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NKG2D及其配体RAE-1、H60在移植物抗肿瘤中的作用
为探讨NKG2D及其配体RAE-1、H60在单倍体相合(haploidenncal)造血干细胞移植介导的移植物抗肿瘤效应中的作用,以皮下接种H22细胞的BABL/c×C57BL/6杂交F1代(CB6F1)小鼠为受鼠,以C57BL/6小鼠的骨髓+脾细胞为供者细胞,分别用抗CD90.2、NK1.1和NKG2D单克隆抗体清除供者T细胞、NK细胞和封闭NKG2D受体,进行单倍体相合细胞移植,观察移植后的抗肿瘤效应,并以半定量RT-PCR法检测移植后小鼠肿瘤组织RAE-1、H60的mRNA表达水平.结果发现:清除供者T细胞、NK细胞和封闭NKG2D的移植均导致移植物抗肿瘤效应的下降,MHC单倍体相合细胞移植后肿瘤细胞RAE-1、H60的mRNA表达水平上升.结论:NKG2D及其配体RAE-1、H60在移植物抗肿瘤效应中的起着重要的作用.
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NKG2 D／RAE-1通路在介导 NK／T 细胞杀伤垂体瘤细胞中的作用及意义
目的：观察NKG2D／RAE-1通路在介导自然杀伤（NK）细胞、CD8＋T细胞（两种细胞简称NK／T细胞）杀伤垂体瘤细胞中的作用，从细胞学水平探讨垂体瘤的免疫逃逸机制。方法以小鼠垂体瘤细胞系AtT20为研究对象，采用免疫荧光标记法检测NKG2 D配体RAE-1在垂体瘤细胞的表达水平及定位分布情况。采用NK／T细胞分选试剂盒分离NK／T细胞，将NK／T细胞放入Transwell小室的上室，靶细胞AtT20置入Transwell小室的下室，随机分为对照组、实验组。对照组在常规条件下共培养0、4、8、24 h，实验组在培养液中加入阻断RAE-1的抗体（ Anti-RAE1抗体）共培养0、4、8、24 h；采用MTT法检测两组各时间点细胞增殖抑制率。结果 RAE-1在AtT20细胞膜明显表达，在细胞质内亦有弱表达。在AtT20细胞中RAE-1蛋白阳性表达率为100％，其中强表达率为30％、中表达率为60％、弱表达率为10％，无阴性表达。对照组培养4、8、24 h时细胞增殖抑制率明显高于0 h时（P均＜0．05）；实验组培养0、4、8、24 h时增殖抑制率逐渐升高（P均＜0．05），培养8、24 h时增殖抑制率均明显高于同时间点对照组（P均＜0．05）。结论 NK／T细胞通过NKG2D／RAE-1通路杀灭垂体瘤细胞，RAE-1可负反馈作用于NK／T细胞，从而抑制免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。 NKG2D／RAE-1通路可能作为垂体瘤的免疫治疗靶点。
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NKG2D配体在小鼠异位气管移植模型中的作用
目的 观察小鼠异位气管移植后不同时间点NKG2D配体Rae-1和H60表达水平的变化,探讨其在肺移植后闭塞性细支气管炎(BOS)中的重要作用.方法 建立小鼠异位气管移植模型并于术后7、14、28 d取材.苏木素-伊红(HE)和Mallory染色形态学观察,并检测术后气管闭塞率,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测不同时间点移植物Rae-1和H60的mRNA表达;免疫组织化学检测不同时间点移植物的Rae-1和H60蛋白表达.结果 移植后随时间延长,HE染色提示BOS病理学不断进展,与对照组比较,气管移植物14 d和28 d管腔闭塞率不断增加[(30.82±7.61)％和(83.52±13.12)％比(3.75±1.78)％,P=0.012、0.007],Mallory染色和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达不断增强.RT-qPCR检测结果显示与对照组比较,移植后小鼠气管移植物14 d的H60(12.712 2±2.828 0比0.7396±0.0428,P=0.014)和28 d的Rae-1 mRNA(10.464 9±2.1091比0.6176±0.041 3,P=0.022)表达强度均明显提高.免疫组织化学检测结果显示气管移植物H60和Rae-1在蛋白水平表达分别在14 d(207.97±25.87比31.63±9.42,P=0.023)和28 d(185.34±24.06比32.84±7.85,P=0.026)明显高于对照组.结论 NKG2D配体可能参与了肺移植后BOS的发生发展,加强主要组织相容性I类相关基因(MIC)配型或特意性阻断NKG2D通路有可能延缓并减少肺移植后BOS的产生.
