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人p53 175位点minigene对胃癌细胞体外生长的影响
肿瘤的发生发展是多阶段和多基因参与的极为复杂的过程,p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性高的基因[1].
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新生大鼠神经干细胞球体外生长传代及分化鉴定
近年来,有关神经干细胞分离培养和研究已经成为神经生物学研究的热点.已有许多研究小组报道了大鼠、小鼠和人胚胎脑组织神经干细胞的分离和培养方法[1-3],但对新生大鼠的脑组织神经干细胞进行分离传代培养则鲜有报道.由于神经干细胞可作为一种移植手段治疗神经系统各种病变和损伤,还可用于研究不同生长因子对神经干细胞的体外发育的影响,其有着广泛的应用前景.因此,我们实验室利用新生当天大鼠大脑皮质和中脑进行神经干细胞的分离培养取得成功,现报道如下.
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小鼠骨髓树突状细胞改良培养及体外生物学特性的比较
目的:探讨小鼠骨髓树突状细胞体外生物学特性及用自体腹膜培养基代替细胞因子刺激树突状细胞体外生长的可能性.方法:无菌取小鼠的骨髓分离、培养DC前体,分别以小鼠腹膜分泌液和重组细胞因子mGM-CSF,mIL-4刺激培养使DC前体转化为DC,再用混合淋巴细胞增生反应(MLR)、细胞免疫组织化学染色及光镜、扫描电镜观察二种DC生物特性及免疫活性的差异.结果:培养6-8 d,二种方法培养的骨髓DC(BM-DC)均有大量细胞从集落中释放,并呈成熟状态,重组mGM-CSF,mIL-4刺激培养的DC得率稍高(6×106)于腹膜培养组(3×106),但无显著性差异;培养7 d BM-DC的B7-2表达较高,呈强阳性,混合淋巴细胞反应(MLR)中均表现出有强烈刺激同种T细胞增生的能力;尤以重组mGM-CSF,mIL-4组明显高于腹膜培养组,未加任何处理的空白对照组中DC前体具有非成熟DC的形态及功能特征,且无刺激同种T细胞增生的能力.结论:实验结果提示用自体腹膜培养基代替细胞因子刺激树突状细胞体外生长可获得一定数量的树突状细胞并具有相应的生物学特性及功能,基本能满足实验研究的需要,为基层单位开展树突状细胞的研究提供了可能性.
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TNP-470对结肠癌裸鼠腹水瘤生长的抑制作用
目的:研究血管生成抑制剂TNP-470对裸鼠荷人结肠癌腹水瘤生长的抑制作用.方法:采用MTT法检测TNP-470对结肠癌LOVO细胞的生长抑制作用.将LOVO细胞注入Balb/c裸鼠腹腔,建立结肠癌腹水瘤模型.30只裸鼠随机分成TNP-470组(30mg/kg,sc,qod)和对照组(给相同体积生理盐水).结果:TNP-470可抑制LOVO细胞的体外生长,IC50为2.14×102μg@L-1.两组裸鼠体质量分别为24.5±3.2g,29.5±2.1g;腹围分别为7.0±1.1cm,10.3±1.5cm;腹腔肿瘤结节数分别为40.3±12.3个,92.1±20.6个;腹腔大结节直径分别为3.3±0.7mm,7.3±2.3mm.统计分析表明:在鼠重、腹围、腹腔转移结节数、腹腔大结节直径等方面,TNP-470组与对照组比较均有显著性差异(P=0.005,p=0.001,P＜0.001,P=0.004).在累积生存率方面:治疗组和对照组的中位生存期分别为92d和40 d,两组裸鼠生存时间也有显著差异(P＜0.001).结论:TNP-470能有效地抑制结肠癌腹水形成和腹腔播散结节生长,提高荷瘤裸鼠的生存率.
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苏拉明对激素非依赖性前列腺癌细胞体外生长的影响
我们观察苏拉明(suramin)对激素非依赖性前列腺癌(HRPC)细胞PC-3m生长的影响并初步探讨其作用机制.
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10-HCPT对人肝癌细胞HepG2体外生长及凋亡的影响
我们观察了10-羟基喜树碱(10-HCPT)对人肝癌细胞株HepG2体外生长及其凋亡率的影响,为10-HCPT在肝癌辅助治疗中的应用提供了实验依据.
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二氧化碳人工气腹对子宫内膜癌细胞体外生长的影响
运用CO2人工气腹腹腔镜手术替代恶性肿瘤的开腹手术已成为有争议的问题.关于腹腔镜术后出现腹腔肿瘤播散和穿刺点转移的机制,研究认为除了仪器本身和溢出的肿瘤细胞污染的可能性外,气体也是影响肿瘤生长的一个因素[1].本研究探讨了CO2人工气腹对子宫内膜癌细胞体外生长的影响,现报道如下.
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硫酸乙酰肝素协同细胞因子对脐血造血细胞体外生长的作用
目的探讨硫酸乙酰肝素(HS)协同细胞因子对脐血造血细胞体外生长的影响.方法细胞因子(rhIL-3,rhIL-1β,rhIL-6和SCF)、骨髓基质细胞培养上清(SN)+细胞因子、SN、HS+细胞因子4组分别与脐血造血细胞培养,检测细胞增殖、细胞表面标志和造血祖细胞集落生长.结果培养至第14天细胞增殖达高峰,4个组细胞总数依次增加了134.5,171.3,81.5和167.2倍.第21天细胞数量SN组明显下降.CD34+细胞数第7天已升高,第14天达高峰,依次增加了68.4%,82.5%,69.8%和79.3%,第21天仍为56.2%,71.7%,12.3%和73.7%.CD33+细胞数第14天达高峰, 依次增加了80.2%,68.6%,81.6%和70.3%,第21天时仍维持在第14天水平.CD38+细胞数第7天时比培养前增加了66.6%,73.8%,70.4%和71.9%,第14至第21天均维持该水平.扩增1周各组CFU-GM产率均有提高,2周达高,依次增加了250%,279%,217%和273%.第3周仍有151%,240%,145%和231%.结论 SN与细胞因子联用对脐血造血细胞增殖的促进作用明显强于两者单用.HS可替代SN与细胞因子联用.
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解毒维康片抑制HL-60细胞增殖及其机制探讨
我们采用血清药理学方法,获取含解毒维康片成分的大鼠血清,观察此血清对白血病细胞株HL-60细胞体外生长的影响.
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视网膜色素上皮细胞的培养和保证
视网膜色素上皮(RPE)细胞移植是近年来发展起来的一项新的医学科研技术,本研究首次在分离兔RPE细胞时应用了酶的二步消化法分离了兔RPE上皮与神经上皮,Bruch膜之间的插入连接,这种方法与机械分离法、冷冻法相比较,避免了RPE细胞完整性的破坏,细胞收获量大,体外生长旺盛,细胞存活率高,为在细胞及分子生物学水平上深入探索RPE细胞的生理生化特性及视网膜色素变性,光损伤等各种眼疾病机制的探讨和防治提供了研究基础.同时为建立细胞库奠定了基础,当应用于视网膜移植实验时,可不受时间、条件、供体来源的限制,为将来临床RPE细胞移植开拓了广阔前景.
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人羊膜负载猪骨髓间充质干细胞体外生长的形态特点
背景:人羊膜含胶原、糖蛋白、蛋白多糖、整合素和板层体等多种成分,表达多种生长因子及其mRNA的相关蛋白,能为细胞的增殖、分化提供丰富的营养成分,有利于细胞的生长繁殖,其能否负载培养猪骨髓间充质干细胞良好生长值得研究.目的:建立人羊膜负载培养猪骨髓间充质干细胞生长的组织工程方法,观察骨髓间充质干细胞生长增殖的形态特点.设计:随机对照观察.单位:创伤、烧伤和复合伤国家重点实验室,解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所.材料:实验于2003-01/11在解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成.选用3只出生二三个月的贵州小香猪,雌雄不拘,体质量6～8 kg,由解放军第三军医大学实验动物中心提供.主要试剂:IMDM培养基(Hyclone,USA);优质胎牛血清PAA(Germany);Eosin B(Sigma,USA);OCT包埋剂(USA).主要仪器:BX51立式荧光显微镜(Olympus,Japan);IX70型倒置荧光显微镜(Olympus,Japan);恒冷切片机(2700-Frigcut,德国);骨髓穿刺针(江苏);超净工作台(苏净集团安泰公司);CO2恒温培养箱(QUEUE,USA).方法:按文献所述方法准备人羊膜,将按文献所述方法分离、培养的贵州小香猪骨髓间充质干细胞贵州小香猪的骨髓间充质干细胞原代培养、传代扩增后,以不同密度(0.84×105 /cm2,1.54×105 /cm2,2.75×105 /cm2)接种于人羊膜基质面,倒置显微镜及扫描电镜下观察不同培养密度骨髓间充质干细胞的生长增殖变化情况;将第2、3代骨髓间充质干细胞以1.54×105 /cm2的密度作为合适种植密度接种到由聚酯环支撑的人羊膜的基质面,长培养至18 d,逐日经卷膜、切片、苏木精-伊红染色光镜下观察人羊膜负载骨髓间充质干细胞生长情况,同时给予扫描及透射电镜.主要观察指标:不同培养密度及不同时间点骨髓间充质干细胞在人羊膜上的生长情况.结果:①不同种植密度人羊膜促进骨髓间充质干细胞生长比较:倒置显微镜下,以0.84×105 /cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞排列不规则、稀疏,间距大;以1.54×105 /cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞生长排列规则,密度适中,24 h前细胞轮廓清楚,细胞活性好;以2.75×105 /cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞拥挤生长,12 h后不见细胞轮廓,多见非贴附细胞,随时间的推移,细胞老化快,细胞碎屑多见.扫描电镜下,以0.84×105 /cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,胞体肥大,呈不规则的长多边形扁平状,见粗细突起,细胞间距大;以1.54×105 /cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞密度适中,胞体肥大,呈不规则的长多边形扁平状,粗细突起较多,突起相互连接交织.细胞边缘有重叠现象;以2.75×105 /cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞拥挤重叠生长,周围突起不明显,边缘卷折,细胞碎屑多见.②不同时间点人羊膜负载骨髓间充质干细胞生长情况:倒置显微镜下,骨髓间充质干细胞接种在人羊膜的基质面后很快贴附生长,30 min 内就可见到骨髓间充质干细胞在人羊膜基质面上的贴附生长象.24 h后可见几乎全部骨髓间充质干细胞贴附生长,细胞活力好,折光度强,48 h后融合为单层,第4～18天可见骨髓间充质干细胞在人羊膜的基质面密集生长.苏木精-伊红染色可见骨髓间充质干细胞在人羊膜的基质面呈放射状、漩涡状或平行生长,胞体较大,呈梭形,胞核居中、深染、大而清晰,细胞形态较为一致;扫描电镜下,骨髓间充质干细胞在人羊膜的基质面生长4 d,排列密度适中,胞体肥大呈不规则的长多边形扁平状,粗细突起丰富,部分突起相互连接交织成网,胞膜形成突起牢固粘附于人羊膜基质上;透射电镜下,骨髓间充质干细胞在人羊膜的基质面生长4 d切面,骨髓间充质干细胞在人羊膜上大多呈双层生长,细胞呈纺锤状,胞核两端胞浆突起较长,互相重叠,染色质以常染色质为主,核仁明显,可见丰富细胞器,如粗面内质网,线粒体.结论:人羊膜对骨髓间充质干细胞有明显的促增殖作用,骨髓间充质干细胞可以人羊膜为载体在体外进行培养,人羊膜是骨髓间充质干细胞的良好载体.
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人胎盘源间充质干细胞对脐血单个核细胞体外生长的支持作用
目的 探讨人胎盘源间充质干细胞(PMSCs)对脐血单个核细胞(MNCs)体外生长的支持作用.方法 将人胎盘组织经胶原酶消化、贴壁培养获得人PMSCs,用流式细胞仪检测细胞表面标志.以密度梯度离心法分离脐血MNCs和传代后的PMSCs进行共培养,通过细胞计数和流式细胞仪分别检测细胞的生长情况.结果 从人胎盘组织中成功分离和培养PMSCs,经流式细胞仪检测其表型为CD29+、CD44+、CD105+、CD106+、CD166+、CD34-、CD45-、HLA-DR-.人PMSCs+脐血MNCs共培养组的细胞总数和CD45+细胞数在各培养时间点均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).在培养第7天,CD45+、CD14+及CD19+细胞数共培养组也明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 人PMSCs可以作为滋养层细胞有效支持脐血MNCs的体外生长.
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大豆黄酮和染料木素对大鼠乳腺癌细胞体外生长的抑制试验
大豆黄酮(Daidzein)和染料木素(Genistein)是天然存在于豆科植物及其制品中的异黄酮类物质,具有多重生物学活性.本实验观察了两者对SHZ-88大鼠乳腺癌细胞株在体外生长的抑制效应.
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不同CO2气腹压力对人宫颈癌CaSki细胞体外生长的影响
目的 探讨不同CO2气腹压力对人宫颈癌CaSki细胞体外生长的影响.方法 建立CO2气腹体外模型,以不同压力(0、7、14 mm Hg)的CO2气腹对人宫颈癌CaSki细胞处理4 h,设未处理组为对照组.采用MTT法、流式细胞术及电镜比较各组CaSki细胞的生长情况.结果 7 mm Hg 组第1-5天吸光度值明显高于0 mm Hg 组、14 mm Hg 组、对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);7 mm Hg 组G2/M期的人宫颈癌CaSki细胞数值明显高于0 mm Hg 组、14 mm Hg 组、对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);14 mm Hg 组S期人宫颈癌CaSki细胞数值明显高于0 mm Hg 组、7 mm Hg 组、对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);人宫颈癌CaSki细胞的增殖指数随着CO2气腹压力的升高而增高;电镜下观察结果显示,7 mm Hg 组、14 mm Hg 组均可见明显异常的核分裂像.结论 CO2气腹在一定的压力状态下表现出较强的促细胞生长效应.
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层粘连蛋白作用下角膜内皮细胞增殖与细胞骨架的相关性
本文通过观察层粘连蛋白(1aminin,LN)作用下角膜内皮增殖性及细胞微丝骨架的变化,探讨二者的相关性,旨在寻找角膜内皮细胞体外生长的佳条件.
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p16基因转染对膀胱癌细胞系BIU-87体外生长的抑制作用
为探讨p16基因在膀胱癌发生、发展过程中的作用及其在膀胱癌基因治疗中的应用前景,我们将野生型p16基因导入缺失p16基因的BIU-87细胞中,观察p16基因的肿瘤抑制功能.一、材料与方法1.p16基因重组表达载体的构建与鉴定:质粒pGRE5-1含全长0.96 kb的人p16cDNA基因片段,用EcoRI和XhoI双酶切pGRE5-1分离出p16cDNA基因片段,将其插入真核表达载体pcDNA3(5.4kb)的EcoRI/XhoI酶切位点间,构建成重组质粒,命名为pcDNA3-p16,酶切、电泳鉴定.
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腹腔镜手术中不同膨腹气体对肿瘤浸润淋巴细胞体外生长的影响
本实验旨在研究二氧化碳（CO2）、氦气（He）、一氧化二氮（N2O）对模拟气腹条件下肿瘤浸润淋巴细胞体外生长的影响，探讨此类气体是否对机体免疫功能产生抑制作用，导致在气腹条件下肿瘤细胞的扩散与转移，现将结果报道如下。 一、材料与方法 1.肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte，TIL)的制备：肿瘤浸润淋巴细胞分离自1999年8月于我院妇产科手术的卵巢浆液性囊腺癌患者的癌性腹水，按标准方法提取分离TIL细胞，白细胞介素(IL)-2 1×106U/L（上海第二军医大学）体外刺激增殖，培养于含体积分数为20%小牛血清RPMI1640完全培养液中，体积分数为5%的CO2温箱培养3周，以台盼蓝染色后在荧光显微镜下计数。调整浓度为5×108个/L的细胞悬液。
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不同血清钙、铁离子水平对大肠杆菌体外生长的影响
目的 了解人体钙、铁离子水平改变对人类感染常见致病菌大肠杆菌的生长的影响.方法 根据人体生理和病理状态时血清钙、铁的小及大值,分别设定Ca2+、Fe3+的4个浓度作为离子的添加终浓度加入Mueller-Hinton(MH)肉汤,培养大肠杆菌,以比浊法测定各离子浓度下大肠杆菌的生长曲线.结果 在体外Ca2+、Fe3+对大肠杆菌的生长曲线均有影响,不同浓度作用有异.结论 人体血清水平下的Ca2+、Fe3+与大肠杆茼的生长有密切的关系,这对临床治疗与大肠杆菌感染相关的疾病有提示作用.
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腹腔镜不同气腹介质对人宫颈癌细胞株CaSki体外生长影响的研究
目的:探讨腹腔镜不同气腹介质对人宫颈癌细胞株CaSki体外生长的影响.方法:体外培养CaSki细胞,模拟腹腔镜建立CO2气腹和N2气腹处理细胞,另设未处理组为对照.采用MTT法、流式细胞术及电镜比较各组CaSki细胞的生长情况.结果:处理后48h起CO2促进CaSki细胞生长,N2组在处理后48～72h短暂抑制细胞增殖;CO2组G2-M期细胞明显增加;CO2组细胞见明显核分裂像,N2组可见线粒体肿胀,核周间隙扩大.结论:CO2气腹促进CaSki细胞生长,而N2气腹则起一定的抑制作用.
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刺梨提取物的体外抗肿瘤作用
目的:观察刺梨提取物(CL)体外抗肿瘤作用.方法:采用溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑(3-[4,5-dimetyltiazol-2-yl]-2,5-dipenyltetrazolium bromide,MTT)检测法测定CL对子宫内膜癌细胞和人肝癌SMMC7721细胞的细胞毒性作用,按台盼蓝排染法计数在不同浓度药物作用下,不同时间点的活细胞数,绘制子宫内膜癌细胞和人肝癌SMMC7721细胞的生长曲线.结果:MTT法检测显示,CL100μg/ml对子宫内膜癌在48、72、96h的抑制率分别为32.44%、50.17%和56.85%,合用氟脲嘧啶(5-FU)10μg/ml后的抑制率分别为34.03%、55.67%和66.09%;10 μmg/ml的CL的抑制率在72、96h分别为34.68%和36.99%,合用5FU后的抑制率分别为52.58%和64.82%.100μg/ml的CL对SMMC7721在48、72、96h的抑制率分别为32.34%、50.17%和56.85%,合用5FU后的抑制率分别为35.03%、55.67%、66.09%;10μg/ml的CL在72、96h的抑制率分别为34.68%和36.99%,合用5FU后的抑制率分别为52.58%、64.82%;CL对子宫内膜癌细胞和人肝癌SMMC7721细胞的抑制作用随药物浓度的增加和时间的延长而增强.细胞生长曲线显示:随CL浓度的升高曲线逐渐右移,100μg/ml的CL作用下的曲线逐渐下降.结论:CL对子宫内膜癌和SMMC7721的体外生长均具有一定的抑制作用,与5-FU和用抗肿瘤效应增强.这种抑制作用均呈剂量依赖性和时间依赖性,提示CL有一定的抗肿瘤作用.
