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β-肾上腺素能激动剂对大鼠肺泡液体的清除效应
目的 探讨β-肾上腺素能激动剂对肺泡上皮主动清除液体的效应及相关机制.方法 48只清洁级雄性SD大鼠随机数字法分成6个组[正常对照组、多巴酚丁胺组、阿米洛利(特异性钠通道阻滞剂)组、多巴酚丁胺+阿米洛利组、多巴酚丁胺+阿替洛尔(高度选择性(1-肾上腺素能阻滞剂)组、多巴酚丁胺+ICI 118,551(高度选择性(2-肾上腺素能阻滞剂)组].单核素示踪技术测定肺泡液体清除率(AFC).逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织肺泡上皮钠通道(α、β、γ-rENaC)mRNA表达.结果 (1)β2-肾上腺素能受体效应显著增加AFC:多巴酚丁胺组、多巴酚丁胺+阿替洛尔组AFC分别为(26.6±1.6)%和(25.0±4.8)%,显著高于正常对照组[(21.0±3.9)%]和多巴酚丁胺+ICI 118,551组[(21.0±4.8)%](P＜0.05).多巴酚丁胺组AFC与多巴酚丁胺+阿替洛尔组比较,差异无统计学意义(P＜0.05);正常对照组AFC与多巴酚丁胺+ICI118,551组比较,差异无统计学意义(P＜0.05).(2)阿米洛利敏感钠通道显著影响肺泡液体清除:阿米洛利组AFC为(6.0±2.8)%,显著低于正常对照组(P＜0.05).(3)多巴酚丁胺通过非阿米洛利敏感钠通道途径增加肺泡液体清除:多巴酚丁胺+阿米洛利组AFC为(10.0±2.3)%,显著高于阿米洛利组(P＜0.05).(4)多巴酚丁胺上调γ-rENaC表达:多巴酚丁胺组、多巴酚丁胺+阿替洛尔组的γ-rENaC mRNA表达分别为(0.90±0.19)和(0.90±0.09),显著高于正常对照组(0.69±0.09)和多巴酚丁胺+ICI 118,551组(0.68±0.06)(P均＜0.05).多巴酚丁胺组γ-rENaC mRNA表达与多巴酚丁胺+阿替洛尔组比较,差异无统计学意义(P＜0.05);正常对照组γ-rENaC mRNA表达与多巴酚丁胺+ICI 118,551组比较,差异无统计学意义(P＜0.05).各组间α、γ-rENaC mRNA表达比较,差异无统计学意义(P均＜0.05).(5)阿米洛利抑制多巴酚丁胺上调γ-rENaC表达:多巴酚丁胺+阿米洛利组γ-rENaC mRNA表达为(0.70±0.14),显著低于多巴酚丁胺组和多巴酚丁胺+阿替洛尔组(P均＜0.05).结论 β2-肾上腺素能激动效应增加肺泡液体清除,其机制除与上调肺泡上皮β-rENaC表达有关外,还可能与刺激非阿米洛利敏感钠通道途径有关.
关键词： β-肾上腺素能激动剂 肺泡液体清除 钠通道 大鼠 -
肺泡液体主动转运及肺水通道的实验研究
目的研究肺水通道蛋白1，4(AQP1，4)对肺泡毛细血管间水通透性和压力性肺水肿的影响，肺泡液体主动转运对肺泡液体清除(AFC)的影响，以及不同pH条件下大鼠AFC的变化。方法采用表面荧光技术和重力方法研究小鼠肺泡毛细血管间水通透性及水通道蛋白与压力性肺水肿的关系；测定大鼠肺泡灌注液中同位素标记白蛋白浓度推测AFC变化。应用低pH溶液灌注大鼠肺诱发肺损伤，并测定不同pH条件下AFC变化。结果 AQP1敲除可减轻小鼠肺泡毛细血管间水通透性和压力性肺水肿的程度。沙丁胺醇可促进AFC，合用心得安可抑制其作用。当大鼠肺泡灌注液pH>2.5时，间羟叔丁肾上腺素、异丙肾上腺素、沙美特罗均可促进AFC，Na通道抑制剂Benzamil可抑制AFC。结论 AQP1敲除明显降低小鼠肺泡毛细血管间水通透性，轻度减轻压力性肺水肿。β肾上腺能激动剂促进机械通气大鼠AFC。AFC的前提是完整肺泡上皮的存在，当pH低于2.5时，促进AFC的作用被肺损伤作用掩盖。
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急性肺损伤时大鼠肺泡液体清除率的变化
目的制备盐酸吸入性急性肺损伤动物模型,测定其肺泡液体清除率.方法 32只大鼠随机分为4组,对照组滴入pH为7.4的5%等渗白蛋白溶液,酸吸入组分别滴注pH为7.0、4.5、2.5的5%等渗白蛋白溶液,机械通气1 h后,测定其动脉血气、肺泡上皮屏障的通透性、肺泡液体清除率.结果当滴注液pH值为7.0时,其肺泡上皮对蛋白的通透性和对液体的清除率与对照组接近,动脉血氧分压无下降(P>0.05);pH值为4.5、2.5时,其肺泡上皮对蛋白的通透性和对液体清除率较对照组及pH 7.0组低,动脉血氧分压明显下降(P<0.05).结论肺泡上皮对酸损伤有一定的抵抗能力,高浓度盐酸溶液可损伤肺泡上皮和肺泡上皮屏障,使肺泡内液体不能及时清除,形成肺水肿.
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吸入一氧化氮治疗对内毒素所致急性肺损伤肺泡液体清除影响的实验研究
目的 观察吸入不同浓度一氧化氮(NO)对急性肺损伤(ALI)时肺水肿形成、肺泡液体清除和渗出的影响,并探讨其治疗机制,为临床选择吸入NO(iNO)治疗ALI及其治疗方式提供理论依据.方法 健康雄性新西兰大耳白兔18只,建立内毒素脂多糖(LPS)所致肺损伤模型(0 h).将动物随机均分成3组:①机械通气(MV)组:行容积控制通气(VCV),潮气量(VT)15 ml/kg,呼气末正压(PEEP)5 cm H2O(1 cm H2O=0.098 kPa),通气频率40次/min;②高iNO(HNO)组:在MV组治疗基础上给予40×10-6 NO吸入;③低iNO(LNO)组:在MV组基础上加10×10-6 NO吸入.检测通气后不同时间点各组大鼠血流动力学、血气分析、呼吸力学等指标.通气4 h后放血处死动物,计算肺湿/干重(W/D)比值,并观察肺泡液体渗出情况.结果 ①治疗后0.5 h,HNO组和LNO组的氧合指数(PaO2/FiO2)显著高于MV组,并维持到实验结束(P均＜0.05).②治疗后0.5、2和4 h,LNO组气道峰压(Ppeak)和平台压(Pplat)较MV组下降(P＜0.05或P＜0.01);HNO组4 h时的Ppeak、2 h和4 h的Pplat低于MV组(P＜0.05或P＜0.01);LNO组2 h和4 h时的Pplat明显低于HNO组(P均＜0.01).③HNO组和LNO组肺泡液体渗出少于MV组(F=22.756,P＜0.01),肺泡液体清除多于MV组(F=3.965,P＜0.05),肺组织W/D比值MV组＞HNO组＞LNO组(F=11.740,P＜0.01).④HNO组和LNO组的肺损伤评分好于MV组,但差异无统计学意义.结论 ALI早期iNO治疗可显著促进肺泡液体清除、改善肺泡液体渗出、减轻肺水肿、改善氧合和降低气道压,相对较低浓度(10×10-6)吸入治疗可能更有益.
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血管紧张素Ⅱ对大鼠肺泡上皮钠通道表达的影响
目的 探讨外源性血管紧张索Ⅱ (Ang Ⅱ)对大鼠肺泡液体清除及肺泡上皮钠通道(ENaC)表达的影响。方法 按随机数字表法将15只SD大鼠分为对照组、Ang Ⅱ组及Ang Ⅱ 1型受体阻滞剂ZD7155干预组，每组5只。Ang Ⅱ组和ZD7155干预组大鼠经左侧颈静脉置管后，微量泵持续泵入外源性Ang Ⅱ10 μg．kg-1．min-1；对照组泵入等量生理盐水。ZD7155干预组于泵入Ang Ⅱ前30 min经腹腔注射10 mg/kg ZD7155。6h后观察肺组织病理学改变；用伊文思蓝标记5％白蛋白法测定离体肺组织肺泡液体清除率(AFC)；用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定ENaC mRNA表达，用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定ENaC蛋白表达。结果 Ang Ⅱ组AFC较对照组显著降低[（6.16±3.01）％比(16.10±3.46)％，P＜0.01]，ZD7155干预组AFC较Ang Ⅱ组显著升高[（10.60±2.05）％比(6.16±3.01)％，P＜0.05]。Ang Ⅱ组α-ENaC mRNA表达较对照组显著升高（0.663±0.068比0.236±0.030，P＜0.01），ZD7155干预组α-ENaC mRNA表达较Ang Ⅱ组显著降低（0.386±0.061比0.663±0.068，P＜0.01）；β-ENaC及γ-ENaC的mRNA表达无明显差异。与对照组比较，Ang Ⅱ组α-ENaC蛋白表达显著增加(0.343±0.053比0.145±0.030，P＜0.01)，β-ENaC和γ-ENaC的蛋白表达显著降低（0.286±0.038比0.512±0.055，0.144±0.040比0.460±0.066，均P＜0.01）；与Ang Ⅱ组比较，ZD7155干预组α-ENaC蛋白表达显著降低(0.228±0.045比0.343±0.053，P＜0.01)，β-ENaC和γ-ENaC的蛋白表达显著升高(0.358±0.043比0.286±0.038，0.220±0.033比0.144±0.040，均P＜0.05)。结论 外源性Ang Ⅱ通过其1型受体途径调节ENaC基因及蛋白表达，减弱大鼠肺泡液体清除，加重肺水肿。
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急性肺损伤肺泡上皮钠水通道肺泡液体清除与丝裂原活化蛋白激酶信号转导
急性肺损伤肺泡上皮钠通道、Na~+-K~+-ATP酶、肺水通道主动转运系统在肺泡液体清除中起主要作用;肺泡上皮钠水主动转运机制与丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径密切相关.
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肺泡上皮细胞损伤及修复对急性肺损伤预后的影响
ALI/ARDS是由弥漫性肺损伤,肺泡上皮与微血管内皮屏障的广泛破坏,使肺泡与间质内聚积大量富含蛋白的水肿液.因此有效的肺泡上皮修复至关重要.研究上皮细胞损伤及修复机制对研发ALI的有效治疗策略至关重要.
关键词： 急性肺损伤 肺泡上皮细胞损伤及修复 肺泡液体清除 -
间充质干细胞条件培养基对肺泡上皮液体清除能力的影响
目的 探讨小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)条件培养基对小鼠肺泡液体清除的影响和对人肺泡上皮细胞生存能力的作用,并明确小鼠BMSCs条件培养基在肺脏液体清除中的作用机制.方法 细胞贴壁法分离培养小鼠BMSCs,应用流式细胞术对小鼠BMSCs的表面标记物进行鉴定;运用酶标仪测定小牛血清白蛋白浓度的方法测定小鼠在体肺泡液体清除率;利用活细胞计数盒(CCK-8)试剂研究小鼠BMSCs条件培养基对人H441肺泡上皮细胞生存能力的影响;采用蛋白质印迹法研究小鼠BMSCs条件培养基对人肺泡上皮细胞钠通道蛋白水平的影响.结果 小鼠BMSCs稳定表达CD44,阴性表达CD34;小鼠BMSCs条件培养基能够提升在体小鼠肺泡液体清除率;小鼠BMSCs的条件培养基能够提高人肺泡上皮细胞的生存能力;蛋白质印迹法结果显示小鼠BMSCs条件培养基能够增加人肺泡上皮细胞钠通道的蛋白水平表达.结论 小鼠BMSCs条件培养基能够增强肺泡上皮细胞的液体清除并能改善其生存能力,机制可能与肺泡上皮细胞钠通道蛋白表达的增加有关.
关键词： 小鼠骨髓间充质干细胞 肺泡液体清除 肺泡上皮细胞 钠通道 -
甲状腺功能在ALI/ARDS患者肺泡液体清除中作用的临床观察
目的 观察甲状腺功能在ALI/ARDS患者肺泡液体清除中的作用及其对患者预后的影响.方法 分别测定8例ALI/ARDS、8例冠心病患者及8例正常对照健康成人血清中T3、FT3、T4、FT4、TSH水平和相对应的血气分析指标.结果 ALI/ARDS与冠心病患者血中甲状腺素水平明显降低,而前者降低更加明显.结论 重症患者血清T3、T4水平明显下降,且与ALI和/或ARDS疾病肺泡液体清除的严重程度可能成负相关.
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精氨酸抗利尿激素对急性肺损伤大鼠肺水肿液的清除作用
目的 探讨精氨酸抗利尿激素(AVP)对急性肺损伤肺水肿液清除作用.方法 48只健康成年的雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组(ALI组)、AVP组,观察各组肺组织病理形态学、肺水含量、肺泡上皮通透性及肺泡液体清除率(AFC)变化,测定肺泡上皮钠通道(ENaC)和钠/钾ATP酶(Na+,K+-ATPase)表达情况.结果 经AVP治疗后,模型组肺泡上皮通透性(0.27±0.15vs0.59±0.19)及肺水含量(5.01±1.59vs8.67±1.79)减轻,AFC增加(23.56±4.51vs8.28±3.57),α-ENaC(1.296±0.322vs0.349±0.141)和α1-Na+,K+-ATPase表达增加(1.421±0.389vs0.338±0.186),均有显著差异(P＜0.05).结论 AVP能促进AFC,其作用途径可能是上调α-ENaC和α1-Na+,K+-ATPase通道蛋白实现的.
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AngⅡ及其受体阻滞剂对急性肺损伤大鼠肺泡液体清除的影响
目的 探讨内源性血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其1型(AT1)受体阻滞剂对脂多糖诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺泡液体清除的效应.方法 25只SD大鼠分为空白对照组、ALI组及ALI+ZD7155(AT1受体阻滞剂)组.ALI组又按作用时间分为2、4、6h3个亚组.10 mg/kg脂多糖(LPS)腹腔注射诱导ALI大鼠模型.10 mg/kg ZD7155于LPS注射前30 min经腹腔注射.每组或亚组各5只大鼠.观察肺组织病理学改变、肺湿质量/干质量(W/D)比值,ELISA测定血浆及肺组织中AngⅡ水平的变化.在肺泡液体清除(AFC)测定中,活杀25只SD大鼠取肺组织,分为空白对照组、阿米洛利组、ALI组、ALI+ ZD7155组、ALI+ ZD7155+阿米洛利组.每组各5只大鼠肺.伊文思蓝(evans-blue)标记5％清蛋白法测定AFC.结果 ALI 4 h组肺组织W/D较空白对照组显著增加(P＜0.01),ZD7155干预后肺组织W/D较ALI 4 h组显著降低(P＜0.05).随LPS作用时间增加,ALI大鼠模型血浆及肺组织内AngⅡ浓度变化呈现时间依赖性逐渐升高,各时间点组间差异有统计学意义(P＜0.05).阿米洛利组与ALI 4 h模型组AFC均较空白对照组显著降低(P＜0.01),ALI 4 h组AFC高于阿米洛利组(P＜0.05);ALI+ZD7155组AFC高于ALI 4 h组(P＜0.05),但ALI+ZD7155+阿米洛利组AFC降低,与阿米洛利组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AngⅡ减弱ALI大鼠AFC;其AT1受体阻滞剂可逆转此病理生理过程.
