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流感病毒对囊性纤维化跨膜转导调节因子影响的研究
目的 探讨原代培养的小鼠气管单层细胞培养方法 及流感病毒对原代培养的小鼠气管单层细胞囊性纤维化跨膜转导调节因子的影响,明确流感病毒破坏呼吸系统水盐转运平衡的影响机制.方法 应用倒置显微镜记录细胞形态,应用电阻计测量跨上皮电阻以评估细胞间的紧密连接状态,尤斯灌流装置记录原代培养的小鼠气管单层细胞短路电流.结果 200倍焦距的光镜下培养的原代小鼠气管上皮细胞形态呈紧密连接的铺路石状,跨上皮电阻在培养6 d后大于1000Ω;在细胞膜完整的条件下,流感病毒能降低囊性纤维化跨膜转导调节因子短路电流至(52.77±10.30)％,在基底膜通透的细胞单层中,流感病毒能降低囊性纤维化跨膜转导调节因子短路电流至(41.50±1.09)％,而囊性纤维跨膜转导调节因子在调节呼吸道水盐转运平衡中有重要作用.结论 气液交界面模式培养小鼠气管上皮细胞非常高效,并且接近小鼠正常的生理状态;流感病毒可能通过抑制囊性纤维化跨膜转导调节因子的功能,阻滞阴离子分泌,进而诱发慢性阻塞性肺病以及哮喘等肺部相关性疾病.
关键词： 流感病毒 小鼠气管上皮细胞 囊性纤维化跨膜转导调节因子 短路电流 -
CFTR在雌激素诱导破骨细胞凋亡中的作用机制研究
目的 探讨囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)在雌激素诱导破骨细胞凋亡中的可能作用机制.方法 用不同浓度雌激素作用体外培养的人破骨细胞,采用Western Blot法检测不同时间点(6、12、24 h)CFTR蛋白水平表达变化,获得合适浓度及佳作用时间.在合适浓度雌激素刺激下加入CFTR抑制剂下调CFTR的表达,用流式技术检测其对破骨细胞凋亡的影响.通过雌激素、雌激素受体阻滞剂处理破骨细胞,采用Western Blot法检测雌激素受体ERα、ERβ、CFTR及凋亡相关蛋白Fas/FasL的表达水平.结果 当1×10-7 mol/L雌激素作用24 h时CFTR的表达水平较其他浓度及其他时间点高,加入CFTR抑制剂后可显著下调CFTR的表达水平.加入雌激素后,破骨细胞的凋亡率显著升高,加入抑制剂后,可以逆转凋亡率升高.加入雌激素后,雌激素受体ERα和ERβ的表达水平升高,而且促进CFTR的表达;加入ER阻滞剂后,逆转了雌激素对其受体及CFTR的高表达.加入雌激素诱导后,FasL及Fas蛋白的表达水平升高,加入ER阻滞剂可以逆转雌激素诱导的凋亡相关蛋白表达水平升高.结论 雌激素通过雌激素受体上调CFTR的表达进而诱导破骨细胞凋亡.
关键词： 囊性纤维化跨膜转导调节因子 雌激素 破骨细胞 细胞凋亡 -
囊性纤维化跨膜转导调节因子在子宫内膜中表达的变化及其意义
目的探讨囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)在人月经周期子宫内膜中表达的变化及其意义.方法采用免疫组化、免疫印迹、原位杂交方法检测人月经周期子宫内膜中CFTR的蛋白及mRNA的分布与含量变化.结果 (1)CFTR仅在子宫内膜腺上皮细胞中表达,增生期晚期、分泌期、月经期内膜腺上皮细胞中均富含CFTR,与增生期早期相比,差异有显著性(P<0.05);免疫印迹法证实,增生期晚期、分泌期内膜存在特异性的、相对分子质量为170 000的CFTR条带;(2)CFTR mRNA在增生期晚期和分泌期早期子宫内膜中含量高,与增生期早期、分泌期晚期相比,差异有显著性(P<0.05).结论人月经周期子宫内膜腺上皮细胞中存在CFTR mRNA和蛋白的表达,含量均随月经周期而变化;增生期晚期CFTR表达的增强.分泌期CFTR的表达及局部调节可能参与人类胚泡着床的调控.
关键词： 囊性纤维化跨膜转导调节因子 子宫内膜 氯化物通道 -
针刺对急性心肌缺血大鼠心肌组织氯离子通道调控蛋白CFTR、ClC-2表达的影响
目的 观察循经取穴针刺对急性心肌缺血大鼠心肌组织氯离子(Cl-)通道囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)、ClC-2型氯通道(ClC-2)蛋白表达的影响,探讨经穴效应循经特异性机制.方法 60只SD大鼠随机分为5组:空白组、模型组、内关组、列缺组和非经非穴组.除空白组外,其余4组大鼠均采用多点皮下注射异丙肾上腺素(ISO)方法建立急性心肌缺血模型.造模成功后,内关组、列缺组、非经非穴组大鼠分别电针双侧内关穴、列缺穴、非经非穴(取天枢穴与神阙穴的连线中点),每日1次,连续7d.采用HE染色法物镜下观察各组大鼠心脏组织结构变化,试剂盒方法检测大鼠心肌组织肌酸激酶,同工酶(CK-MB)含量,ELISA法检测大鼠血清丙二醛(MDA)含量,Western blot免疫印迹法检测大鼠心肌组织氯离子通道CFTR、ClC-2的蛋白表达.结果 心肌组织HE染色切片观察显示:模型组、列缺组和非经非穴组心肌细胞心肌纤维断裂、排列紊乱,肌浆肿胀,明显炎症细胞浸润,有许多棕褐色颗粒广泛分布在细胞核中;与模型组比较,内关组则有明显改善.与空白组比较,模型组,列缺组,非经非穴组氯离子通道CFTR和ClC-2蛋白表达显著增多(P＜0.01),CK-MB含量显著升高(P＜0.01),血清MDA含量升高(P＜0.05);与模型组比较,内关组大鼠心肌组织CK-MB含量降低(P＜0.05),血清MDA含量降低(P＜0.05),氯离子通道CFTR、ClC-2蛋白表达显著减弱(P＜0.01).结论 循经针刺内关穴能有效的减轻大鼠心肌缺血引起的病理变化,调节心肌组织氯离子通道CFTR、ClC-2的蛋白表达可能是其作用机制之一.
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囊性纤维化跨膜转导调节因子的生物学特性及对生殖功能的影响
广泛分布于各个系统的囊性纤维化跨膜转导因子,有着重要的生理功能.其突变引起的囊性纤维化除了引起其他系统的症状,对人类生殖系统也产生重要影响:在男性导致遗传性不育,在女性导致生育率下降.但其机制还有待研究.为探讨囊性纤维化跨膜转导调节因子的生物学特性和突变对生殖功能的影响及其展望进行如下综述.
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天龙咳喘灵抗病毒损伤的机制研究
目的:探讨中药复方制剂天龙咳喘灵提取物抗病毒损伤的可能机制.方法:运用短路电流技术、酶联免疫分析法和免疫荧光染色技术来研究天龙咳喘灵提取物对禽流感病毒膜蛋白血凝素(HA蛋白)所造成的气道损伤的恢复作用.结果:HA蛋白预处理能明显降低小鼠气道的基础分泌以及气道上皮细胞中cAMP的浓度,而天龙咳喘灵提取物的干预能在一定程度上使之得以恢复.另外,免疫荧光染色结果发现天龙咳喘灵提取物与HA蛋白共孵育能显著抑制NF-kB的入核.结论:天龙咳喘灵提取物能够活化cAMP依赖的囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR通道),从而达到其抗病毒损伤的作用.
关键词： 天龙咳喘灵 气道上皮 囊性纤维化跨膜转导调节因子 -
SCNN1G基因和IL1B基因多态性与汉族男性先天性双侧输精管缺如的相关性研究
目的：研究非电压门控钠离子通道基因SCNN1G以及IL1B基因与先天性双侧输精管缺如（CBAVD）间的关系。方法通过直接测序和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RELP）方法检测基因多态性位点rs5735（SCNN1G基因）和rs3917356（IL1B基因）在109例病例和103例对照人群中的基因型频率的分布。结果两个单核苷酸多态性（SNP）位点在病例-对照组中的等位基因、基因型频率分布差异无显著性（P=0.2410, P=0.1701 rs5735；P=0.5564, P=0.0959 rs3917356）结论 SCNN1G基因（rs5735）、IL1B基因（rs3917356）均未发现与CBAVD之间存在明显的关联性。
关键词： 输精管/畸形 囊性纤维化跨膜转导调节因子 基因 -
不同年龄不孕患者卵泡液中CFTR水平与卵子及胚胎发育结局的关系
目的 探讨囊性纤维化跨膜转导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)在不同年龄不孕患者卵泡液中表达的变化与卵子及胚胎发育结局的相关性.方法 采用全自动电化学发光仪测定血清中卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH),黄体生成素(luteotropic hormone,LH),雌二醇(estradiol,E2),孕激素(progesterone,P)水平;采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定卵泡液中CFTR的浓度;收集取卵日卵丘颗粒细胞,采用间接免疫荧光染色法检测卵丘颗粒细胞上CFTR蛋白的定位及表达;Real-time PCR测定卵丘颗粒细胞CFTR mRNA的表达.结果 CFTR在不同年龄段不孕患者卵泡液中均有表达,不同年龄段患者卵泡液中CFTR浓度差异有统计学意义(P＜0.05),卵泡液中CFTR水平与年龄呈明显正相关(r=0.497,P＜0.05).不同年龄组胚胎培养结局中获卵数和优质胚胎率与卵泡液中CFTR含量呈反比.不同年龄组胚胎培养结局中2PN形成率与卵泡液中CFTR含量呈正比.免疫荧光染色表明颗粒细胞胞浆和胞膜上均有CFTR蛋白的表达.不同年龄患者的卵丘颗粒细胞上均有一定量的CFTR mRNA表达;不同年龄患者卵丘颗粒细胞中CFTR mRNA表达与年龄呈正相关(r=0.440).不同年龄可用胚胎率与CFTR rnRNA表达量呈反比趋势.结论 CFTR可能参与人卵泡正常生长的调控,与不孕患者年龄有密切的相关性,直接影响获卵数、2PN形成率、优质胚胎率等卵子及胚胎的发育结局,CFTR有可能作为预测体外受精患者卵子及胚胎发育结局的一种无创、定量的标记分子.
关键词： 囊性纤维化跨膜转导调节因子 卵泡液 年龄 胚胎发育 -
囊性纤维化跨膜转导调节因子表达率与人精子受精能力的关系
目的:研究人精子囊性纤维化跨膜转导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conduc-tance regulator,CFTR)表达率与精子受精能力间的关系.方法:运用间接免疫荧光法及蛋白印迹分析法研究CFTR在人精子上的表达及其在不同类型(生育组、不明原因性不育组及不育组)精子上的表达率情况.结果:通过间接免疫荧光法发现CFTR表达在人精子赤道板上,蛋白印迹分析进一步证实人精子中存在CFTR,分子量为170 kD;采用间接免疫荧光技术,CFTR在生育组、不明原因性不育组及不育组(包括畸形精子症、弱精症、少精症)上的表达率有显著差异:CFTR在生育组精子上的表达率(88.13%±3.79%) 远高于不明原因性不育组(52.93%±15.36%)及不育组(35.89%±20.41%)( P<0.01).结论:CFTR表达率下降与人精子受精能力降低有关.
关键词： 囊性纤维化跨膜转导调节因子 表达率 人精子 受精能力 -
CFTR在超排卵幼龄大鼠卵巢的分布与表达
目的 探讨囊性纤维化跨膜转导调节器(CFTR)在超排卵幼龄大鼠各期卵泡和黄体中表达的变化及其意义.方法 采用免疫组化和免疫印迹方法检测超排卵幼龄Wistar大鼠注射HCG前,注射HCG后24h、48h及72h卵巢中CFTR的蛋白分布与含量变化.结果 CFTR在超排卵幼龄Wistar大鼠的各级卵泡颗粒细胞、黄体细胞均有表达,随着黄体期延长其表达量逐渐下降,各时段卵巢表达量比较有显著性差异.免疫印记法证实各时段卵巢中均存在特异性的、相对分子质量为170KD的CFTR条带.结论 卵泡期CFTR表达可能促进卵泡中卵泡液的积聚,卵泡直径增大,利于卵泡成熟;而黄体期CFTR表达下降则可能利于黄体形成,CFTR过多表达可能导致卵泡囊肿和黄体囊肿.
关键词： 囊性纤维化跨膜转导调节因子 卵巢 氯离子通道 大鼠 -
高同型半胱氨酸血症通过内质网应激抑制ApoE敲除鼠肾脏CFTR的表达
目的 探讨高同型半胱氨酸血症通过内质网应激抑制裁脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)鼠肾脏囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)的表达.方法 实验分组:正常对照组(n=6):选择健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J),饲以正常饮食.另选5周龄雄性纯合子ApoE-/-鼠(SPF级近交系c57BL/6)18只,随机分为3组,每组6只:ApoE-/-对照组、高蛋氨酸组、干预组,分别给予正常饮食、高蛋氨酸饮食、高蛋氨酸饮食加0.006％叶酸及0.0004％维生素B12.喂养14周后眼球取血,分离血清,用酶联免疫吸附法检测血清同型半胱氨酸水平;实时定量荧光PCR检测小鼠肾脏CFTR、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、活化转录因子6(ATF6)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、C/EPB同源蛋白(CHOP) mRNA的表达以及免疫组织化学法检测小鼠肾脏CFTR蛋白的表达.结果 ApoE-/-对照组、高蛋氨酸组及干预组中血清同型半胱氨酸水平均增加,其中以高蛋氨酸组增加显著(P＜0.01).实时定量荧光PCR结果显示,高蛋氨酸组CFTR mRNA的表达较正常对照组和ApoE-/-对照组显著降低(P＜0.01,P＜0.05),干预组CFTR mRNA的表达较高蛋氨酸组显著增加(P＜0.01);免疫组织化学法检测CFTR蛋白的表达与其mRNA的表达变化一致.高蛋氨酸组GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA的表达较正常对照组和ApoE-/-对照组显著增加(P＜0.01),干预组GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA的表达较高蛋氨酸组显著降低(P＜0.01).小鼠肾脏GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA表达与CFTR mRNA表达的相关系数分别为:r=-0.7192,P ＜0.01;r=-0.5501,P＜0.01;r=-0.7772,P＜0.01;r=-0.6785,P＜0.01.结论 高同型半胱氨酸血症可能通过内质网应激抑制ApoE敲除鼠肾脏CFTR的表达.
关键词： 高同型半胱氨酸血症 内质网应激 囊性纤维化跨膜转导调节因子 -
CFTR抑制ApoE－／－鼠高同型半胱氨酸血症诱导的肝损伤
目的：探讨囊性纤维化跨膜转导调节因子（CFTR）在高同型半胱氨酸血症（HHcy）致 ApoE－／－鼠肝损伤中的作用。方法：5周龄雄性 ApoE－／－鼠36只随机分为模型对照组、模型组和治疗组，分别给予普通、高蛋氨酸、高蛋氨酸加叶酸饮食，C57BL／6J 雄鼠12只，普通饮食，为正常对照组。检测小鼠血清 Hcy、ALT和AST 变化，Hcy（100μmol／L）及100 Hcy ＋ F （100μmol／L Hcy ＋叶酸）干预肝细胞后，检测肝组织和细胞内 CFTR mRNA 和蛋白水平，分析 CFTR 激动剂（VX-770）与抑制剂[CFTR（inh）-17]干预细胞后对CFTR 表达及 ALT 和 AST 含量的影响。结果：模型组 ApoE－／－鼠血清 Hcy、ALT 和 AST 显著升高， CFTR表达下降（P ＜0．05），而治疗组可拮抗 Hcy、ALT、AST、CFTR 的改变（P ＜0．05）；Hcy （100μmol／L）引起肝细胞 CFTR 表达降低而 ALT 和 AST 升高（P ＜0．05），叶酸对这一改变起缓解作用。 VX-770和 CFTR （inh）-17干预后可改变肝细胞内ALT 和AST 含量。结论： CFTR 通过调控 ALT 和 AST 抑制 HHcy 致肝细胞损伤过程。
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囊性纤维化跨膜转导调节因子在支气管肺发育不良发病中的作用初探
目的 探讨囊性纤维化跨膜转导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductanceregulator,CFTR)在支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)发病中的作用.方法 以新生大鼠高氧肺损伤为BPD模型(吸入氧浓度＞90％),将新生大鼠分为对照组(吸入空气)、单纯模型组、激动剂组和抑制剂组,于生后24、48、72 h分别腹腔注入50μl的磷酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、染料木黄酮(CFTR激动剂)[50 mg/(kg·次)]和花生四烯酸(CFTR抑制剂)[500 mg/(kg·次)].观察大鼠存活率,绘制生存曲线;对照组和单纯模型组于生后3d、14d及21d,激动剂组和抑制剂组于生后14 d及21d,取肺组织行苏木精-伊红染色,观察肺组织病理变化,比较单纯模型组、激动剂组和抑制剂组急性肺损伤评分;采用蛋白质免疫印迹法观察前述各时间点CFTR蛋白表达,Graphpad软件分析灰度值变化.结果 (1)生存情况:对照组、单纯模型组、激动剂组和抑制剂组新生大鼠存活率分别为96.8％、93.3％、100％和34.5％.抑制剂组存活率明显低于其他3组,差异有统计学意义(P＜0.001).(2)肺组织病理变化:对照组大鼠随日龄增加,肺泡发育逐渐完善.单纯模型组肺血管充血、肺泡出血、肺泡壁增厚和炎性细胞浸润,部分组织肺泡腔扩大、数量减少;随着日龄增加,炎症反应逐渐减轻,但部分组织肺泡腔明显扩大、数量明显减少.激动剂组和抑制剂组肺组织病理变化与单纯模型组类似,14d、21 d时3组急性肺损伤评分差异无统计学意义(P＞0.05).(3)肺组织CFTR表达:生后3d时单纯模型组明显低于对照组(P＜0.01);生后14d时单纯模型组与对照组差异无统计学意义(P＞0.05),激动剂组明显高于单纯模型组(P＜0.01),抑制剂组高于单纯模型组(P＜0.05);生后21d时单纯模型组明显低于对照组(P＜0.01),激动剂组高于单纯模型组(P＜0.05),抑制剂组与单纯模型组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CFTR在BPD发病中可能起保护作用.
关键词： 支气管肺发育不良 囊性纤维化跨膜转导调节因子 激动剂 抑制剂 大鼠 -
囊性纤维化跨膜转导调节因子与男性不育
囊性纤维化是一种常染色体隐性遗传疾病,由于囊性纤维化跨膜转导调节因子突变所致,该因子是一种环磷酸腺苷(c-AMP)调控的阴离子通道蛋白.囊性纤维化是一种累及全身的系统性疾病,主要累及呼吸系统、内分泌系统、消化系统,免疫系统、皮肤和泌尿生殖系统.在生殖系统中,本病突出表现为不育症,有超过96%的患者表现为先天性双侧输精管缺如.近更多的研究表明囊性纤维化跨膜转导调节因子的突变不仅可以导致输精管发育缺陷,还可能影响精子发生及其功能等多个环节,降低患者的生育力.
关键词： 先天性双侧输精管缺如 囊性纤维化 囊性纤维化跨膜转导调节因子 不育症
