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骨髓同种异体干细胞移植后淋巴组织增殖性疾病
1.病例简介:患者男,34岁.无明显诱因出现活动后乏力、气短,自觉头晕、头痛9个月入院.体检无明显异常.血常规示红细胞及白细胞减少,分片偶见原始细胞.骨髓穿刺示原始+幼稚淋巴细胞占59%.流式细胞学免疫分型CD33、CD7、CD11b、CD19、CD5、CD2、CD3阳性.染色体未见异常.临床诊断为急性淋巴细胞性白血病,双表型.于确诊后7个月进行骨髓同种异体干细胞移植.移植后给予环孢酰胺免疫抑制剂治疗,病情平稳.于移植后第55天检查发现患者右颈后可触及肿大淋巴结2枚,大小均约1.5 cm×1.0 cm×1.0 cm.临床考虑:(1)白血病髓外复发;(2)病毒感染;(3)淋巴瘤.因患者移植术后2个月,尚未出无菌舱,不宜手术摘取淋巴结送检,因此于无菌舱内应用"友谊式穿刺针"[1]穿刺肿大淋巴结获取尽可能多标本,除制成1张细胞涂片外,剩余组织全部制成细胞块,常规切片,HE染色、免疫细胞化学染色及EB病毒原位杂交染色.
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肺癌PTEN和DPC4基因的表达及其临床生物学意义
10号染色体丢失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)基因是一个具有磷酸酯酶活性的抑癌基因,其蛋白产物含有一个酪蛋白磷酸酶的功能区,在肿瘤的发生、发展中起重要作用[1].胰腺癌缺失位点4(DPC4)基因是位于18q21.1上的抑癌基因,其蛋白产物DPC4是转化生长因子β(TGF-β)超家族受体的直接底物,TGF-β具有抑制细胞生长和肿瘤转移等多种功能[2].我们应用原位杂交染色技术检测肺癌组织中DPC4 mRNA、PTEN mRNA的表达,以探讨它们的临床生物学意义.材料与方法取材:中南大学湘雅二院45例肺癌手术切除标本,并取同期手术切除的正常肺组织10份.45例肺癌中,男29例,女16例,年龄范围40～76岁,平均年龄(54.9±8.3)岁.鳞癌20例,腺癌17例,小细胞癌5例,大细胞癌3例;按1997年TNM分期方法进行分期,其中Ⅰ～Ⅱ期25例,Ⅲ期20例.临床和病理证实有区域淋巴结转移者20例.常规制作石蜡包埋切片,切片厚4 μm.其中1张切片作HE染色复查诊断和组织学分级,另2张切片分别行DPC4 mRNA和PTEN mRNA染色.
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胰腺良恶性疾病组织中Smad4mRNA,PTENmRNA,P73mRNA表达及意义
目的研究胰腺癌、癌旁上皮和慢性胰腺炎组织中Smad4mRNA,PTENmRNA,P73mRNA表达特征及临床病理意义.方法石蜡包块切片组织原位杂交染色法.结果20例慢性胰腺炎导管上皮和腺泡上皮Smad4mRNA,PTENmRNA均为阳性表达,但P73mRNA均为阴性表达;25例胰癌旁上皮仅1例重度不典型增生者呈Smad4mRNA,PTENmRNA阴性表达和P73mRNA阳性表达(均为同一病例);53例胰腺癌Smad4mRNA,PTENmRNA,P73mRNA阳性病例分别为34例(64%)、31例(58%)和27例(51%);胰腺癌Smad4mRNA,PTENmRNA阳性率明显低于慢性胰腺炎(X2=9.6,P＜0.005;X2=11.8,P＜0.005)和癌旁上皮(X2=9.0,P＜0.005;X2=11.4,P＜0.005);而P73mRNA阳性率明显高于慢性胰腺炎(X2=15.2,P＜0.005)和癌旁上皮(X2=16.2,P＜0.005).高分化腺癌和未转移病例Smad4mRNA,PTENmRNA阳性率明显高于低分化腺癌(X2=4.4,P＜0.05;X2=4.7,P＜0.05)和转移癌(X2=4.2,P＜0.05;X2=3.9,P＜0.05);而P73mRNA阳性率明显低于低分化腺癌(X2=6.4,P＜0.025)和转移癌(X2=4.7,P＜ 0.05).Smad4mRNA与PTEmRNA在胰腺癌中表达呈正相关(X2=5.6,P＜0.025),P73mRNA与Smad4mRNA,PTENmRNA表达呈密切负相关(X2=5.2,P＜0.025;X2=7.1,P＜0.01).结论Smad4mRNA,PTENmRNA和P73mRNA表达共同影响胰腺癌发生发展、生物学行为和预后,均为重要生物学标记物.
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坏死性胰腺炎大鼠肠粘膜细胞表皮生长因子及其受体表达的变化
利用大鼠坏死性胰腺炎模型，测定小肠粘膜上皮细胞内表皮生长因子(EGF)含量、及其受体与mRNA表达。探讨这些变化与坏死性胰腺炎肠粘膜屏障损伤的关系。 1.材料与方法：(1)动物与分组：采用雄性Spragure-Dawly大鼠50只，体重340～380 g，随机分为5组：虚拟手术组(Ⅰ组)；其余4组分别为制模后3 h组(Ⅱ组)、6 h组(Ⅲ组)、12 h组(Ⅳ组)处死和自然死亡组(Ⅴ组)。(2)大鼠急性坏死性胰腺炎模型的制备：采用2.5%戊巴比妥钠，1 ml/kg腹腔内麻醉后，腹部正中切口打开腹腔，在胆总管进入十二指肠开口下缘处用金属夹夹住十二指肠，然后向胰管方向注入5%牛磺酸钠1 ml/kg，注射完毕后用丝线结扎胆总管，2 min后松开银夹及胆总管处的丝线，关腹。虚拟手术组，操作同试验组，注入等量生理盐水，术后自由饮水。(3)方法与步骤：切取1 mm×2 mm的空肠组织块，3%戊二醛固定，依次脱水、包埋、超薄切片及醋酸铀、枸橼酸铅双染色，在透射电镜下对小肠粘膜细胞超微结构进行观察。于屈韧带远侧取近段空肠2 cm，甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，5 μm连续切片，待作免疫组织化学及原位杂交染色。采用ABC法进行小肠粘膜细胞EGF及EGF受体的免疫组织化学染色，EGF受体mRNA采用地高辛随机引物原位杂交法。在单盲情况下应用四川大学研制的MIAS-300全自动图像分析仪，在每张免疫组织染色及原位杂交染色切片上任意选取20个阳性细胞进行吸光度扫描，计算平均吸光度值(A)，即单位面积内EGF含量、EGF受体或EGF受体mRNA的表达。结果以均数±标准差表示，应用第四军医大学统计教研室SPLM统计软件进行统计学处理。
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胃癌多药耐药相关蛋白mRNA表达及临床意义
目的研究胃癌组织中MRP1 mRNA、MRP2 mRNA表达水平及其临床意义.方法常规石蜡包埋切片原位杂交染色法.结果50例胃癌MRP1 mRNA和MRP2 mRNA表达阳性率分别为64%和68%,其评分分别为(3.4±1.6)和(3.5±1.4).高分化腺癌和区域淋巴结未转移癌MRP1 mRNA、MRP2mRNA表达阳性率及其评分均明显高于未分化癌和伴淋巴结转移癌,差异均有显著性或高度显著性(P＜0.05或P＜0.01).结论MRP1 mRNA和MRP2 mRNA表达水平对了解胃癌发生发展、生物学行为和预后,以及指导化疗均有重要意义.
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原位杂交染色的经验
近年来，分子生物学技术正以惊人的速度渗人医学和生物学的各个领域，原位杂交技术被广泛应用于医学科研中，但在具体实验过程中常常会遇到脱片、背景颜色深，着色不理想等问题，本实验组在实验过程中总结了一些经验，以供参考。
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小肠腺瘤和腺癌促血管生长因子与抑制血管生成因子表达及意义
目的研究小肠腺瘤和腺癌组织中碱性成纤维细胞(bFGF),血小板衍生生长因子(PDGF)和血小板反应蛋白-1(TSP-1)三种mRNA表达水平及其临床病理意义.方法收集小肠腺癌手术标本44例,病理类型包括腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级各11、26、7例;癌细胞未侵犯肌层或仅达浅肌层12例,侵犯深肌层18例,浆膜层14例.10例良性病变包括十二指肠腺瘤9例和回肠腺瘤1例.三种mRNA染色方法均为原位杂交染色法.结果44例小肠腺瘤bFGF mRNA、PDGF mRNA和TSP-1 mRNA阳性率分别为57%,48%和36%,10例小肠腺瘤则分别为20%,30%和90%.小肠腺瘤bFGF mRNA阳性率明显高于腺瘤(P<0.05),而TSP-1 mRNA则相反(P<0.05).腺癌Ⅰ级+Ⅱ级、癌细胞未侵犯肌层+侵犯浅肌层、肿块大径<3 cm和未见淋巴结转移病例,bFGF mRNA、PDGF mRNA阳性率明显低于腺癌Ⅲ级、癌细胞侵犯深肌层+浆膜层、肿块大径≥3 cm和淋巴结转移病例,但TSP-1 mRNA表达则相反.bFGF mRNA在腺癌中表达与PDGF mRNA表达呈正相关,但与TSP-1 mRNA表达呈负相关.结论bFGF、PDGF和TSP-1均为重要的肿瘤血管生成调节因子,其中bFGF、PDGF mRNA表达与小肠癌发生、发展、生物学行为、转移及其预后有密切关系,为重要生物学标记物;而TSP-1 mRNA表达者可能分化好、侵袭力弱,预后较好.
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大鼠胰腺癌和非癌胰腺组织的KiSS-1 mRNA表达
目的:建立Sprague-Dawely大鼠胰腺癌模型,研究模型中胰腺导管癌和非癌胰腺组织中KiSS-1mRNA的表达情况.方法:将二甲基苯并蒽(dimethylbenzanthracene,DMBA)直接置入胰腺被膜下实质内建立胰腺癌模型组(A组),另一组同样注入DMBA并每周腹腔注射曲古霉素(trichostatin,TSA)设立干预组(B组),A组和B组于3～5个月内处死,对照组(C组)于第5个月处死,肉眼检查大组织及HE染色观察胰腺癌发生情况;采用原位杂交方法检测KiSS-1 mRNA.结果:(1)实验组(A组)3～5个月癌发生率为48.7%(18/37),17例为胰腺导管癌,1例为纤维肉瘤;B组3～5个月癌发生率为33.3%(12/36),11例为胰腺导管癌,1例为纤维肉瘤,A组胰腺癌大径均值大于B组(P＜0.05);C组胰腺及A组、B组胰腺非主要脏器均无明显病理改变.(2)A组和B组胰腺癌组织中KiSS-1mRNA阳性率明显低于非癌胰腺组织(P＜0.01),A组和B组胰腺癌KiSS-1mRNA阳性率分别低于相应A组和B组非癌组织(P＜0.01),非癌胰腺组织中KiSS-1 mRNA阴性表达者导管上皮均呈中至重度不典型增生,C组胰腺组织KiSS-1mRNA均阳性表达.结论:较大剂量DMBA置入胰实质内,可在短期内获得较高胰腺癌发生率;TSA能干预胰腺癌的生长;KiSS-1失表达在胰腺癌发生发展中可能具有重要的作用.
关键词： 胰腺肿瘤 KiSS-1转移抑制基因 原位杂交染色 大鼠 -
胰腺癌组织ER mRNA与PS2表达的相关性研究
目的:研究胰腺癌组织ER mRNA和PS2表达特征、相互关系及其临床病理意义.方法:35例胰腺癌手术切除标本经10%中性福尔马林固定后常规制作石蜡包埋切片,ER mRNA染色为原位杂交染色法,PS2染色为常规ABC免疫组化法.结果:35例胰腺癌PS2阳性16例(45.7%),其评分值为1.82±1.34; ER mRNA阳性18例(51.4%),其评分值为2.08±1.46.PS2和ER mRNA表达阳性率及其评分之间均存在密切正相关(γ=0.64,P<0.01).高分化腺癌PS2和ER mRNA表达阳性率及其评分明显高于中、低分化腺癌(P＜0.05或P＜0.01),无转移癌两者阳性率及其评分高于转移癌(P>0.05).结论:PS2和ER mRNA表达与胰腺癌生物学行为及其雌激素依赖性存在密切关系,同时检测ER mRNA PS2表达可更精确了解胰腺癌雌激素依赖性和提高临床内分泌治疗有效率.
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十二指肠和小肠肿瘤P27mRNA,PTENmRNA表达及意义
目的:研究十二指肠和小肠良恶性肿瘤组织中P27mRNA,PTENmRNA表达及临床病理学意义.方法:标本经10%福尔马林固定,常规石蜡包埋后连续切片,P27mRNA和PTENmRNA染色方法为原位杂交染色法.结果:44例腺癌P27mRNA和PTENmRNA阳性率(52%,57%)明显地低于10例腺瘤(90%,90%),P27mRNA和PTENmRNA阴性病例均为同1例腺上皮呈重度不典型增生腺瘤.组织学分级Ⅰ级、癌细胞未侵袭肌层+浅肌层、肿块大径≤3cm和淋巴结未转移病例P27mRNA、PTENmRNA阳性率明显高于组织学分级Ⅲ级、癌细胞侵袭深肌层+浆膜层、肿块大径＞3cm和淋巴结转移病例.P27mRNA和PTENmRNA在腺癌中表达无明显相互关系.结论:P27mRNA和PTENmRNA表达与十二指肠和小肠癌发生发展、生物学行为、转移发生及预后有密切关系,检测十二指肠和小肠良性病变P27mRNA或/和PTENmRNA表达对预防和早期发现恶性肿瘤可能有重要临床应用意义.
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胰腺癌和原发性肝癌组织中HBVDNA原位杂交的研究
目的研究胰腺癌和肝癌组织HBVDNA状况及其病因学意义.方法51例胰腺癌和37例肝癌手术切除标本经10.0%福尔马林固定后常规制作石蜡包埋切片,HBVDNA染色方法为原位杂交法.结果16例胰腺癌(31.4%)HBVDNA阳性,阳性病例血清HBsAg均阳性;28例肝癌(75.6%)HBVDNA阳性,阳性病例AFP值阳性率及肝硬化程度明显地高于阴性病例,HBVDNA与胰腺癌和肝癌其他临床病理特征无明显关系.结论HBV感染除与肝癌发生密切相关外,也可能是胰腺癌发生的一个重要致癌因素.
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病理性瘢痕中结缔组织生长因子的表达及其意义
目的:观测结缔组织生长因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)在瘢痕组织中的表达,以探讨其与病理性瘢痕形成的关系.方法:分别取正常皮肤20例、成熟瘢痕20例、增生性瘢痕20例和瘢痕疙瘩20例标本,经HE染色、原位杂交(SABC法)染色,用图象分析系统定量分析CTGF在不同组织中表达的差异性.结果:CTGF在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩,瘢痕疙瘩边缘正常皮肤中呈强阳性表达,明显高于其在正常皮肤中的表达,差异具有统计学意义(P<0.05);其在成熟瘢痕、增生瘢痕边缘正常皮肤呈弱阳性表达,与正常皮肤相比差异无统计学意义(P>0.05).结论:CTGF在病理性瘢痕的发生发展中起重要作用.
