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二甲双胍抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用的实验研究
目的:探讨二甲双胍对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法:取0、5、10、20、40、80 mmol/L二甲双胍分别作用于RPMI8226、U266细胞株24、48、72 h,应用CCK-8法检测二甲双胍对骨髓瘤细胞株增殖的影响;取0、10、20、40 mmol/L二甲双胍分别作用于RPMI8226细胞株48 h,应用流式细胞术检测细胞凋亡;取0、5、10、20 mmol/L二甲双胍作用于RPMI8226细胞株48 h,Western blot检测Caspase-3、PARP、STAT3、p-STAT3、BCL-2、Cyclin D1、P21的表达.结果:二甲双胍可以抑制RPMI8226和U266细胞株的增殖,并呈浓度(r =0.982,r=0.967,P≤0.05)及时间依赖性(r=0.956,r=0.962,P≤0.05);随着二甲双胍浓度的增加,RPMI8226细胞凋亡比例逐渐增高(r=0.976,P≤0.05);二甲双胍可引起RPMI8226细胞株凋亡相关蛋白pro-caspase-3及PARP的活化,并可抑制STAT3磷酸化、下调BCL-2、Cyclin D1表达,上调P21蛋白表达.结论:二甲双胍可抑制RPMI8226、U266细胞株增殖,并诱导其凋亡,下调STAT3信号转导通路是其潜在的作用机制之一.
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OTUB1基因的siRNA转染对脑胶质瘤细胞凋亡及STAT3信号通路的影响研究
目的 探讨卵巢肿瘤相关蛋白酶B1(OTUB1)基因的siRNA转染对脑胶质瘤细胞活力、凋亡及STAT3信号通路的影响.方法 Westernblotting检测OTUB1在人脑恶性胶质瘤U251、U87、BT325和M17细胞中的蛋白表达;U87细胞分为空白组(不做任何处理)、NC组(转染Control siRNA)和si-OTUB1组(转染OTUB1 siRNA),参照Lip2000转染试剂盒说明转染siRNA.Western blotting检测转染OTUB1-siRNA后OTUB1的蛋白表达,并选择抑制效果好的siRNA作为研究对象;MTT检测OTUB1-siRNA转染后的24～72 h细胞活力;流式细胞仪检测OTUB1-siRNA转染的48 h细胞凋亡率;Western blotting检测STAT3、磷酸化的STAT3及STAT3信号通路下游相关基因cyclinD1和Bcl-2的蛋白表达.结果 OTUB1在U251、U87、BT325和M17细胞中均呈现出阳性表达,在U87细胞中呈现出较高水平表达;OTUB1-siRNA转染后的U87细胞OTUB1的蛋白表达显著低于空白组和NC组(P<0.05);与NC组比较,si-OTUB1转染U87细胞24-72h的细胞活力均显著降低,转染48 h的细胞凋亡率显著升高,p-STAT3、cyclinD1和Bcl-2的蛋白表达均显著降低(P<0.05),而三组间STAT3的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 OTUB1在人脑恶性胶质瘤细胞高表达,抑制OTUB1表达后可明显降低脑胶质瘤细胞活力,诱导细胞凋亡,机制可能是通过下调STAT3信号通路实现的.
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PDCD4调控STAT3信号通路对肾癌细胞凋亡的影响
目的 研究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)对肾癌细胞凋亡和信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路的影响.方法 肾癌细胞RC-2中转染PDCD4过表达载体和空载体记为PDCD4组和空载体组,同时以不做转染的细胞作为对照组.在转染PDCD4过表达载体后的肾癌细胞培养液中添加STAT3抑制剂AG490记为AG490+ PDCD4组,在不做转染的肾癌细胞培养液中添加STAT3抑制剂AG490记为AG490组.qRT-PCR和Western blot法分别测定细胞内PDCD4 mRNA和蛋白表达.用STAT3信号通路抑制剂处理肾癌细胞,MTT测定各组细胞存活率,流式细胞术测定各组细胞凋亡情况,Western blot测定细胞中STAT3、p-STAT3、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(CleavedCaspase-3)、裂解后的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Cleaved PARP)蛋白水平.结果 转染PDCD4过表达载体可以提高肾癌细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平,而转染空载体对细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平无显著影响.PDCD4组、AG490组肾癌细胞存活率明显降低,细胞凋亡明显增多,细胞内STAT3磷酸化水平降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).AG490+ PDCD4组肾癌细胞存活率降低更多,细胞凋亡率进一步增加,细胞内的Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白水平增加,与PDCD4组、AG490组细胞相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).空载体组细胞存活率、凋亡率与对照组比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PDCD4可以通过降低肾癌细胞中STAT3激活水平诱导肾癌细胞凋亡.
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骨髓间充质干细胞对急性肝衰竭的治疗作用及机制
目的 探索骨髓间充质干细胞(MSCs)分泌的炎症相关因子及其对急性肝衰竭(ALF)的治疗作用.方法 获取并鉴定SD大鼠MSCs.收集MSCs条件培养基(MSCs-CM)检测炎症相关因子.SD大鼠分为三组:ALF+达尔伯克氏改良伊格尔培养基(DMEM)组:D-氨基半乳糖(D-Gal)诱导大鼠ALF后静脉输注DMEM 1 ml;ALF+ MSCs组:诱导ALF后静脉输注MSCs 1 ml(约1× 106);ALF+ MSCs-CM组:诱导ALF后静脉输注MSCs-CM 1 ml.检测各组大鼠生化指标、4周存活率、组织病理学和炎症因子水平.评估直接输注外源性重组大鼠白介素10(IL-10)与给予抗白介素10抗体后输注MSCs-CM对ALF大鼠转氨酶的影响.检测给予IL-10后ALF大鼠肝脏磷酸化STAT3(pSTAT3)水平,评估AG490(STAT3信号通路抑制剂)能否逆转IL-10的治疗作用.结果 ALF+ DMEM组、ALF+MSCs组和ALF+ MSCs-CM组给予D-Gal第3天血清ALT分别为1 709.8±372.1、865.5±52.8、964.7 ±414.6 U/L,AST分别为4 234.0±807.3、2440.8 ±511.9、2 739.8 ± 587.3 U/L,TBil分别为79.3 ±10.9、43.8±7.0、61.2±6.7 μg/L.三组28天存活率分别为10.0％、80.0％、70.0％;炎症因子干扰素(0FN-γ)分别为69.8±4.7、46.4±4.3、54.6±2.4 pg/ml,IL-1β分别为58.5±7.6、40.5 ±6.9、44.1±6.0 pg/ml,IL-6分别为71.9±16.1、38.4 ±7.7、45.3±9.0 pg/ml,IL-10分别为38.3 ±6.0、75.4±11.1、59.6±11.9 pg/ml.蛋白芯片检测提示MSCs-CM表达多种炎症相关细胞因子,其中IL-10的水平为显著.与ALF组(ALT:1 709.8±372.1 U/L,AST:4 234.0 ±807.3 U/L)比较,单独使用IL-10(ALT:1 126.9 ±419.3 U/L,AST:2 370.8 ±561.2 U/L)能显著降低转氨酶水平,同时给予抗IL-10抗体(ALT:1 568.5 ±325.4 U/L,AST:4 043.7±819.0 U/L)则能中和MSCs-CM(ALT:964.7±414.6 U/L,AST:2 739.8 ±587.3 U/L)的治疗作用.给予IL-10能够显著提高ALF大鼠肝脏pSTAT3水平(0.93±0.03比0.68±0.01),而STAT3抑制剂AG490 (0.84 ±0.04)则能降低pSTAT3的表达,逆转IL-10的治疗作用.结论 MSCs分泌的IL-10能够减轻D-Gal诱导的大鼠急性肝损伤,STAT3信号通路或许介导该治疗作用.
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CXCR1调控STAT3信号通路对结肠癌细胞增殖凋亡的影响
目的 探讨化学趋化因子受体1(CXCR1)对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及机制.方法 收集结肠癌组织和对应的癌旁组织,提取组织蛋白,Western blot法检测组织中CXCR1表达水平.以人结肠癌细胞HCT116为研究对象,细胞转染CX-CR1小干扰RNA(CXCR1 siRNA组),同时转染siRNA对照组.设置对照组,对照组中只加入转染试剂.培养48h后,Westernblot法检测细胞中CXCR1、Bcl-2、Bax、STAT3、p-STAT3表达水平,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况.人结肠癌细胞与STAT3信号通路抑制剂AG490作用后,检测细胞增殖凋亡情况.结果 CXCR1在结肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.01).CXCR1 siRNA组细胞中CXCR1、p-STAT3、Bcl-2蛋白水平和细胞存活率明显低于对照组(P＜0.01).CXCR1 siRNA组细胞中Bax水平和细胞凋亡率明显高于对照组(P＜0.01).siRNA对照组细胞中CXCR1、Bcl-2、Bax、STAT3、p-STAT3水平和细胞凋亡率、细胞存活率与对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).抑制剂作用后的细胞增殖凋亡趋势与CXCR1 siRNA组细胞相一致.结论 CXCR1在结肠癌组织中表达上调.抑制CXCR1的表达可以抑制结肠癌细胞增殖,促进结肠癌细胞凋亡,作用机制与STAT3信号通路有关.
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氯沙坦减轻梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化及肾小管上皮细胞凋亡机制的研究
目的 探讨氯沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾小管上皮细胞凋亡和肾间质纤维化的影响及其可能机制.方法 通过结扎并离断大鼠单侧输尿管制作梗阻性肾病模型,对照组进行假手术.留取术后第3,5,7及14天肾脏组织及血尿标本.结果 单侧输尿管梗阻使α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白的表达水平明显增加,并导致肾小管间质纤维化和肾组织细胞凋亡明显增加.肾间质纤维化的进展伴随着STAT3的磷酸化和2种凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)的表达改变.氯沙坦干预治疗可以减少这些变化.结论 在单侧输尿管梗阻的大鼠模型中,氯沙坦能缓解肾脏纤维化及肾小管细胞的凋亡程度.这种疗效可能是通过部分阻滞STAT3信号通路完成的.
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胶质瘤中STAT3通路及其负调控因子PIAS3活化状态和生物学效应的分析
目的：探讨STAT3信号通路及其负调控因子PIAS3在胶质瘤细胞中的活化状态及生物学效应。方法采用免疫组织化学方法检测胶质瘤中p?STAT3及PIAS3的活化状态；STAT3通路抑制剂60μmol/L AG490作用胶质瘤U118、U87细胞24、48 h， MTT法观察U118、U87细胞增殖能力的变化；免疫荧光检测AG490作用前后细胞p?STAT3及PIAS3蛋白表达的变化。结果 p?STAT3及PIAS3在不同级别胶质瘤细胞胞质和胞核内的表达无统计学差异，但在细胞核内p?STAT3和PIAS3的表达呈负相关；AG490处理细胞后，U118细胞数量无明显改变，U87细胞则表现为生长抑制。免疫荧光结果显示，AG490处理后，U118细胞p?STAT3和PIAS3表达水平均无显著改变，U87细胞p?STAT3核内表达下调，PIAS3出现明显核易位。结论 PIAS3通过核易位调控STAT3信号通路的活性，抑制胶质瘤细胞生长。
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17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素对乳腺癌细胞增殖及侵袭作用
目的:观察17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素(17-allylamino-17-desmethoxy-geldanamycin,17-AAG)通过抑制转录活化蛋白3 (signal transducer and activator oftranscription3,STAT3)信号通路发挥对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的调控作用.方法:体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,分别给予不同剂量及不同作用时间的17-AAG进行作用,MTT法检测细胞增殖能力；RT-PCR法和Western Blot法检测各组细胞STAT3、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP-2)和MMP-9 mRNA和蛋白的表达水平,Transwell小室检测细胞侵袭能力.结果:0.165 ～ l0mg/L的17-AAG作用24 h、48 h后对MCF-7细胞有显著的抑制作用；1.0、2.0、3.0、5.0 mg/L的17-AAG作用48 h后,各组细胞STAT3、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达均下调,且具有浓度依赖性；Tran-swell小室检测显示17-AAG处理后穿膜细胞数明显减少,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:17-AAG对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能够抑制STAT3的mRNA和蛋白的表达水平,进而抑制VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平,从而调控乳腺癌细胞的侵袭性.
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RNA干扰LOXL2基因对头颈部鳞状细胞癌凋亡及PD-L1表达的影响
目的:探讨抑制赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)基因表达对头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)增殖凋亡及PD-L1表达的影响研究.方法:通过Western blot检测人HNSCC细胞YCU-H891、YCU-N861和KB中LOXL2的蛋白表达.以Lipo-fectamineTM 2000为载体,参照其说明将合成的LOXL2 siRNA转染KB细胞,转染48 h后,Western blot检测LOXL2、PD-L1、STAT3、p-STAT3、PCNA和Bax的蛋白表达;CCK8及流式细胞仪分别检测细胞活力及凋亡率.结果:LOXL2在YCU-H891、YCU-N861和KB中表达均升高.转染LOXL2 siRNA的KB细胞LOXL2的蛋白表达明显降低,与空白组和NC组比较差异均具有统计学意义(P<0.05).转染LOXL2 siRNA的KB细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,PD-L1、p-STAT3和PCNA的蛋白表达均明显降低,Bax的蛋白表达明显升高,与NC组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论:RNA干扰抑制LOXL2基因可降低HNSCC细胞活力和诱导凋亡,下调PD-L1表达,机制可能与抑制STAT3信号通路有关.
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RNA干扰UBQLN基因表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及机制研究
目的:观察抑制泛素1(UBQLN1)基因表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响.方法:Western blot检测UBQLN1在乳腺癌T47D、BT549、MDA-MB-231、MCF7细胞中相对于正常乳腺上皮细胞MCF-10A的蛋白表达;用LipofectamineTM2000将干扰UBQLN1表达的siRNA(UBQLN1-siRNA)转染MDA-MB-231细胞,同时转染阴性对照组(NC组),并设置空白对照组,收集转染48 h的细胞Western blot检测其UBQLN1的蛋白表达;CCK8法检测UBQLN1-siRNA转染24 h、48 h和72 h的细胞活力;流式细胞仪及Transwell小室分别检测UBQLN1-siRNA转染48 h的细胞凋亡率及侵袭能力;Western blot检测促凋亡蛋白p53和抑凋亡蛋白Survivin、侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)及STAT3和磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达.结果:与MCF-10A细胞比较,UBQLN1在T47D、BT549、MDA-MB-231、MCF7乳腺癌细胞中的表达均显著升高(P<0.01);与NC组比较,UBQLN1-siRNA组UBQLN1的蛋白表达显著降低,24 h、48 h和72 h的细胞活力均显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞侵袭能力显著降低,Survivin、MMP-2、MMP-9和p-STAT3的蛋白表达均显著降低,p53蛋白表达显著升高(P<0.01),三组间STAT3的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).结论:抑制乳腺癌细胞中UBQLN1基因表达可降低乳腺癌细胞活力和侵袭能力,并诱导细胞凋亡和下调STAT3信号通路.
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PTEN调控STAT3信号通路影响心肌成纤维细胞增殖的研究
目的:研究第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白( PTEN)对心肌成纤维细胞增殖的影响及机制.方法:用高糖刺激心肌成纤维细胞,qRT-PCR和Western blot检测细胞中PTEN水平.细胞转染PTEN过表达载体,qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞中PTEN水平.用高糖刺激转染PTEN过表达载体的心肌成纤维细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Western blot检测细胞中磷酸化的STAT3(p-STAT3)、信号转导与转录因子3(STAT3)水平,在细胞培养液中加入STAT3通路阻断剂AG490处理细胞,MTT检测细胞增殖,Western blot检测细胞中p-STAT3、STAT3水平.结果:高糖处理后的心肌成纤维细胞中PTEN mRNA和蛋白水平均明显低于正常培养的细胞( P＜0. 05).转染PTEN过表达载体后的细胞中PTEN mRNA和蛋白水平均明显高于不做转染的细胞(P＜0. 05).高糖作用后细胞增殖活性和p-STAT3水平明显高于正常培养的细胞(P＜0. 05). PTEN过表达后经高糖诱导,细胞增殖活性和p-STAT3水平有所降低,用AG490处理后的细胞增殖活性进一步下降.结论:PTEN通过抑制STAT3信号通路,减缓高糖诱导的心肌成纤维细胞过度增殖.
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姜黄素通过抑制STAT3通路调控人结肠癌耐奥沙利铂细胞株的耐药性
目的：：探讨姜黄素( Cur）对人结肠癌耐奥沙利铂( Oxa）细胞株( SW620／OxR）的逆转耐药作用及其机制是否与抑制STAT3信号通路有关。方法：采用WST-1试剂检测Cur对SW620／OxR细胞株的半数抑制( IC50）浓度，选择IC50低一浓度梯度的Cur＋2μmol／L Oxa作用于SW620／OxR细胞48 h(称为实验组），与仅加入2μmol／L的Oxa对照组比较，①采用流式细胞术检测细胞凋亡；②采用Western blot检测STAT3活化标志磷酸化STAT3( P-STAT3）蛋白及其下游耐药相关靶分子P糖蛋白( P-gp）的表达情况。结果：Cur对SW620／OxR细胞的IC50浓度为18.9μmol／L；实验组与对照组比较：①细胞凋亡率由(5.08±1.82）％上升到(30.69±2.94）％，实验组细胞凋亡率明显高于对照组(P＜0.05）；②P-STAT3及P-gp表达量均明显受抑制( P＜0.05）。结论：Cur具有调控人结肠癌耐药细胞株耐药性的作用，可能与抑制STAT3信号通路，降低P-gp表达有关。
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脂筏结构蛋白1基因在乳腺癌细胞中的表达及靶向抑制其表达对癌细胞凋亡的诱导
目的 探讨脂筏结构蛋白(FLOT)1基因在乳腺癌细胞中的表达及靶向抑制其表达对癌细胞凋亡的影响及机制.方法 Western印迹法检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A及MCF7、MDA-MB-231和HCC1569乳腺癌细胞FLOT1的蛋白表达.将设计合成的针对FLOT1的特异性siRNA序列(si-FLOT1组)及阴性对照siRNA序列(NC组)转染至MDA-MB-231细胞,仅仅加入脂质体的为空白对照组,AG490作为信号转导与转录因子(STAT)3信号通路抑制剂,转染48 h,Western印迹法检测FLOT1、磷酸化蛋白酪氨酸激酶(p-JAK)2、p-STAT3、细胞增殖核抗原(PCNA)和B细胞淋巴瘤(Bcl)-2的蛋白表达.流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 FLOT1在MCF7、MDA-MB-231和HCC1569乳腺癌细胞中的蛋白表达均显著高于正常乳腺上皮细胞MCF-10A(P<0.05).与空白对照组比较,si-FLOT1组FLOT1表达受到抑制(P<0.05);与NC组比较,si-FLOT1组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),p-JAK2、p-STAT3、PCNA和Bcl-2的蛋白表达显著下调(P<0.05).与si-FLOT1组比较,si-FLOT+AG490组细胞凋亡率显著升高(P<0.05).结论 FLOT1在乳腺癌细胞中呈高表达,通过RNA干扰抑制其表达可诱导癌细胞凋亡,机制与下调STAT3信号通路有关.
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促红细胞生成素改善老年患者转子间骨折术后贫血和机制探讨
目的 探讨促红细胞生成素治疗老年股骨转子间骨折患者术后贫血的临床疗效及相关机制.方法 选择本院骨科2012年4月至2014年3月收治的120例老年股骨转子间骨折术后患者,采用随机数字表随机分为A组和B组两个治疗组,每组60例;同时将同期30例健康体检的老年人设为对照组.A组予口服富马酸亚铁(一日3次,每次0.2 g),持续治疗8周;B组在对照组的基础上加予皮下注射促红细胞生成素(rhEPO)制剂,每周3次、每次100 IU/kg,持续治疗8周.采用流式细胞检测评价治疗前后两组患者外周血中Th17细胞在外周血单个核细胞(PBMCs)中所占的比例;以蛋白免疫印迹法(Western-blot法)检测骨髓液中p-STAT3及SOCS3的表达水平,同时观察两组患者不良事件发生率.结果 治疗后两治疗组组患者血红蛋白、红细胞压积均有改善,与治疗前比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中B组改善幅度较A组显著(P＜0.05).外周血Th17细胞在PBMCs中所占的比例,两治疗组治疗前较对照组显著增高,且差异有统计学意义(P＜0.05);治疗后,两治疗组显著下降,但仍高于对照组,但与A组比较B组降低更为显著(P＜0.05);A组和B组治疗后p-STAT3和SOCS3显著改善,且与A组相比,B组改善趋势更为显著(P＜o.05).结论 促红细胞生成素能显著改善老年患者转子间骨折术后贫血症状,可能通过抑制STAT3信号通路磷酸化和促进SOCS3表达发挥治疗作用.
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宁泌泰胶囊及其有效单体对炎症相关STAT3信号通路的抑制作用
目的:探讨宁泌泰胶囊对炎症相关STAT3信号通路的抑制作用.方法:选择稳定转染STAT1和STAT3-1uciferase报告基因质粒的HepG2细胞,待细胞生长至对数生长期后将细胞悬液接种到细胞培养板中,分别检测不同浓度宁泌泰溶液对IL-6激活的STAT3信号通路,以及γ-干扰素(IFN-γ)激活的STAT1信号通路的抑制作用;同时,检测宁泌泰主要单体成分小檗碱和槲皮素,以及小檗碱和槲皮素联用对STAT3信号通路的影响.结果:宁泌泰溶液10.0 mg/ml、5.0 mg/ml和1.0 mg/ml对STAT3信号通路抑制率分别为98.07％、84.65％和12.57％,IC50为5.865 mg/ml;小檗碱100 μmol/L、120μmol/L对STAT3信号通路抑制率分别为48.73％、66.31％,槲皮素20 μmol/L、100 μmol/L对STAT3信号通路均无抑制作用,小檗碱和槲皮素联用(100 μmol/L+20 μmol/L,120 μmol/L+ 100μmol/L)对STAT3信号通路的抑制率分别为53.99％ 、91.54％.而宁泌泰溶液对STAT1信号通路无显著抑制作用.结论:宁泌泰胶囊选择性抑制了STAT3信号通路,小檗碱可能为其有效成分之一,且小檗碱和槲皮素具有协同作用,这可能是宁泌泰胶囊抗炎作用的重要物质基础和作用规制.
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胃铋镁对胃癌细胞凋亡的诱导作用及机制研究
目的 研究胃铋镁对胃癌细胞株SGC-7901增殖和凋亡的作用及可能机制.方法 以三联药(三种市售胃炎胃溃疡类药物联合用药)、胃铋镁、胃铋镁中药总组分、胃铋镁化药总组分为实验组,分别作用于胃癌细胞SGC-7901,MTT法检测细胞的增殖状态;Hoechst33342染色法检测细胞的凋亡;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot法检测STAT3信号通路相关蛋白的表达.结果 4种药物分别处理细胞后,相比于对照组和三联药组,胃铋镁组和胃铋镁中药总组分组能够显著抑制细胞增殖且具有剂量依赖性;凋亡百分数显著增高(P＜0.05);能将细胞周期阻滞于G1期(P＜0.05);Western blot结果显示SGC-7901细胞中STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达量显著降低.结论 胃铋镁及其中药总组分可以显著抑制胃癌细胞SGC-7901增殖,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期,其作用机制可能与抑制STAT3信号通路相关蛋白p-STAT3、CyclinD1、Bcl-2表达有关.
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RNAi NRP-1基因对骨肉瘤细胞凋亡、ROS含量及STAT3信号通路的影响
目的:探讨RNAi神经纤毛蛋白1(NRP1)基因对骨肉瘤细胞凋亡、ROS含量及STAT3信号通路的影响.方法:分别将合成的NRP-1的siRNA(NRP-1-siRNA组)及无干扰作用的siRNA(NC组)转染人骨肉瘤MG-63细胞,并设置空白对照组,Western blotting检测转染48 h的细胞中NRP-1和磷酸化的STAT3(p-STAT3)及STAT3信号通路靶基因Cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达;CCK8法分别于转染的24、48 h和72 h检测细胞活力;流式细胞术分别检测细胞凋亡率及ROS含量.结果:与空白对照组比较,NRP-1-siRNA组NRP-1、Cyclin D1、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达均显著降低,转染24、48、72 h的细胞活力均显著降低,细胞凋亡率显著升高,ROS含量显著升高(P<0.05).结论:RNAi抑制NRP-1基因表达可降低骨肉瘤细胞活力,诱导细胞凋亡,机制可能与提高细胞内ROS含量和下调STAT3信号通路有关.
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隐丹参酮抗肺腺癌作用的研究
目的 探讨隐丹参酮(CPT)对人肺腺癌细胞株A549和PC-9诱导凋亡的作用及其可能机制.方法 不同浓度的CPT分别作用A549和PC-9细胞24和48h,CCK-8法检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色流式细胞术检测线粒体膜电位的变化,Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)和信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路相关蛋白磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白的表达水平.结果 CPT能够抑制A549和PC-9细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性.CPT作用于A549和PC-9细胞24h后,细胞凋亡率随CPT浓度增加呈增长趋势,而线粒体膜电位降低.CPT作用于A549和PC-9细胞后cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3和cleaved PARP蛋白表达水平增加,p-STAT3蛋白表达水平下降.结论 CPT对人肺腺癌细胞A549和PC-9有显著的增殖抑制作用和诱导凋亡效应,线粒体凋亡途径和STAT3信号通路可能参与了这一过程.
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胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)基因表达对脉络膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡及STAT3信号通路的调控作用
目的 探讨胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)基因表达对脉络膜黑色素瘤(choroidal melanoma,CM)细胞增殖、凋亡及STAT3信号通路的调控作用.方法 参照LipofectamineTM2000说明将干扰IGF-1R表达的siRNA转染人CM细胞OCM-1作为IGF-1R-siRNA组,并设置无干扰作用的siRNA及加入脂质体的细胞作为阴性对照组和空白对照组,AG490作为STAT3信号通路抑制剂,收集转染48 h的细胞,通过CCK8法及流式细胞仪分别检测细胞活力及细胞凋亡率;Western blot检测STAT3信号通路磷酸化的p-JAK2和p-STAT3及下游靶基因Cyclin D1和Bcl-xL的表达.结果 阴性对照组IGF-lR表达量(0.243±0.036)与空白对照组(0.228±0.030)差异无统计学意义(P＞0.05),IGF-1R-siRNA组IGF-1R表达量(0.071±0.010)低于空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).IGF-1 R-siRNA转染的OCM-1细胞IGF-1R的表达明显降低;与空白对照组比较,IGF-I R-siRNA组细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高(均为P＜0.05).IGF-1 R-siRNA组p-JAK2、p-STAT3、Cyclin D1和Bcl-xL的蛋白表达均低于空白对照组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).IGF-1 R-siRNA+AG490组细胞活力低于IGF-1 R-siRNA组,细胞凋亡率高于IGF-1R-siRNA组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).IGF-1R-siRNA组p-JAK2、p-STAT3、Cyclin D1和Bcl-xL的蛋白表达均高于IGF-1R-siRNA+ AG490组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 下调IGF-1R基因表达可通过抑制STAT3信号通路降低CM细胞增殖并诱导细胞凋亡.
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姜黄素治疗结直肠癌研究进展
姜黄素治疗结直肠癌的作用体现在以下两个方面:①抗炎;②抗肿瘤.其中对STAT3、Notch1等信号通路的调节是姜黄素抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡的主要机制;同时通过恢复肿瘤抑制细胞活性,进而抑制肿瘤细胞生长.但姜黄素存在着生物利用度差的缺陷,仍需对其药物载体进行深入研究.
关键词： 姜黄素 结直肠癌 肿瘤 STAT3信号通路 Notch1信号通路
