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抗排斥反应中睾丸Sertoli细胞与免疫抑制剂的协同作用
将表达FasL的睾丸Sertoli细胞与肾细胞共同移植，联合应用环孢素（CsA）观察抗排斥效果，以探讨一条同种异体肾移植中移植体保护的新途径。 供受体为不同种系Wistar雄性大白鼠。用酶消化法制备供体睾丸Sertoli细胞及肾细胞。采用流式细胞仪检测FasL及Fas。按以下法建立同种异体移植模型：A组10只，仅移植肾细胞；B组16只，移植2种细胞（B左），任取其中6只大鼠（B右），右侧肾包膜下同时植入肾细胞，对比观察；C组10只，植入2种细胞，但Sertoli细胞注射前已用抗FasL抗体封闭。D组10只，植入2种细胞，并且使用CsA。术后20d免疫组化及计算机图象分析观察移植物中g-PG，TUNEL法观察移植物中凋亡细胞。
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肝脏干细胞研究进展与治疗前景
肝脏疾病是危害人类健康的一类重要疾病,尤其是终末期肝病,目前只有进行肝脏移植才能有效治疗.但是,由于肝脏来源的匮乏及肝移植费用昂贵,肝脏移植一直未能广泛应用.几十年来,国内外学者一直致力于肝脏干细胞的研究并试图以肝脏干细胞移植代替肝脏移植,以解决移植体来源的问题.通过对啮齿类动物以及人类肝脏疾病发病机理的研究取得了大量令人信服的证据,肝脏干细胞的存在成为国内外学者公认的事实,并且在肝脏干细胞移植领域取得了可喜的进展.
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肺移植术后支气管狭窄的诊治
支气管狭窄是肺移植术后常见的一个问题,本研究结合我院肺移植体会,探讨肺移植术后支气管狭窄的诊治.
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5例同种原位心脏移植体外循环管理
2000年1～10月我们为5例病人实施了同种原位心脏移植手术,术后4例生存、死亡1例.现将体外循环方法总结报道如下.临床资料 5例心脏移植受者心功能均为IV级,并伴有严重心律不齐,其中合并重度肺动脉高压1例,轻度肺动脉高压3例,其余临床资料等见表1.
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毛发游离移植修复女性阴毛缺失
女,22岁,未婚.因先天性无阴毛就诊.查体第二性征及月经正常.当地风俗认为女性无阴毛为不祥之兆,要求治疗.局麻下切取枕部头皮1.5 cm×5.0 cm大小,供区缝合.将头皮放在切割板上,分成单一毛囊移植体和含有3～5根毛囊的微小移植体.受区用16号针头穿刺制作移植缝,将微小移植体移植在受区中间部分,单一毛囊移植体移植在受区边缘,局部加压包扎.
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胰岛素生长因子1在颅缝闭合中调节作用的实验研究
目的研究胰岛素生长因子1对大鼠颅缝细胞的骨诱导作用和体外调节小鼠矢状缝闭合的作用.方法获取新出生的SD大鼠的矢状缝细胞进行培养和出生8 d的CD1小鼠矢状缝进行体外无血清器官培养基培养,加入胰岛素生长因子1(insulin lilce growth factor 1 IGF1),浓度分别为10 ng/ml和40 ng/ml,并设立不加IGF1者为对照组,应用RT-PCR检测颅缝细胞的成骨细胞表型碱性磷酸酶、骨钙素和骨桥蛋白mRNA表达,ELISA法检测培养液Ⅰ型胶原的分泌,光镜观察小鼠矢状缝闭合的情况.结果加入IGF1的矢状缝细胞的成骨细胞表型碱性磷酸酶、骨钙素和骨桥蛋白mRNA表达以及培养液Ⅰ型胶原分泌量较对照组明显增高.有IGF1干预的矢状缝移植体培养8 d时,颅缝内侧面骨板开始接近,培养20 d时,颅缝小部分闭合,培养30 d时颅缝大部分闭合,无IGF1干预的对照组培养30 d,颅缝未发生闭合.结论胰岛素生长因子1通过增强颅缝细胞的骨诱导促进颅缝的闭合.
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高密度发泡聚乙烯种植体在眶底爆裂性骨折中的应用
眶底爆裂性骨折往往是由于拳击或钝器打击眼球及眼球周围所致,临床主要表现为眼球内陷和复视.治疗则多利用移植体修复眶底缺损,恢复眼球位置及改善复视,移植体的选择有自体骨、自体软骨、硅胶、羟基磷灰石及聚四氟乙烯等[1],这些移植体都各有缺点.近年来,国内引进了一种新型材料,即高密度发泡聚乙烯种植体(MEDPOR种植体,美国Surgic Implant公司产品,化学名为porous polyethylene implant),我们于1998年11月至2000年10月用MEDPOR种植体(型号9531)治疗了12例眶底爆裂性骨折患者,均获得满意效果,现将结果报告如下.
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全胚胎培养技术在妇女劳动卫生工作中的应用
全胚胎培养技术(whole embryo culture，WEC)是将实验动物(多用大鼠或小鼠)的完整胚胎移植体外培养液中，进行体外培养的方法。依照移植胚胎发育时期的不同，可分为：着床前(pre-implantation)胚胎培养，围着床期(peri-implantation)胚胎培养和着床后(post-implantation)胚胎培养方法。通常，WEC指着床后胚胎培养。 WEC方法初是由胚胎学家为了研究胚胎发育而创建的一种研究方法。WEC技术初是由Nicholas(1934)和Rudnick(1939)进行实验，虽然在30年代取得了一些令人鼓舞的结果，但远远不能支持整个器官发生期胚胎在体外的生长和发育，只能在体外维持非常短的时期，胚胎的生长发育也不理想。
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同种异体原位心脏移植体外循环管理
同种异体心脏移植是目前治疗各种原因所致终末期心脏病的有效方法.我院2002年4月至2005年3月共进行5例同种异体原位心脏移植,均获得成功.现将体外循环管理报告如下.
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组织工程化脱细胞神经基质移植体的研究进展
组织工程化的细胞外基质成分、细胞或通道的基底物质已经显示出支持轴突再生和功能恢复的巨大潜能.脱细胞处理的神经基质移植体具有良好的仿生性和生物相容性,包含较丰富的促进神经生长的蛋白等成分并适合于种子细胞在其内迁移生长,移植后免疫排斥反应较低,为轴突再生提供适宜的微环境,能够有效地促进轴突再生,是修复周围神经缺损的适宜移植物,将在周围神经损伤修复中占明显优势.
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脱细胞处理的同种异体神经移植研究进展
周围神经损伤的修复是创伤外科难题之一,筛选促进神经再生理想的移植物,是解决这一难题的关键.近年来,在修复周围神经缺损研究中采用脱细胞处理的同种异体神经作为移植物,已取得促进神经再生的效果,展示了较好的应用前景.本文对脱细胞处理移植体的脱细胞处理方法,脱细胞处理后的细胞外基质所含的生物活性物质,以及这些物质的对促进神经再生的生物效应进行综述,以期为此种移植体的深入研究提供参考资料.
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神经干细胞共移植体的体外构建
目的:选择合适的细胞外基质,利用脑微血管内皮细胞、细胞外基质与神经干神胞构建神经干细胞共移植体,以提高移植神经干神胞向神经元的分化率.方法:实验于2005-11/2006-10在佳木斯大学神经病研究所免疫组织化学研究实验室完成.①实验材料:同一基因背景出生2 h～7 d清洁级Wistar大鼠由哈尔滨医科大学实验动物学部提供.取出生24 h内Wistar大鼠大脑制备神经干细胞,采用免疫组织化学法和免疫荧光法做nestin染色鉴定;取出生1～7 d Wistar大鼠大脑制备脑微血管内皮细胞,采用免疫细胞化学方法鉴定.②实验方法:不同细胞外基质的筛选:将多聚赖氨酸、层黏连蛋白和Matrigel分别与神经干细胞和脑微血管内皮细胞混合培养,接种于铺有盖玻片的6孔板中,并加入神经干细胞完全培养液,每3 d换半量液,7 d换全液.采用免疫组织化学观察抗微管相关蛋白阳性细胞.进行神经干细胞共移植体构建及检测.③实验评估:利用免疫荧光方法,以Ⅷ因子标记物标记脑微血管内皮细胞,用nestin标记神经干细胞,检测共移植体.结果:①神经干细胞和脑微血管内皮细胞形态学观察及鉴定:原代分离的单神经干细胞4 d增生为神经细胞球,传代后,经nestin免疫荧光染色,细胞球呈阳性;原代培养脑微血管内皮细胞6～8 d长满瓶壁,细胞呈多角形或扁平梭形,核卵圆形,Ⅷ因子相关抗原阳性.②3种细胞外基质对神经干细胞分化的影响:层黏连蛋白与两种细胞共培养,抗微管相关蛋白阳性细胞数明显高于Matrigel组和多聚赖氨酸组(P＜0.01).③共移植体活细胞镜下及免疫荧光结果所见:镜下可见共移植体细胞团不规则,神经干细胞被脑微血管内皮细胞包绕或相互连贴,脑微血管内皮细胞核大,胞体不规则,明显大于神经干细胞,神经干细胞折光性强.在200倍视野下,随机选取100个共移植体进行细胞计数,可见平均细胞数为8～15个,其中脑微血管内皮细胞数平均2.8个.免疫荧光可见红色Ⅷ因子阳性脑微血管内皮细胞包被绿色nestin阳性神经干细胞,或相互粘贴.结论:以脑微血管内皮细胞为支持细胞,用层黏连蛋白为细胞外基质可以成功构建神经干细胞共移植体.
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层黏连蛋白与脑微血管内皮细胞对共同植入缺血模型大鼠脑内神经干细胞增殖与凋亡的调节
目的:将由神经干细胞、层黏连蛋白、脑微血管内皮细胞构建的共移植体植入缺血模型鼠大脑内,观察共移植体中神经干细胞的增殖和凋亡.方法:实验于1996-01/1996-12 在佳木斯大学神经科学所完成.实验材料:同一基因背景Wislar大鼠,体质量300～350 g,雄性,6月龄,购自哈尔滨医科大学实验动物学部.实验方法:①取出生24 h内Wistar新生鼠,培养冲经干细胞.②将传代脑微血管内皮细胞消化后,以3×107L-1密度接种于培养瓶中,12 h贴壁后吸出脑微血管内皮细胞培养液,涂以一层细胞外基质后,接种经0.125%胰酶消化20 min后吹打成单细胞的神经干细胞悬液,密度为6×108L-1,加入神经干细胞完全培养液.培养3～6 h,镜下观察神经干细胞完全贴壁后,吸出培养液,再涂以一薄层细胞外基质,接种以上相同密度脑微血管内皮细胞,加入神经干细胞完全培养液.共培养12～24 h,镜下观察脑微血管内皮细胞.利用免疫荧光方法检测共移植体.③制备大鼠脑缺血模型.模型制备完成后大鼠虽然有脑缺血症状,但伴下列情形之一的不纳入:神经学症状评分低于2分;取脑时发现蛛网膜下腔出血;脑组织石蜡切片苏木精-伊红染色无缺血病理改变;未到观察时相点便死亡的.共48只大鼠模型制作成功.将Wistar大鼠随机分为神经干细胞组、共移植体组,每组24只.2组分4个时间点3,7,14,60 d,每个时间点6只.模型建立后3 d,神经干细胞组移植神经干细胞,共移植体组移植共移植体,各5 μL.移植前神经干细胞经Brdu 5 mmol/L标记3 d,再将其溶解于PBS中,细胞密度调整为2×1011L-1,移植部位为右侧纹状体区.通过免疫组织化学和免疫荧光方法观察神经干细胞增殖和凋亡情况.结果:48只大鼠均进入结果分析.①神经干细胞增殖情况:细胞数3 d开始增加,14 d达高峰,60 d减少.两组3,7,14,60 d细胞数相比,差异显著(神经干细胞组:19.57±4.27,22.25±4.53,39.13±4.52,7.13±2.75;共移植体组:39.88±4.26,40.50±4.03,56.88±9.33,17.13±4.09,P＜0.05,P＜0.01).3,7 d细胞增殖数较稳定,Brdu阳性细胞主要集中在针迹部位,14 dBrdu阳性细胞多,散在分布,部分与周围组织整合,60 d Brdu阳性细胞细胞数下降,大部分已与周围组织整合.②神经干细胞凋亡率情况:随着时间延长,共移植体组细胞凋亡率降低,与神经干细胞组相比,差异显著[单纯神经干细胞组3,7,14,60 d分别为:(35.57±1.85)%,(28.58±1.26)%,(17.86±1.32)%,(2.05±0.67)%;共移植体组分别为:(24.77±2.44)%,(22.75±3.40)%,(9.88±1.81)%,(0.75±0.32)%,P＜0.05,P＜0.01].结论:层黏连蛋白和脑微血管内皮细胞与神经干细胞共移植体移植入缺血模型大鼠脑内可明显促进神经干细胞增殖,减少其凋亡.
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不同移植体修复晚期颅骨缺损56例的疗效分析
目的 评估不同移植体修复晚期颅骨缺损的疗效。方法 自1991年以来，应用不同移植体修复晚期颅骨缺损56例，其中应用MEDPOR 6例、自体肋骨30例、颅骨外板8例、羟基磷灰石8例、固体硅橡胶4例。结果 经6～12个月临床随访，治疗效果明显，成功率达91.1%，除1例假体外露及1例癫痫发作外，其余无严重并发症发生。结论 颅骨缺损的修复，MEDPOR及自体颅骨及肋骨是安全可靠的，羟基磷灰石及硅橡胶须严格掌握适应证，尽量少用。
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颊脂垫在口腔内缺损修复中的应用
颊脂垫是咀嚼脂肪垫的一个重要组成部份.Egyedi[1](1977)先将其作为带蒂移植体封闭口腔上颌窦瘘和口腔与鼻腔的洞穿.后来Tideman[2](1986)用来覆盖游离皮片的颊脂垫修复口腔内缺损获得成功.作者自1993年起应用颊脂垫修复口腔内缺损,取得满意效果.本文结合文献报道,对颊脂垫的应用解剖、颊脂垫瓣的制作技术、适应症及优缺点等问题讨论如下.
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毛囊单位保存于0℃和4℃林格液时的活性比较
毛发移植是个费时的手术,术中一般要求将移植物包括头皮和分离好的移植体(现多使用毛囊单位)在植入前暂时在较低的温度保存(1～4℃),以降低其体外代谢,提高移植后的成活率[1].
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微囊胰岛移植体的相关问题和进展
异种胰岛移植可能是治疗1型糖尿病有希望的方法.它不仅能逆转糖尿病动物和人的高血糖状态,而且能防止糖尿病慢性并发症的发生及发展[1].然而,排斥反应和生物安全性一直是阻碍异种移植的两个主要问题[2～3].微囊移植技术能起有效的免疫隔离作用,为解决排斥反应、供体缺乏等问题提供了新思路[4],但是目前微囊化移植体均未能有效地摆脱有限的功能和寿命[5].猪的内源性逆转录病毒(porcineendogenous ret rovirus,PERV)可感染体外培养人细胞,这使跨种族间感染已引起人们的重视[6].作者就这些方面来阐述微囊异种胰岛移植体的相关问题研究进展情况.
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MEDPOR修复晚期颅面部骨缺损11例临床报告
晚期颅面骨缺损大多是由于外伤骨折或脑部手术所致,临床表现主要为颅部及眶周部骨组织的缺损及凹陷畸形.为了改善外形及保护脑组织,手术修复成为1种重要手段.手术修复过程中,移植体的选择对于手术成功与否起着关键作用.
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胎盘胶原是一种新的无抗原性的组织充填物
胶原作为一种生物材料,近几十年来,因其独特的生物效应和较弱的免疫性,在医学领域已被广泛使用.在止血制品、心瓣膜假体、血管移植体及软组织充填物中,胶原都发挥了重要的作用.
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颊脂垫在腭裂修复术中的应用
颊脂垫是颊部的一团特殊的脂肪组织.Egyedi[1](1997)先将其作为带蒂移植体封闭口腔上颌窦瘘和口腔与鼻腔的洞穿.笔者近来将其用于腭裂修复术松驰切口填塞修复取得良好的效果,现报告如下.
