内含子;对扩增产物进行直接测序及克隆测序分析.结果:患者ABO血型正反定型不一致,患者正定型为B型,反定型为AB型;吸收放散试验证明患者红细胞上存在弱A抗原,ABO基因测序发现第7外显子767位碱基T＞C突变,导致256位异亮氨酸被苏氨酸替换,血型基因型为ABO* Ael05/Bl01.结论:α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶基因的767位T＞C突变是导致Ael05亚型A抗原表达减弱的分子机制.
关键词： ABO血型 Ael亚型 ABO基因 Ael05/B101亚型 输血 -
ABO基因启动子CpG岛甲基化与白血病的相关性
近年来研究发现ABO血型与许多疾病的发生发展相关,某些肿瘤导致A、B血型物质减少的现象已日益引起关注.本研究探讨ABO基因启动子CpG岛甲基化与白血病的相关性.采用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测了不同血型的健康人群和各种血液病患者外周血红细胞表面ABH抗原的相对含量,用PCR和MSP-PCR分别检测血液病患者和健康人ABO基因启动子DNA序列和CpG岛甲基化,以及ABO基因启动子-102位点的甲基化.结果发现,白血病患者均出现不同程度的A、B抗原减少;通过对比检测健康人和患者的AB0基因启动子序列,未发现有序列的不同,说明启动子序列高度保守;利用重亚硫酸盐对DNA样本进行修饰后,通过对健康人和患者的ABO基因启动子序列进行扩增和测序,发现健康人和再生障碍性贫血患者在ABO基因启动子的CpG岛区没有甲基化的位点,而急性髓性白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性粒细胞白血病(CML)和部分骨髓增生异常综合征(MDS)患者在位置为-102、-101、-100、-99和-97位置的C碱基均有甲基化的现象.结论:甲基化是造成白血病患者AB抗原下降的原因;-102、-101、-100、-99和-97这几个甲基化位点有可能是白血病的特异性表现;针对-102位点检测结果提示-102位点是否甲基化有可能作为白血病鉴别诊断中一个有意义的分子标识物.
-
α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶基因742C》T 突变导致A2亚型
本研究探讨2例ABO亚型A2B的分子机制.利用单克隆抗体检测先证者红细胞ABO血型抗原,用标准A、B、O细胞检测先证者血清中的ABO抗体,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增先证者ABO基因的第5至7外显子序列,其PCR产物经酶切后直接测序分析.同时,PCR产物经TOPO TA克隆到质粒载体中获得单链,对所得克隆进行ABO基因第6、7外显子双向测序分析.结果表明,先证者红细胞有A、B抗原,同时其血清中存在抗A1抗体.直接测序分析发现,第261位无缺失,第297位A/G、467C/T、526C/G、657C/T、703G/A、742C/T、796C/A、803G/C、930G/A杂合.克隆测序得到B101和1个新的A等位基因.与A102相比,新A等位基因仅在第742位C→T突变,导致第248位精氨酸变成色氨酸,新等位基因已被正式命名为A213.结论:α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶基因第742位C→T突变导致产生A2表型,表型个体血清中可含有抗A1抗体.
-
ABO基因多态性rs579459与中国汉族人冠心病严重程度的相关性研究
目的 探讨ABO基因多态性rs579459与汉族人冠心病严重程度的相关性.方法结合课题组前期冠心病的关联分析数据,选取515例汉族人冠心病患者和908例健康对照的ABO基因多态性rs579459基因分型资料,PLINK1.07软件对选取数据资料进行分析.结果在冠心病患者和正常对照比较发现ABO基因多态性rs579459基因频率显示与冠心病的遗传有倾向性(OR:1.28,95 C I:1.11～1.65,P=0.027),通过对结果分层分析研究我们发现相比对照组和轻-中度冠心病患者,严重冠心病患者与rs579459相关(OR:1.78,95％C I:1.25～2.34,P=1.85×10-4).结论ABO基因多态性rs579459与汉族人冠心病发病易感性有遗传倾向,与冠心病发病严重程度相关.
-
ABO基因启动子CpG岛甲基化与鼻咽癌的相关性研究
目的 探讨鼻咽癌与ABO基因启动子CpG岛甲基化的相关性,为鼻咽癌的早期诊断提供依据.方法 采用病例对照研究,取46例鼻咽癌患者和30例健康者的基因组DNA样本应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)-序列直接测定技术,检测ABO基因启动子DNA序列,采用重亚硫酸盐转化后克隆测序法检测ABO基因启动子CpG岛甲基化程度.结果 鼻咽癌患者和健康人群的ABO基因启动子序列未发现有序列的不同.与正常对照标本比较,分析的ABO启动子区内共37个CpG位点的甲基化水平,发现鼻咽癌患者所有位点均检出甲基化,呈现不同程度的甲基化水平,其中nt-26C残基甲基化高达20.52％.结论 鼻咽癌与ABO启动子CpG岛甲基化存在相关性,多个甲基化位点可能是鼻咽癌的特异性表现.
-
应用多重PCR-RFLP技术检测头发、口腔腭粘膜的ABO基因型
目的探讨对头发、口腔腭粘膜等组织标本进行ABO基因分型的可行性.方法应用多重聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(多重PCR-RFLP)技术,检测8例头发和6例口腔腭粘膜标本的ABO基因型,标本的基因组DNA经2对引物同时进行扩增,扩增后的产物同时用Msp Ⅰ和Kpn Ⅰ 2种限制酶进行消化,通过消化后产生的片段即可判断结果.然后将分析结果与血清学技术检测的ABO表现型和受检者血液标本的基因型进行比较.结果 14例标本共检出6种ABO基因型,与表现型和血液标本的基因型结果完全一致.结论该方法操作方便,重复性、稳定性好,可鉴定15种基因型,应用于法医学鉴定具有可行性.
关键词： 多重聚合酶链反应-限制性片段长度多态性 ABO基因 基因分型 -
B303亚型的血型分子机制及临床输血分析
目的 探讨B303亚型在临床输血中的相关问题.方法 对1例ABO血型正反定型不符患者的血型通过血清学鉴定、PCR-SSP、ABO基因直接测序、TA克隆单体型分析等方法分析其分子机制,同时对该患者的输血情况进行分析.结果 ABO基因在第3内含子发生IVS3+5G＞A杂合突变,此突变影响剪接供体,使其发生异常剪切,影响D-半乳糖转移酶(GTB)正常表达.结论 ABO基因IVS3+5G＞A杂合突变是导致B3亚型的分子遗传基础之一.
-
B(A)血型的鉴定及临床输注探讨
目的 对1例常规血清学为B(A)表现型的献血者进行血型鉴定,探讨B(A)血型在临床输注中的安全性和有效性.方法 采用血型血清学、ABO基因第6及第7外显子直接测序和克隆测序的方法,对该例标本的血清学表型和其ABO等位基因进行检测；同时回顾性调查该献血者前次已献血液输注给B型受血者的相关实验记录和病历.结果 被检血样的血型血清学结果初步定型为B(A)；直接测序和克隆测序发现:被检者含有O01等位基因,B等位基因在第7外显子存在640A/G突变,证实其为B(A)04等位基因,其基因型为B(A)04/O01；该献血者血液输给B型受血者,Hb升高符合预期值,无输血不良反应发生.结论 发现该例B(A)表现型,其基因型为B(A)04/O01型；在配血相合的情况下,B(A)供血者血液输注给B型受血者是安全有效的.
-
ABO亚型B（A）04的鉴定及分子机制研究
目的：研究B(A)04血型的特性，为B(A)04血型的临床输血提供理论基础。方法应用血型血清学技术和基因分型技术鉴定B(A)04血型的特性，采用PCR方法扩增其ABO基因7个外显子、侧翼内含子，PCR 产物采用直接测序和克隆测序方法，以确定B(A)血型的分子机制。结果血型血清学有相应的反应格局，患者正定型： A弱B，反定型： A1c 2+，Bc阴性，ABO基因测序发现第7外显子640位碱基发生A>G突变，导致214位蛋氨酸被缬氨酸替换，ABO血型基因型为ABO*B(A)04/O01。结论亚型或稀有血型的鉴定分析要慎重，必要时应用血型基因分型技术辅助定型，保障输血安全。
-
异常ABO表型遗传的分子背景研究
ABO系统是人类早发现的血型系统,其血清学分型简便、稳定.1925年Bernstein确定ABO血型遗传学说之后,开始被应用于法医学上真正科学意义的亲权关系鉴定.ABO血型的遗传符合经典的遗传规律,直到1964年cis-AB血型的发现,人们才开始进一步研究血型的遗传规律.到目前为止,国内外陆续报道了数个罕见家系,在DNA多态性分析结果显示不能排除或肯定其亲权关系的家族成员中,ABO血型表型遗传不符合孟德尔遗传规律,这引起了研究者对经典遗传规律的质疑.经过血型工作者对ABO血型的分子遗传背景深入研究,已能从ABO基因水平解释此异常现象.
-
A3亚型血型的血清学和分子生物学鉴定分析
目的 探讨A3亚型血型的血清学和分子生物学特征.方法 采用单克隆抗-A、抗-B、抗-A1血型试剂检测2例ABO正反定型不符先证者的红细胞ABO抗原,采用标准A、B、O反定型细胞检测先证者血清中的抗-A和(或)抗-B抗体,采用PCR-序列特异性引物分析法确定基因型,采用基因测序法检测ABO基因第6内含子和第7外显子基因序列,同时采集先证者1妻子、女儿的血液标本进行血清学血型和基因检测.结果 先证者1、2红细胞与抗-A呈混合视野反应,血清与B型红细胞呈4+,PCR-序列特异性引物分析基因型分别为A307/O02和A102/O01,基因测序结果第7号外显子分别为C745T和C467T突变;先证者1妻子、女儿血型分别为A型、O型,基因型分别为A101/O02、O02/O02.结论 A3亚型ABO等位基因存在遗传的多态性.
-
中国人群ABO亚型中一个新的Ax等位基因的鉴定
目的 Ax是一种罕见的ABO亚型,其分子机理尚未完全阐明.本文以一个Ax亚型家系和一个无关的Ax亚型献血者个体为对象,研究中国人群Ax亚型的分子基础.方法 ABO血清学定型、血浆N-乙酰-D-半乳糖胺基转移酶(A酶)活性测定、ABO基因7个外显子及其侧翼序列的PCR扩增、基因克隆和测序分析.结果 DNA克隆和测序分析显示,家系先证者和无关献血者个体的ABO基因分别为A/O01和A/O02基因型,在第7外显子均存在426G>C杂合突变,导致N-乙酰-D-半乳糖胺基转移酶的氨基酸发生M142I改变.在120个正常样本中未检出此突变.结论 ABO基因426G>C突变导致的N-乙酰-D-半乳糖胺基转移酶第142位氨基酸置换改变了酶的保守区域,从而降低了酶的催化活性,导致Ax表现型.本突变为国际首次报道.
-
红细胞A3亚型的分子生物学鉴定
目的 研究A3亚型的血清学特征.方法 血液标本采集后分成2份,一份做常规血清学实验,包括ABO血型定型、吸收放散实验、抗体筛选实验;另一份抽提DNA后,扩增ABO血型基因6、7外显子并进行测序研究.留取该同一来源的唾液标本进行中和抑制实验,以检测唾液中的ABH血型物质.结果 献血者标本ABO血型正、反定型不一致,红细胞可吸收放散抗-A,血清未检出不规则抗体,唾液检出A、H血型物质.测序结果显示其第6外显子C:297A＞G(杂合),第7外显子C:474C＞T(纯合).结论 该献血者为A3亚型,发现1个新的突变位点C:474C＞T.
-
应用PCR-RFLP技术进行ABO基因分型研究
目的 建立PCR-BFLP技术鉴定ABO血型基因型的方法. 方法 应用PCR技术扩增ABO基因第六外星子上分别包含258位核苷酸和700位核苷酸的两个DNA片段,分别用KpnI和AluI酶解PCR扩增产物,电泳分离鉴定ABO血型基因型.同时对上述两种PCR扩增的DNA片段进行序列测定. 结果 用PCR-RFLP技术鉴定的ABO基因分型结果与PCR扩增产物的序列测定结果完全符合,可鉴定出AA、AB、AO、BB、BO、OO等6种ABO血型基因型. 结论 PCR-RFLP技术操作简便,重复性和稳定性好,可作为鉴定ABO血型基因型的可行方法.
-
1例B(A)亚型的血清学及分子生物学特征分析
ABO血型系统是具临床意义的血型系统 ,供受者ABO血型不合常引起溶血性输血反应、新生儿溶血病和移植排斥反应等.ABO血型除了常见的 A 型、B型、O 型和 AB型外 ,还会有一些抗原性较弱的亚型被发现 ,这些亚型通常表现为正反定型不一致或凝集强度的改变.ABO亚型的出现给血型鉴定、交叉配血和临床输血带来极大困难 ,严重影响输血的安全性[1-2] .2016年 ,青岛市胶州中心医院输血科在血型鉴定工作中遇到1例ABO正反定型不符的标本 ,经青岛市中心血站血型参比实验室检测被确认为B (A )04/O02基因型.现将研究结果报道如下.
-
ABO血型变异的研究进展
ABH血型抗原是在红细胞、内皮细胞、上皮细胞表面的糖蛋白或糖脂类蛋白上发现的碳水化合物结构.血型物质的前体H物质受糖基转移酶的修饰和控制.糖基转移酶是由ABO基因的1对等位基因决定,而红细胞上的H抗原则由FUT1基因控制的岩藻糖基转移酶所决定.A抗原由N-乙酰半乳糖胺修饰H抗原表达;B抗原由半乳糖胺修饰H抗原表达;O抗原则是H抗原本身,没有任何结构的修饰.ABH抗原变异已经被认为是髓系白血病常见的症状,也出现在许多癌症患者的肿瘤细胞上.健康人的抗原也存在抗原变异的现象,但是这与细胞表面血型物质受到掩盖以及人体存在一些稀有ABO等位基因有关,如A3和B3.
-
一例ABO血型系统B抗原减弱表达的分子机制
目的 研究1例B抗原减弱献血者的血清学特性和抗原减弱的分子机制.方法 应用单克隆抗体检测献血者红细胞ABO血型抗原,标准A、B、O红细胞检测其血清中的ABO抗体,并检测其血清转移酶活性.采用聚合酶链反应技术扩增ABO基因全部外显子序列和5′端非编码区序列并进行测序分析,应用逆转录-PCR和克隆测序技术分析献血者ABO cDNA转录剪接情况,采用重亚硫酸盐转化直接测序法分析ABO基因启动子区CpG岛甲基化水平.结果 献血者血清学表现为B抗原明显减弱,血清中无抗-B抗体,B转移酶活性降低.基因型为B101/O01,全部外显子序列和拼接接受位点碱基无任何突变.5′端非编码区序列多态性符合B101/O01的特征,启动子、增强子、负调控序列和微卫星重复序列未发现异常.献血者存在ABO基因全长cDNA转录本,未发现新的转录剪接体.与正常对照标本比较,在启动子区CpG岛内发现启动子附近有多个特异性半甲基化位点.结论 启动子区CpG岛中的甲基化位点可能是引起B抗原弱表达的原因.
