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儿童异基因造血干细胞移植后早期调节性T细胞及iNKT细胞重建与aGVHD的关系
本研究旨在探讨儿童患者异基因造血干细胞移植后90 d内调节性T细胞及iNKT细胞重建与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系.对29例进行异基因造血干细胞移植的儿童患者分别于移植术后15 d、30 d、60 d、90 daGVHD发生时、糖皮质激素治疗后2周测定外周血淋巴细胞中CD4+CD25+CD127lowTreg细胞、CD3+TCRVα24+iNKT细胞的比例.根据是否发生aGVHD将患者分为non-aGVHD组和aGVHD组,比较两组患者移植后90 d内(15 d、30 d、60 d、90 d)外周血淋巴细胞中Treg细胞和iNKT细胞的比例有无差异;根据aGVHD患者对于糖皮质激素的治疗反应分为糖皮质激素治疗有效组和糖皮质激素治疗抵抗组,比较两组患者aGVHD发生时和糖皮质激素治疗后2周外周血淋巴细胞中Treg细胞、iNKT细胞的比例有无差异.结果显示:non-aGVHD组患者移植后15 d Treg细胞比例显著高于aGVHD组患者(P=0.040);non-aGVHD组患者与aGVHD组患者移植后90 d内(15d、30d、60 d、90 d)外周血淋巴细胞中iNKT细胞比例无显著差异,但是non-aGVHD组患者15 d iNKT/T细胞的比值显著高于aGVHD组患者(P=0.025).结论:对儿童异基因造血干细胞移植患者移植后早期联合监测Treg细胞和iNKT细胞的恢复情况,可能有助于aGVHD的早期发现和治疗.
关键词： 儿童异基因造血干细胞移植 Treg细胞 iNKT细胞 aGVHD -
肿瘤细胞／糖脂类分子联合 TLR 9配体治疗小鼠结肠癌的效果研究
目的构建肿瘤细胞/糖脂类复合物联合TLR9配体的肿瘤疫苗，并探讨上述肿瘤疫苗对小鼠结肠癌的治疗效果。方法运用慢病毒转染GFP-CD1d至MC38肿瘤细胞构建CD1d-MC38细胞系，并加载α-Galcer（α-galactosylceramide ，α-GC）至上述细胞系制备CD1d-MC38/α-Galcer复合物。利用RT-PCR、流式细胞术检测MC38细胞系CD1d的表达情况以及对于α-Galcer结合效率。后建立小鼠MC38结肠癌皮下肿瘤模型，观察肿瘤细胞/糖脂类复合物联合TLR9配体的肿瘤疫苗（ CD1d-MC38/α-GC＋CpG1826）对于小鼠肿瘤的治疗作用，免疫组化方法检测肿瘤组织中CD4＋T和CD8＋T细胞浸润情况。结果成功构建了表达CD1d分子的CD1d-MC38细胞系，CD1d阳性的CD1d-MC38细胞比例为（98．10±2．53）％；且该细胞系能有效结合α-Galcer，随着α-Galcer浓度升高和加载时间的延长，其结合效率逐渐上升；CD1d-MC38/α-GC＋CpG1826肿瘤疫苗能有效延缓小鼠皮下肿瘤生长（与其余各组比较，P＜0．01），延长荷瘤小鼠生存时间（与CD1d-MC38/α-GC组比较，P＜0．05；与其余各组比较，P＜0．01）；肿瘤组织免疫组化显示，实验组肿瘤组织中有更多的CD4＋T细胞和CD8＋T细胞浸润，与CD1d-MC38/α-GC组比较，差异无统计学意义（P＞0．05），与其余各组比较，差异有统计学意义（P＜0．01）。结论肿瘤细胞/糖脂类复合物联合TLR9配体的肿瘤疫苗能抑制小鼠肿瘤生长，延长荷瘤小鼠生存期，发挥抗肿瘤作用有赖于CD4＋T细胞和CD8＋T细胞。
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免疫调节剂CH2b对活动期类风湿关节炎患者iNKT细胞免疫调节功能的影响
目的 研究新型合成的含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂CH2b对活动期类风湿关节炎(RA)患者iNKT(invariant nature killer T)细胞功能的影响.方法 外周血单个核细胞(PBMC)分离自活动期RA患者,经α-Galcer和IL-2体外刺激扩增后利用iNKT分离试剂盒经磁珠分选(MACS)得到纯化的iNKT细胞;采用MTT法定量测定CH2b对iNKT细胞增殖的影响;MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine kit检测相应iNKT细胞培养上清中IFN-γ/IL-4的水平;RT-PCR检测iNKT细胞中IFN-γ mRNA与IL-4 mRNA表达水平;Western blot检测iNKT细胞中T-bet/GATA-3表达水平.结果 CH2b能显著促进IL-2活化的iNKT细胞体外增殖;增加IL-4的分泌且显著降低IFN-γ/IL-4比值;上调iNKT细胞GATA-3和IL-4 mRNA表达.结论 免疫调节剂CH2b有可能通过GATA-3通路诱导iNKT细胞分泌Th2样细胞因子,促进Th0向Th2分化,提高iNKT细胞的免疫调节功能.
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mTOR对iNKT细胞发育和分化的影响
iNKT细胞是近发现的一类具有重要免疫功能的特殊T细胞亚群.其发育分化受多种因素的影响,新研究发现mTOR在iNKT细胞的发育分化中起关键作用.mTORC1控制着iNKT细胞阶段1、2、3的发育转变,且与PLZF互相调节影响iNKT细胞的发育分化,mTORC2在iNKT细胞由阶段1到2转变过程中起重要作用.促进mTORC1与mTORC2活化的主要有RasGRP1、PDK1和RheB.旨在阐明mTOR对iNKT细胞发育分化的影响.
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影响iNKT细胞分化的信号通路研究进展
iNKT细胞是一群连接固有免疫和适应性免疫的特殊桥梁细胞,在胸腺中发育并分化.近年研究发现,E蛋白家族(E2A、HEB)和早幼粒白血病锌指蛋白(PLZF)是调控iNKT细胞分化早基础的转录因子,在此基础之上,通过激活细胞内不同信号通路包括丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路、TGF-β /SMAD通路、PI3K/Akt/mTOR通路等,iNKT细胞可分化为五个亚群,至今研究较为透彻的为iNKT1、iNKT2、iNKT17亚群.就上述三条通路对iNKT细胞分化的影响展开综述.
关键词： iNKT细胞 信号通路 细胞分化 E蛋白 早幼粒白血病锌指蛋白 -
组蛋白去甲基化酶UTX对iNKT细胞发育的影响
恒定自然杀伤T(invariant nature killer T,iNKT)细胞是一群兼具自然杀伤(natural killer,NK)功能和T细胞特点的特殊免疫细胞,主要识别CD1d呈递的糖脂类抗原,其在感染、 肿瘤、 移植免疫和自身免疫疾病中均发挥重要作用.新研究发现iNKT细胞的发育受表观遗传因素的调控.组蛋白甲基化是一种重要的表观遗传学修饰标记,参与基因的表达调控.组蛋白H3赖氨酸27三甲基化(H3 Lysine 27 Trimethylation,H3K27me3)是抑制基因转录的表观遗传修饰标记之一.组蛋白H3K27me3受组蛋白甲基转移酶和去甲基化酶的调控,可被去甲基化酶UTX催化而移去甲基,从而促进基因转录.组蛋白修饰酶对iNKT细胞的分化发育有非常重要的影响,其研究也越来越受到人们的关注.主要阐述了UTX如何通过多种表观遗传机制来调控iNKT细胞的发育.
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iNKT细胞在肥胖脂肪组织慢性炎症发生中的作用
肥胖症是一种多因素引起的慢性代谢性功能紊乱疾病,炎症在肥胖和代谢综合征中起重要的作用.肥胖所伴随的低度慢性炎症,与冠心病、 高血压、 糖尿病等紧密相关.近来研究发现恒定自然杀伤T(invariant natural killer T,iNKT)细胞在脂肪组织炎症中发挥重要作用,并一度被认为是肥胖脂肪组织炎症的主要参与者,其在慢性炎症中的研究也越来越受到人们的关注.在脂肪组织中,激活iNKT是通过脂肪细胞上面的CD1d来呈递脂质抗原,同时iNKT细胞产生的细胞因子又会调节脂肪细胞的功能,以此来改变抗炎脂肪因子的表达以及炎症性和趋化因子的产生.因此,脂肪细胞与iNKT细胞之间的相互作用可能不仅影响肥胖,还会影响肥胖相关疾病的发展,但iNKT细胞到底是促进还是抑制肥胖脂肪组织炎症的发生发展呢?目前具体作用机制还没有详细阐明.在该综述中,总结并讨论了iNKT细胞在肥胖脂肪组织慢性炎症中的新研究进展,从而为后续肥胖及肥胖相关性疾病研究做理论支撑和基础准备.
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3种品系小鼠iNKT细胞组织特异性分布
目的 比较3种品系小鼠外周血、 胸腺、 脾脏和肝脏中iNKT细胞频率及胸腺、 脾脏、 肝脏iNKT细胞中iNKT1、iNKT2亚群比例的差异.方法 分别以DBA/1、NOD/LtJ及C57BL/6J 3种品系小鼠为研究对象,分离健康小鼠外周血、 胸腺、 脾脏和肝脏的淋巴细胞,采用FCM检测各组织器官中TCRβ和CD1d四聚体双阳性的iNKT细胞频率,并根据核内PLZF和T-bet的表达水平确定iNKT1和iNKT2亚群.结果 (1)3种品系小鼠外周血中iNKT细胞频率低,肝脏中iNKT细胞频率高,脾脏和胸腺iNKT细胞频率介于两者之间.其中,C57BL/6J小鼠胸腺iNKT细胞频率显著低于DBA/1及NOD/LtJ小鼠,肝脏iNKT细胞频率显著高于其他2品系小鼠;NOD/LtJ小鼠脾脏、 肝脏iNKT细胞频率显著低于C57BL/6J及DBA/1小鼠.(2)3种品系小鼠胸腺iNKT细胞中iNKT2亚群占比较高,脾脏、 肝脏中iNKT细胞以iNKT1亚群为主.其中,C57BL/6J小鼠胸腺iNKT2亚群比例低;NOD/LtJ小鼠胸腺iNKT2亚群比例高,脾脏、 肝脏iNKT1亚群比例较高.结论 DBA/1、NOD/LtJ及C57BL/6J 3种品系小鼠,同一品系小鼠不同组织器官iNKT细胞频率及亚群比例,不同品系小鼠同一组织器官iNKT细胞频率及亚群比例存在很大差异.
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含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂对RA患者iNKT细胞免疫调节功能的影响
目的：研究新型合成的含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂（CH1b）对活动期RA患者iNKT细胞免疫调节功能的影响。方法：从RA患者外周血中分离得到单个核淋巴细胞（ PBMC），α-Galcer和IL-2体外刺激扩增后，经磁珠分选（ MACS）得到纯化的iNKT细胞，分成对照组（IL-2）、α-Galcer组（IL-2＋α-Galcer）、CH1b组（IL-2＋CH1b）。采用MTT法测定各组RA患者iNKT细胞增殖率；MILLIPLEX MAP Human Cytokine／Chemokine kit检测各组RA患者iNKT细胞培养上清中IFN-γ和IL-4的水平；采用RT-PCR方法检测各组RA患者iNKT细胞中IFN-γmRNA和IL-4 mRNA的表达水平。结果：与对照组和α-Galcer组相比，CH1b组iNKT细胞增殖率明显增加（P＜0.05）；与对照组相比，α-Galcer组IFN-γ和IL-4分泌水平明显增加（P＜0.05）， CH1b组IFN-γ和IL-4的分泌量也明显增加，IFN-γ／IL-4明显降低（P＜0.05）；与对照组相比，α-Galcer组IFN-γmRNA与IL-4 mRNA表达均明显增高，CH1b组IFN-γmRNA表达差异不明显，IL-4 mRNA的表达明显增高。结论：新型合成的免疫调节剂（ CH1b）可促进活动期RA患者活化的iNKT细胞增殖，并促进IL-4的分泌，上调IL-4 mRNA的表达，诱导iNKT细胞向Th2方向分化，对恢复RA病人体内免疫平衡具有重要意义。
关键词： 类风湿关节炎 iNKT细胞 免疫调节剂 IFN-γ/IL-4 -
NOD/Ltj小鼠Ⅰ型糖尿病不同发病阶段细胞免疫状态研究
目的:通过对NOD/Ltj小鼠在未发病、发病初期与发病末期不同组织器官中CD4+T、CD8+T细胞,Th1、Th2、Th17亚群,iNKT细胞频率及亚群,细胞因子、相关转录因子进行观察分析,进一步了解NOD/Ltj小鼠Ⅰ型糖尿病不同发病阶段细胞免疫功能状态.方法:选用雌性NOD/Ltj小鼠为实验对象.血糖仪检测小鼠空腹血糖值,根据尿糖阳性且连续2次≥11.1 mmol/L作为T1D发病标准将动物分为未发病组、发病初期组、发病末期组.流式细胞技术(FCM)检测各组小鼠外周血、胸腺、脾脏、肝脏中CD4+T、CD8+T细胞,Th1、Th2、Th17亚群,iNKT细胞频率及亚群比例以及腹股沟淋巴结CD4+T、CD8+T细胞;CBA检测IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6、IL-17A、IL-4、IL-10;WB检测PLZF、T-bet、GATA-3、ROR-γt.结果:①与未发病组比较,发病初期组CD4+、CD8+T细胞频率在脾脏、肝脏、胸腺、腹股沟淋巴结中均显著增加(P<0.05);与发病初期组比较,发病末期CD4+T细胞频率在肝脏、胸腺、腹股沟淋巴结及外周血中均显著降低(P<0.05).②在脾脏、肝脏中,与未发病组和发病初期组比较,发病末期组Th1亚群比例显著增加(P<0.05);在肝脏中,与发病初期组比较,发病末期组Th2、Th17亚群水平显著升高(P<0.05).③与未发病组比较,发病初期组肝脏、腹股沟淋巴结中iNKT细胞频率均显著增高(P<0.05);与发病初期组比较,发病末期组外周血、肝脏中iNKT细胞频率显著降低(P<0.05);与未发病组比较,发病初期组和发病末期组胸腺iNKT1亚群比例均显著增加,iNKT2亚群比例均显著降低(P<0.05),脾脏、肝脏、腹股沟淋巴结iNKT1及iNKT2亚群比例三组两两比较均差异均无统计学意义(P>0.05).④在脾脏和腹股沟淋巴结中致炎性细胞因子和抑炎性细胞因子水平在发病初期较未发病组和发病末期组均显著升高(P<0.05);在肝脏中致炎性细胞因子水平随小鼠病情进展逐渐升高,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);抑炎性细胞因子水平在发病初期高,发病末期显著降低(P<0.05).⑤胸腺PLZF相对表达量,三组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05);脾脏和肝,与未发病组和发病初期组比较,发病末期组T-bet相对表达量显著增加(P<0.05).结论:①发病初期CD4+T和CD8+T细胞的增加,特别是CD4+T细胞的增加以及Th亚群的失衡是导致胰岛炎重要的免疫基础;②发病初期iNKT细胞频率的增加以及胸腺iNKT1/iNKT2亚群比例的翻转,提示了iNKT细胞在NOD/Ltj小鼠发病初期可能参与了T1 D的发生.
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免疫调节剂CH2b对葡萄糖－6－磷酸异构酶混合肽段诱导的类风湿性关节炎小鼠的影响
目的：探究前期合成的含噻唑烷－4－酮的免疫调节剂CH2b 对葡萄糖－6－磷酸异构酶（ Glucose－6－phosphate isomerase，GPI）混合肽段诱导的类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）小鼠发病的影响。方法：hGPI325－339、hGPI469－483多肽片段与完全弗氏佐剂充分乳化后，于DBA／1小鼠尾根部多点皮下注射，并用百日咳毒素加强免疫。然后分别用α－半乳糖神经酰胺（α－GalCer）和CH2b对模型小鼠进行干预，监测各组小鼠体重变化和足踝关节肿胀变化情况，关节组织苏木精－伊红（Hematoxylin－eosin staining，HE）染色法观察炎细胞浸润情况，流式细胞技术（Fluorescence－activated cell sorting，FACS）检测全血中iNKT细胞频率变化，微量样本多指标流式蛋白定量技术（Cytometric bead array，CBA）检测血清中细胞因子TNF－α、IL－6、IL－4、IFN－γ水平。结果：与GPI混合肽段诱导的模型组相比，α－GalCer和免疫调节剂CH2b均可显著改善模型小鼠的体重增长缓慢、关节肿胀情况（P＜0．05）；炎性细胞浸润减少；且二者均可以显著提高RA小鼠体内iNKT细胞的频率，与模型组相比，差异有统计学意义（P＜0．05）；α－GalCer、CH2b组可以降低模型小鼠炎症高峰期TNF－α、IL－6、IFN－γ水平，两组结果差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：免疫调节剂CH2b通过激活iNKT细胞影响炎性细胞因子的分泌，缓解GPI混合肽段诱导的关节炎。
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活动性结核病人PBMCs中转录因子PLZF的表达降低与iNKT细胞的减少相关
目的:比较活动性结核病人和健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中转录因子PLZF (Promyelocytic leukemia zinc finger)的表达和iNKT细胞含量的差异,研究活动性结核病人PBMCs中PLZF的表达与iNKT细胞含量的相关性.方法:采集活动性结核病人和健康人新鲜的抗凝血,淋巴细胞分离液分离PBMCs.每个样本的PBMCs分两份,一份细胞用Trizol法提取总RNA,荧光定量PCR检测PLZF mRNA的相对表达量;另一份细胞用特异性抗体标记iNKT细胞,流式细胞仪检测iNKT细胞的含量.统计学软件分析两组样本PLZF的表达和iNKT细胞含量的差异,以及PLZF的表达与iNKT细胞含量的相关性.结果:活动性结核病人PMBCs中PLZF的表达和iNKT细胞含量均显著低于健康对照(P值分别为0.010 2和0.001 2),PLZF的表达与iNKT细胞的含量成正相关(r=0.480 4,P=0.027 5).结论:活动性结核病人PLZF的表达降低与iNKT细胞百分含量的减少相关.
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CD3+ CD56+ NKT细胞与Vα24+iNKT细胞的检测及其表型特点分析
为了比较CD3+ CD56+ NKT细胞与CD3+ TCRVα24+ iNKT细胞在外周血淋巴细胞中的相对比例及其表面分子表达的差别,本研究采集了健康人外周全血,用四色荧光抗体染色和流式细胞术检测CD3+ CD56+ NKT细胞和CD3+TCRVα24+ iNKT细胞在淋巴细胞中的比例,及其亚群表型及活化分子CD69的表达情况.检测结果表明,在正常人外周血淋巴细胞中CD3+ CD56+ NKT细胞所占比例为3.90％士2.89％,以CD8亚群占多数(57.61％±17.35％);而CD3+TCRVα24+ iNKT细胞所占比例仅为0.39％士0.19％,且以CD4亚群占多数(56.60％±19.66％).两种NKT细胞的相对数量之间存在显著正相关(r=0.467,P＜0.05),但两类细胞之间极少重叠.CD16和CD161在CD3+ CD56+ NKT细胞上的表达量显著高于在CD3+ TCRVα24+ iNKT细胞上的表达量(P均＜0.01).活化分子CD69在两种细胞上的表达量均较低(P＞0.05).本研究结果表明,正常人外周血CD3+ CD56+ NKT细胞与CD3+ TCRVα24+ iNKT细胞在相对数量、亚群及表型上存在显著差异,是两种截然不同的NKT细胞.
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乙型肝炎肝硬化患者外周血iNKT细胞活化标志物CD38和HLA-DR表达水平与肝损伤程度相关性
目的 探讨乙型肝炎肝硬化(LC)患者血清iNKT细胞数量、活化标志物CD38和HLA-DR表达水平与肝损伤程度的关系.方法 采用流式细胞仪检测LC患者外周血iNKT细胞频率及CD38和HLA-DR分子在iNKT细胞上的表达水平,分析其与LC患者肝功能Child-Pugh分级、MELD评分及临床肝功能指标相关性.两组数据比较采用Mann-Whitney U检验,相关性分析采用Spearman rank检验.结果 与健康对照组相比,LC患者组iNKT细胞频率为0.106％,显著降低(P=0.026),CD4+ iNKT细胞比例为66.7％,显著升高(P＜0.01),CD4-iNKT细胞比例为31.2％,显著降低(P＜0.01);CD38和HLA-DR在iNKT、CD4+ iNKT和CD4-iNKT细胞上表达水平分别为14.2％、24.9％,18.8％、19.1％,18.4％、36.9％,明显升高(P＜0.05),随着Child-Pugh分级有逐渐升高的趋势,但分级之间差异无统计学意义.CD4+ iNKT细胞上CD38和HAL-DR分子表达水平与ALB呈显著负相关(r=-0.496,P=0.019;r=-0.501,P =0.018).结论 LC患者iNKT细胞频率明显降低;活化水平显著升高,且与肝功能损害程度相关,提示iNKT细胞可能参与LC肝损伤.
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重型再生障碍性贫血患儿外周血及骨髓NKT细胞数量及功能变化
目的 探讨NKT细胞数量及其功能在重型再生障碍性贫血患儿外周血及骨髓中的变化.方法 采用流式细胞术检测10例重型再生障碍性贫血初治患儿及10例骨科对照儿童外周血及骨髓CD3+CD1d四聚体+NKT细胞水平.利用免疫磁珠法分离纯化iNKT细胞后,在NKT细胞的配体OCH+重组人白介素-2(rhIL-2)+重组粒系集落刺激因子(rhG-CSF)培养体系下进行扩增培养.测定在不同浓度OCH培养条件下,iNKT细胞的扩增倍数,并利用酶联免疫斑点技术测定iNKT细胞扩增活化后表达肿瘤坏死因子(IFN-γ)、白细胞介素(IL-4)的斑点形成细胞数.结果 再生障碍性贫血患儿外周血中CD3+CD1d四聚体+NKT百分率为(0.72±0.03)%,明显低于对照组的(0.92±0.02)%,骨髓中CD3+CD1d四聚体+NKT百分率为(0.82±0.02)%,明显低于对照组的(1.05±0.05)%,差异有统计学意义(P均=0.000).再生障碍性贫血患儿骨髓iNKT细胞体外扩增能力显著低于对照组;且中高浓度OCH条件下,iNKT细胞扩增倍数增高,生成IFN-γ降低,而生成IL-4增高,与低浓度条件下相比,差异有统计学意义(P均<0.01).结论 重型再生障碍性贫血患儿存在外周血及骨髓NKT细胞水平降低及功能异常;OCH能够促进iNKT细胞扩增,并可改善IL-4/IFN-γ的失衡,可能具有潜在的治疗价值.
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慢性HBV感染者血清IL-15和外周血iNKT细胞水平变化及相关性研究
目的 探讨慢性乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)感染者血清IL-15和外周血恒定自然杀伤T(invariant nature killer T, iNKT)细胞水平的变化.方法 收集54例慢性HBV感染者和15名健康者外周血,分离血清和外周血单个核细胞(PBMC);ELISA法检测血清中IL-15水平;流式细胞术检测iNKT细胞占T细胞的比例,PMA、BFA和ionomycin处理PBMC后,流式细胞术检测iNKT分泌的IFN-γ和TNF-α水平,并利用Pearson法进行相关性分析.结果 与正常对照者相比,免疫清除期患者血清中IL-15水平明显升高(P<0.05),免疫耐受期患者高于正常对照者,低于免疫清除组,差异无统计学意义(P>0.05);免疫清除期和免疫耐受期患者血清ALT水平和HBV DNA载量与IL-15水平无明显相关性(P>0.05).免疫清除期患者外周血iNKT细胞比例显著降低,免疫耐受期患者略升高,但差异无统计学意义(P>0.05).免疫耐受期和清除期患者外周血iNKT细胞分泌IFN-γ和TNF-α的细胞比例略有升高,但差异无统计学意义(P>0.05).免疫耐受期和免疫清除期患者iNKT细胞分泌IFN-γ水平与IL-15水平呈正相关;免疫耐受期和免疫清除期患者iNKT细胞分泌TNF-α水平与IL-15水平无相关性(P>0.05).结论 慢性HBV感染者血清中IL-15水平升高,且外周血iNKT细胞数量减少,且不同感染状态患者血清IL-15水平和外周血iNKT细胞数量呈动态变化.
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α半乳糖神经酰胺活化iNKT细胞对哮喘小鼠过敏性气道炎症的影响
目的:观察α半乳糖神经酰胺(α-GalCer)活化iNKT细胞对卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠过敏性气道炎症的影响.方法:将24只BALB/c小鼠随机分为:正常小鼠组(A组)、哮喘小鼠组(B组)和哮喘小鼠α-GalCer干预组(C组).建立哮喘模型,以α-GalCer或PBS干预.分别以苏木素伊红(HE)染色和过碘酸雪夫(PAS)染色观察肺组织炎症和气道杯状细胞增生;检测肺泡灌洗液(BALF)细胞计数.流式细胞术检测肺组织iNKT细胞的数量、表面分子CD69及分泌细胞因子水平.结果:与B组比较,C组小鼠肺组织炎性细胞浸润增多,杯状细胞增生增加,BALF中细胞总数及分类数增加.同时α-GalCer干预后哮喘小鼠肺iNKT细胞被激活,表现为iNKT细胞的数量及表面分子CD69和分泌细胞因子水平增加.结论:α-GalCer可能通过活化的iNKT细胞促进哮喘小鼠过敏性气道炎症.
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结核病患者外周血iNKT细胞数量与功能缺陷
目的 通过对比分析结核病患者与健康个体外周血中恒定自然杀伤T细胞(invariant nature killer T cells,iNKT)的比例、表型以及功能,认识iNKT细胞在结核病患者体内的功能状态,为探讨基于iNKT细胞的干预措施在结核病防治中的应用奠定基础.方法 收集武汉市新洲区人民医院收治的21例结核病患者及14例健康体检者外周血,分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC).对PBMC进行细胞表面染色,用流式细胞仪分别测定iNKT细胞的比例和表面分子CD69、CD62L、CD122以及CD161的表达;用丙二醇甲醚醋酸酯/离子霉素(phorbol-12-myristate-13-acetate/Ionomycin,PMA/ION)刺激PBMC,通过胞内细胞因子染色,测定iNKT细胞潜在的合成分泌IFN-γ和IL-4的能力;并用α-半乳糖神经酰胺(α-Galactosylceramide,α-GalCer)刺激培养1周,测定结核病患者iNKT细胞的反应性及扩增效率.结果 相对于健康个体,结核病患者外周血中的iNKT细胞百分比明显降低;结核病患者iNKT细胞的CD69表达水平显著高于健康个体,而其CD62L、CD122及CD161的表达量与健康个体无明显差异;结核病患者和健康个体的iNKT细胞在PMA/ION刺激后分泌IFN-γ和IL-4的能力无明显差异;然而结核病患者的iNKT细胞对α-GalCer的反应能力明显减弱,表现为被α-GalCer刺激后的扩增能力低于健康个体.结论 结核病患者体内iNKT细胞的数量与功能异常,提示恢复iNKT细胞数量与功能是促进iNKT细胞抗结核效应的关键因素.
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葡萄糖-6-磷酸异构酶混合肽段诱导的 DBA／1小鼠类风湿性关节炎模型的建立
目的：利用葡萄糖-6-磷酸异构酶（ GPI）单一肽段及混合多肽片段免疫DBA／1小鼠，建立类风湿性关节炎（ RA）模型，分析其主要评价指标及特点，为探讨RA的免疫机制及治疗提供新的理想动物模型。方法：hG-PI325-339、hGPI469-483多肽片段和hGPI325-339单一肽段分别与完全弗氏佐剂充分乳化后，于小鼠尾根部皮下注射进行造模，并从体重变化、足踝关节症状评分、足踝关节病理改变、外周血及脾组织CD4＋T细胞的表达、外周血iNKT细胞比例以及血清TNF-α和IL-6水平等方面进行模型鉴定及分析。结果：模型小鼠在造模第8天，后爪先出现红肿，逐渐加重累及四肢，第14天红肿达到高峰，足踝肿胀，行动不利，此后开始逐渐缓解；组织形态学观察发现足踝关节有炎症细胞浸润，以单核细胞与淋巴细胞为主，浆细胞少量出现，混合肽段的炎症状况明显强于单肽片段。与健康对照组和单肽片段模型组相比，混合肽段模型组体重增长缓慢；外周血、脾脏CD4＋T细胞数量明显增多；炎症高峰期外周血iNKT细胞比例下降明显（P＜0．05），血清中TNF-α水平显著升高（P＜0．05）。结论：混合GPI肽段诱导的RA模型小鼠在免疫学特征，特别是iNKT细胞免疫病理方面与RA患者尤为接近，可作为RA免疫机制研究和治疗的良好工具。
关键词： DBA/1小鼠 葡萄糖-6-磷酸异构酶 类风湿性关节炎 iNKT细胞 -
iNKT细胞在脂多糖诱导的早产中的作用
目的 探讨恒定自然杀伤T(iNKT)细胞在脂多糖(LPS)诱导的早产中的作用.方法 野生型C56BL/6小鼠和缺乏iNKT细胞的Jα18-/-小鼠腹腔注射LPS建立炎症诱导性早产小鼠模型；计算早产率和死胎率；流式细胞术检测蜕膜活化型免疫细胞百分率和树突状细胞共刺激分子的表达.结果 与野生型小鼠比较,LPS处理的Jα18-/-小鼠早产率和死胎率显著降低,蜕膜树突状细胞共刺激分子CD40、CD80和CD86的表达显著下降,蜕膜活化型树突状细胞、T细胞和NK细胞百分率明显减少.结论 iNKT细胞可能在LPS诱导的早产发生中具有重要作用.
