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白细胞功能多极化及其意义
免疫与造血是实验血液学的基本课题之一.免疫功能是白细胞的主要功能,免疫反应的多样性和复杂性令人困惑.30年前发现的免疫细胞的功能性极化促进了对淋巴细胞分化的研究,近年来对淋巴细胞、单核/巨噬细胞功能多极化的研究为阐明免疫细胞的调控网络奠定了基础,为阐明免疫反应的多样性和复杂性提供了线索,也为深入研究造血细胞的分化拓展了思路.本文对淋巴细胞、单核/巨噬细胞和树突细胞的多极化及其作用和意义,尤其是在细胞因子风暴和白血病、肿瘤的前炎症状态发生中的可能作用进行评述.
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肠道巨噬细胞的调控与炎症性肠病
炎症性肠病(IBD)是一组病因不明的慢性肠道炎症性疾病.在活动性IBD中,巨噬细胞作为一种重要的内在免疫调节者在刺激后续的适应性免疫中起着关键性的作用.研究发现活动性UC和CD患者的大肠炎症中巨噬细胞的数量明显增加,且肠黏膜巨噬细胞亚群的表型与正常黏膜的不同.肠道巨噬细胞可通过经典途径和选择途径被激活.LPS、TNF-α等可通过细胞表面的Toll样受体(TLR)和细胞质间的受体Nod2而激活NF-κB信号途径.过氧化物酶增生激活受体(PPARγ)在巨噬细胞的发展和功能上的作用也受到关注.巨噬细胞激活后产生的多种生物活性物质,如IL-1、IL-6、TNF-α等均具有重要的免疫调节功能.
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巨噬细胞异质性
骨髓中的原始单核细胞与前单核细胞转变成单核细胞,这些单核细胞在骨髓中短暂逗留后进入血循环.单核细胞后移行进入组织,受周围环境刺激因素的作用,在组织中成熟和分化成巨噬细胞.虽然巨噬细胞在骨髓中起源于共同的祖先,但是它们却存在明显的异质性(heterogeneity).巨噬细胞的异质性表现在形态学、生物化学、分泌产物、功能及表面型等方面.这些特性决定了巨噬细胞整个的显型表象,这些表型随巨噬细胞所在的不同器官及不同位置而不一致.1985年曾有研究报道了一组三个MoAbs ED1、ED2和ED3特异识别大鼠单核吞噬细胞系统(mononuclear phagocyte system,MPS)的一类细胞.研究证实,每个MoAbs(ED1、ED2和ED3)特异识别不同的巨噬细胞亚群,且与巨噬细胞的不同分化阶段有相互关系.90年代后,有关研究备受重视.现就近年来依据这组MoAbs(ED1、ED2和ED3)所区别的巨噬细胞亚群的异质分布与功能,简述如下.
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免疫组织荧光与流式细胞术检测脊髓损伤局部巨噬细胞亚群的比较
目的 比较免疫组织荧光(IHF)与流式细胞术(FCM)检测脊髓损伤(SCu局部M1和M2型巨噬细胞亚群的优缺点.方法 采用纽约大学脊髓损伤仪制做大鼠重物坠落SCI模型.术后7天,分别采用IHF和FCM检测损伤脊髓中M1和M2型巨噬细胞,并进行比较.结果 两种方法均可有效地检测脊髓损伤局部浸润的巨噬细胞及其M1、M2亚群.IHF检测到的M1(CD68+ CCR7+)和M2(CD68+ Arg1+)细胞亚群的比率为2.79 ±0.21,FCM检测到的M1(CD68+ CD86+)和M2(CD68+ CD163+)细胞亚群的比率为2.46 ±0.20,两种方法检测到的结果没有统计学差异(P＞0.05).IHF可对待测的细胞进行定位,但在细胞计数和比例分析方面需要人工完成;而FCM则可以直接自动分析细胞数量和比例,但无法对其进行定位.结论 IHF和FCM在分析脊髓浸润的细胞表型方面各有优缺点,两者结合可有效地分析SCI局部M1和M2巨噬细胞亚群的数量和比例.
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流式细胞术检测脊髓损伤大鼠局部浸润的巨噬细胞亚群
目的:建立检测脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠局部浸润巨噬细胞亚群的流式细胞术方法.方法:取5只健康雌性SD大鼠,采用纽约大学SCI撞击仪系统制作重物坠落SCI 模型为SCI组;另设5只假手术大鼠为假手术组.SCI术后7 d收集损伤的脊髓,制备单细胞悬液,采用Percoll原液密度梯度离心法浓缩浸润的巨噬细胞.分别以CD68与CD86或CD163的不同荧光标记抗体组合作为鉴定M1和M2型巨噬细胞的标志,用流式细胞术检测损伤局部巨噬细胞亚群的变化.结果:假手术组大鼠脊髓单细胞悬液中,CD68+细胞占细胞总数的(0.07±0.02)%,CD86+细胞和CD163+细胞分别占CD68+细胞的(9.90±3.28)%和(4.95±0.17)%;而SCI组大鼠脊髓单细胞悬液中,CD68+细胞的百分比为(0.21±0.09)%,CD86+细胞和CD163+细胞分别占CD68+细胞的(18.71±0.49)%和(27.07±3.74)%,差异均有统计学意义(P<0.05～P<0.01).结论:以小鼠抗大鼠CD68、小鼠抗大鼠CD86、小鼠抗大鼠CD163为标志,采用流式细胞术可以成功检测SCI局部浸润的M1和M2型巨噬细胞亚群.
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巨噬细胞亚群在移植后重症肺部感染引发过度炎症中的作用
免疫抑制状态下过度炎症发病机制较复杂,病死率高,是临床常见的移植术后急危重症.巨噬细胞亚群是主要的炎性反应调节细胞,释放大量炎性因子然后间接或直接地参与过度炎症反应过程,导致机体失控的炎性反应,形成恶性循环加重机体损伤.笔者就目前国内外关于巨噬细胞亚群在免疫抑制状态下导致的过度炎症研究情况进行综述.
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大鼠创伤后腹腔巨噬细胞亚群的变化及与IL-6、TNFα的关系
目的探讨创伤后免疫功能紊乱状态与巨噬细胞亚群的关系.方法采用创伤失血模型,运用流式细胞仪分析单克隆抗体ED1、ED2单克隆抗体双标记表达情况,测定腹腔巨噬细胞(pM)培养上清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNFα)含量(ELISA法).结果正常大鼠pM分为ED1+ED2-亚群、ED1+ED2+亚群,无单纯的ED2+巨噬细胞亚群,创伤后ED1+ED2-亚群比例增加,ED1+ED2+亚群比例降低,同时TNFα、IL-6分泌增加,内毒素(LPS)刺激可增加TNFα、IL-6分泌水平.结论创伤后细胞因子分泌紊乱可能与ED1+ED2-巨噬细胞亚群有关.
