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DNA甲基化检测中亚硫酸氢盐修饰方法的改进与评价
目的:建立一种快速便捷的亚硫酸氢盐修饰DNA方法用于DNA甲基化检测.方法:提高亚硫酸氢盐浓度及修饰温度、缩短修饰时间并用玻璃奶回收DNA改进DNA修饰方法,用亚硫酸氢盐测序法分析MAGE-A3基因和DAP-K基因目的片段中胞嘧啶转化为胸腺嘧啶的效率,评价改进方法与传统方法、试剂盒方法对DNA的修饰效果.结果:改进的方法可将操作过程缩短到3h左右;非甲基化的胞嘧啶到胸腺嘧啶的转化率超过99%,与传统方法、试剂盒方法相比差异无统计学意义(x2=0.0564,P>0.05);只针对非甲基化的胞嘧啶进行转化修饰,而在对甲基化胞嘧啶过度修饰为胸腺嘧啶方面与传统方法无统计学差异(x2 =0.0149,P>0.05).结论:改进的亚硫酸氢盐DNA修饰方法修饰效率高,对甲基化的胞嘧啶过度修饰影响不显著,且具有节省时间,操作简便等优点.
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心肌纤维化的表观遗传调控研究进展
心力衰竭是慢性心血管疾病终末期死亡的主要因素之一,心肌不良重构在心力衰竭的发生中起到关键性作用,而心肌纤维化是心肌不良重构的一个重要表现.越来越多的研究表明,表观遗传调控机制在心肌纤维化的发生及发展过程中发挥重要的作用.本文主要综述了DNA甲基化修饰、组蛋白修饰以及microRNA等表观遗传机制调控心肌纤维化发生发展的研究进展.
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p33生长抑制基因1b启动子甲基化检测方法的建立与评价
琼脂糖珠包埋DNA修饰结合巢式-甲基化特异性PCR(nMSP)可提高检测的敏感性[1].我们应用该方法检测大肠癌细胞株中p33生长抑制基因1b(p33ING1b)启动子甲基化.
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一种新的真核DNA表观遗传标记——6mA
DNA中的m6A(6-甲基腺嘌呤)成为表观遗传学研究的一个新兴领域.m6A是真核生物mRNA内部序列中常见的一种转录后修饰形式.新研究发现肥胖相关蛋白FTO可以脱掉m6A上的甲基,表明该甲基化过程是可逆的.抑制或敲除m6A甲基转移酶会引起重要的表型变化,但是由于过去的检测方法受限,m6A确切的作用机制目前为止还不甚清楚.二代测序技术结合免疫沉淀方法为大规模检测m6A修饰并研究其作用机制提供了可能.本文主要综述了m6A的相关机制、组织和基因组分布、生物学功能等及其新研究进展.