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国家科技部"863"计划项目(No.2006AA3Z334)文献资料
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一种基于酶标纳米金探针的蛋白质检测方法
目的 研究酶标纳米金探针的制各条件,并构建利用酶标纳米金探针检测蛋白质的检测体系,实现对蛋白质的高灵敏度检测.方法 首先标记捕获抗体的磁珠探针、抗原及标记检测抗体和辣根过氧化物酶(Streptavidin-peroxidase,SA-HRP)的纳米金探针(AuNP probes)进行免疫反应形成三明治结构,然后利用磁力分离器收集三明治结构,再加入四甲基联苯胺(Tetrabenzidine,TMB)溶液发生酶促显色反应,后在450 nm处进行分光光度检测,从而间接测定蛋白质含量.结果 通过一系列优化实验建立检测体系,具体为:纳米金探针重悬液确定为50 mmol Tris(pH7.8,1.25%蔗糖,0.2%BSA,0.05%PEG,0.05%PVP,0.15% Tween20):检测体系中纳米金的适加入量为3 μl;2步孵育适时间依次为1 h和45 min.使用该方法检测并绘制癌胚抗原(CEA)标准曲线,表明CEA浓度在250 pg/ml～25 ng/ml区间时线性关系良好,R2为0.991.通过灵敏度实验表明该检测体系的低检测灵敏度为25 pg/ml,而传统ELISA方法的检测灵敏度仅为1.65 ng/ml.结论 酶标纳米金探针检测体系实现了通过普通光学仪器进行高灵敏度蛋白质检测的目标,是一种很有发展前景的蛋白质检测技术.
