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内毒素致伤小鼠肺组织SSeCKS表达变化的研究
目的观察内毒素/脂多糖(LPS)致伤小鼠肺组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)的表达变化和细胞定位.方法腹腔注射LPS制备小鼠内毒素肺损伤模型,依据注射时相和剂量不同随机分组.用Real-time PCR法和Western blot法检测各组肺组织SSeCKS的mRNA和蛋白质水平表达情况,间接免疫荧光双标法检测SSeCKS在肺组织中的细胞定位.结果 SSeCKS表达水平与LPS用量呈现剂量和时间依赖关系:1、5、10和15 mg/kg组SSeCKS mRNA水平皆显著高于对照组(P＜0.05),且随注射剂量增高SSeCKS mRNA表达量亦逐渐增高;不同时相LPS(5 mg/kg)注射后肺组织中SSeCKS mRNA水平表达呈动态变化过程,1 h开始增高,3 h达到表达高峰,12 h降至正常水平;SSeCKS蛋白水平表达变化与mRNA水平变化相一致.SSeCKS在肺组织中定位于肺泡间隔毛细血管内皮细胞.结论SSeCKS是炎症反应蛋白,其表达量与炎症的严重程度相关.内毒素可诱导肺泡间隔毛细血管内皮细胞SSeCKS表达上调.
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一种新的细胞支架蛋白--SSeCKS的研究进展
支架蛋白是一种在调节信号传导起着重要作用的蛋白质,它通过辅助蛋白激酶和磷酸酶与他们各自的底物结合而起作用.在癌细胞中支架蛋白的下调和失活导致许多信号通路的失调.在炎症反应中支架蛋白参与血管内皮细胞的收缩,吞噬细胞的内吞.
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IL-1β影响大鼠星形胶质细胞中SSeCKS表达的研究
目的:研究Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在IL-1β激活的星形胶质细胞中的表达.方法:以炎性因子IL-1β刺激大鼠体外培养的星形胶质细胞,观察细胞中SSeCKS的表达及其细胞内的亚定位的改变.结果:IL-1β可上调大鼠原代培养星形胶质细胞中SSeCKS的表达,诱导其丝氨酸磷酸化.在亚细胞水平,IL-1β还能引起SSeCKS向核周、细胞星状突起聚集,而蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro-31-8220能抑制IL-1β对细胞中SSeCKS亚细胞定位及磷酸化水平的影响.结论:在IL-1β的影响下,大鼠星形胶质细胞中SSeCKS的表达增加,磷酸化水平增强,细胞内定位发生改变,这种改变与PKC的功能相关,提示SSeCKS可能作为PKC的下游分子参与到炎性因子引起的星形胶质细胞活化的过程中.
关键词： SSeCKS 星形胶质细胞 interleukin-1β 大鼠 PKC -
清脂护肝方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的作用研究
目的：探讨清脂护肝方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的作用及其机制。方法58只雄性SD大鼠，均喂养高脂饲料，予以12只作对应。将造模成功的大鼠再随机分为模型组、低剂量、中剂量和高剂量清脂护肝方组，分别给予0．9％NaCl 溶液灌胃，清脂护肝方组予清脂护肝方药液灌胃6周；观察记录大鼠的行为表现及体质量变化。干预结束后次日处死所有大鼠并留取血清和肝脏，检测清脂护肝方对 NASH 大鼠肝生化指标的影响。免疫组织化学方法检测NASH 大鼠肝组织中 SSeCKS、Hck、Lyn、Fgr 的表达水平。体外实验：对库普弗细胞株采用不同浓度不同时间的 CCL4刺激，用优选方案的清脂护肝方药物血清培养后检测 SSeCKS、Hck、Lyn、Fgr 的表达。结果与正常对照组相比，模型组大鼠体重明显增加（P ＜0．05）；模型组 ALT、AST、TBIl 均较正常对照组升高（P ＜0．05）；模型组 TG、CH、LDL 均明显上升（P ＜0．01），HDL 亦有所降低（P ＜0．05）。与模型组相比，中大剂量清脂护肝方组体重均有减轻，其中大剂量组的体重减轻为明显（P ＜0．01）；清脂护肝方各剂量治疗组 ALT 与模型组比较明显降低（P ＜0．01），大剂量治疗组AST 与模型组比较明显降低（P ＜0．01）；清脂护肝方中、大剂量组的血清 TBIL 较模型组显著下降（P ＜0．01）；与模型组比较，清脂护肝方组的 TG、LDL 有所降低（P ＜0．05），尤其大剂量组降低相对更明显；清脂护肝方各剂量组 CH 有所降低，但仅有大剂量组有统计学差异（P ＜0．05）。ICC 结果表明：Lyn、Hck 在 kupffer 细胞中有表达，并与炎症程度呈正相关，清脂护肝方药物血清培养后表达减少，Fgr 和 SSeCKS 在 kupffer 细胞中无明显表达。ICC 结果表明：Hck、Lyn 在正常肝脏组织中低表达，模型组中高表达，用药组无论是大、中、小剂量组，在抑制 Hck、Lyn 两种 Src 相关激酶成员的阳性表达是有显著效果，特别是大剂量组，与模型组比较有显著意义（P ＜0．01）；模型组 SSeCKS 蛋白的表达显著低于正常组，在治疗组中的表达介于模型组和正常组，同时伴随 Lyn、Hck 表达的升高呈减少趋势，提示 SSeCKS 与 Src 家族相关激酶（Lyn、Hck ）存在某种上下游抑制关系；而清脂护肝方对 Fgr 的表达无明显影响，用药前后无统计学意义（P ＞0．05）。结论清脂护肝方能减轻肝脏的炎性反应，明显改善肝功能和血脂指标，其机制可能与 SSeCKS、Lyn、Hck 信号通路有关，且高剂量时疗效更优。
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大鼠脑组织中SSeCKS基因克隆
目的:克隆胚胎大鼠脑组织中SSeCKS基因.方法:采用RT-PCR法,从胚胎大鼠脑组织mRNA中扩增SSeCKS基因部分CDS区片段,克隆入T载体,筛选阳性克隆、酶切鉴定并经序列测定.结果:RT-PCR法扩增出一特异产物与预期长度446bp相符,DNA序列测序的结果与GenBank提供的已知序列(U23146)比较,所克隆的SSeCKS基因片段与其中的446bp完全相同,与SSeCKS基因100%同源.结论:采用RT-PCR和T载体技术获得了胚胎大鼠脑组织中的SSeCKS基因克隆.
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TNF-α对大鼠肺微血管内皮细胞SSeCKS mRNA表达的影响
目的 研究肿瘤坏死因子(TNF-α)对培养的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)中Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)mRNA表达的影响.方法 根据TNF-α刺激时间与浓度的差异,将培养的PMVEC随机分为TNF-α时间刺激组与浓度刺激组,前组以5000U/ml的TNF-α分别与PMVEC作用0h、0.5h、1.5h、3h、6h、12h;后组分别以OU/ml、200U/ml、1000U/ml、5000U/ml的TNF-α与PMVEC作用3h.运用RT-PCR法分析SSeCKS mRNA的表达变化.结果 TNF-α可以时间及浓度依赖的方式上调大鼠PMVEC中SSeCKS mRNA的表达.结论 SSeCKS可能参与了TNF-α所致大鼠PMVEC单层通透性损伤过程.
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卡巴胆碱对脓毒症大鼠肺微血管内皮细胞功能的影响
目的 观察卡巴胆碱对脓毒症大鼠肺微血管内皮细胞(VEC)功能的影响.方法 将SPF级健康雄性SD大鼠30只随机分成三组:氯化钠注射液组(SHAM组)、脓毒症组(LPS组)、卡巴胆碱组(CBL组).LPS组经左侧股静脉注射脂多糖(LPS)10 mg/kg,SHAM组经左侧股静脉注射等量氯化钠注射液,卡巴胆碱组在注射LPS后注射卡巴胆碱10μg/kg.分别在各组模型制备完毕后6 h经腹主动脉取血用ELISA法检查肿瘤坏死因子-α(TNF-ɑ)水平,取右肺下叶肺组织用Real-time PCR检测SSeCKS的mRNA表达,Western blot检测各组右肺下叶肺组织E-选择素蛋白质表达水平情况,取右肺中叶行透射电镜检查.结果 SHAM组表达少量的TNF-ɑ、SSeCKS、E-选择素,LPS能够上调他们的表达,CBL组TNF-ɑ、SSeCKS、E-选择素较LPS组表达降低(P<0.05).透射电镜结果显示CBL组肺VEC水肿和凋亡等表现较LPS组相对减轻.结论 卡巴胆碱不仅可以有效抑制脓毒症大鼠血浆TNF-ɑ水平,抑制炎症反应,而且能下调肺微血管内皮细胞SSeCKS和E-选择素的表达,并减轻LPS所致的肺微血管内皮细胞超微结构改变.提示卡巴胆碱能够改善脓毒症大鼠肺微血管内皮细胞的通透性.
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大鼠脑损伤后SSeCKS的表达变化
目的:探讨大鼠脑损伤后,SSeCKS(Src抑制的蛋白激酶C的底物)在脑组织中的表达变化及其意义.方法:制备成年SD(Sprague-Dawley)大鼠脑损伤模型.通过Western blot和RT-PCR方法检测脑损伤后SSeCKS表达的时相变化,免疫组织化学方法检测SSeCKS在脑组织中的细胞定位.结果:Western blot显示,大鼠脑损伤后,SSeCKS的表达逐步降低,伤后3 d降至低点,之后逐渐上升,7 d达到高峰,14d后趋于平稳;RT-PCR的结果与Western blot一致.免疫荧光双标记结果显示SSeCKS与星形胶质细胞的标记物GFAP、神经元的标记物NeuN共定位.结论:大鼠脑损伤可以改变SSeCKS的表达,这种改变可能参与脑损伤后星型胶质细胞的活化和增殖过程,并与神经元的凋亡、轴突再生有关.
关键词： 脑损伤 蛋白激酶C(PKC) SSeCKS 大鼠 -
脂多糖刺激大鼠肝组织后Src抑制的蛋白激酶C底物的表达变化
蛋白激酶C(PKC)作为信号转导主要成员而参与内毒素诱导肝损伤[1,2].然而,目前关于PKC参与内毒素肝损伤的分子机制尚不明确.Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)为一种新发现的支架蛋白,通过锚定主要信号调节因子蛋白激酶C(PKC)而调节其与下游底物的结合,从而辅助调控细胞因子的分泌和有丝分裂[3,4].
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SSeCKS蛋白在新生大鼠高氧肺损伤中的表达
目的 观察新生大鼠高氧肺损伤模型肺组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)的表达及细胞定位.方法 64只新生大鼠按照随机数字表法分为空气对照组和高氧暴露组,分别建立动物模型,于12、24、48、72 h处死动物,进行肺组织的病理学检查及肺湿干质量比(W/D)检测,应用Western blot及免疫组化法检测各组各时相点肺组织中SSeCKS蛋白的表达,用间接免疫荧光双标法明确SSeCKS蛋白在肺组织中的定位.结果 病理HE染色:高氧暴露24 h肺泡内出现少量红细胞,肺泡擘增厚;48 h肺泡内红细胞增多,肺间隔增宽,粒细胞附壁;72 h出现肺出血,肺泡内可见大量的红细胞,肺泡间隔粒细胞浸润.Western blot法检测SSeCKS蛋白:空气对照组可检测到极少量的SSeCKS的表达,高氧暴露24 h表达增加,72 h达到高,72 h内随高氧暴露时间延长而增加;免疫组化定量分析与Western blot结果一致;间接免疫荧光双标法明确SSeCKS定位于毛细血管内皮细胞.结论 提示SSeCKS参与了新生大鼠高氧肺损伤的过程.
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大鼠坐骨神经夹伤后SSeCKS的表达变化
为了探讨大鼠坐骨神经夹伤后SSeCKS(Src抑制的蛋白激酶C底物)在神经中的表达变化及其意义,本研究制备了成年SD 大鼠坐骨神经夹伤模型,通过Western blotting和免疫组织化学方法检测坐骨神经夹伤后SSeCKS表达的时空变化.Western blotting结果显示:大鼠坐骨神经夹伤后,SSeCKS的表达迅速升高,伤后6 h即达到高峰, 之后逐渐下降.免疫组织化学染色结果表明SSeCKS在神经夹伤两端高表达,以近端明显,呈簇状聚集.夹伤远端表达较近端稍低.远离夹伤处及相应对侧,SSeCKS的表达水平有所下降且分布较为均一.免疫荧光组织化学双标记结果显示:夹伤两端SSeCKS与S100和NF200的共存不明显,但可见部分SSeCKS与GAP43双标纤维.本研究提示大鼠坐骨神经夹伤可引起SSeCKS的表达变化,该变化可能参与周围神经损伤后某些伤害性刺激信号分子的转导并与损伤后神经的再生及功能修复有关.
关键词： 坐骨神经夹伤 SSeCKS 免疫组织化学 Western blotting 大鼠
