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骨关节炎患者线粒体转录因子A表达与线粒体DNA拷贝数关系的研究
目的：研究膝关节骨关节炎患者与正常人外周血及关节软骨细胞中的线粒体转录因子A（ TFAM）表达和线粒体DNA拷贝数的关系，探讨其相关性。方法选择20例的膝关节骨关节炎患者为骨关节炎组，以正常关节软骨患者20例为对照组。各收集其外周血及关节软骨细胞，逆转录-聚合酶链反应（ RT -PCR ）及实时荧光 PCR（ SYBR GREEN I染料法）检测外周血及软骨组织中TFAM mRNA的表达水平和软骨细胞线粒体DNA拷贝数。结果骨关节炎组外周血和软骨细胞TFAM mRNA的表达量均低于正常组患者（ P <0.05），且二者表达量呈正相关（ P <0.01）；骨关节炎组线粒体DNA的平均拷贝数均于正常组患者软骨细胞（ P <0.01），且与软骨细胞TFAM mRNA的表达量呈正相关（ P <0.01）。结论 TFAM通过增加其线粒体DNA拷贝数，这将可以对骨关节炎的病因提出新的解释和补充，可能为骨关节炎的检测和治疗提供新的途径。
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线粒体DNA拷贝数的研究新进展
线粒体DNA拷贝数是线粒体DNA在线粒体基因组中的个数，目前存在几种线粒体DNA拷贝数调控模式假说。线粒体DNA拷贝数受线粒体转录因子A、同源重组修复蛋白Rad51、DNA聚合酶γ等的调控。氧化应激对线粒体DNA拷贝数的影响与其对线粒体DNA的损伤程度有关，呈双向调节作用。近年来研究发现，线粒体DNA拷贝数变化与骨质疏松、糖尿病、心血管疾病、肿瘤等多种疾病的发生、发展有一定的相关性，且在不同疾病或疾病发展的不同阶段变化不同。
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C型钠肽预处理小鼠卵母细胞后的胚胎发育能力
背景:C型钠肽作为生理抑制剂可抑制小鼠卵母细胞的减数分裂,但其是否对所获得胚胎的发育能力具有促进作用尚不完全明确.目的:研究C型钠肽预处理对小鼠胚胎质量的影响.方法:利用C型钠肽预处理小鼠卵母细胞8 h后,再进行体外成熟24 h,将成熟后的卵母细胞体外受精,获得体外胚胎(实验组),以小鼠卵母细胞常规体外成熟培养24 h后所获得的胚胎为对照组.实验方案中有关动物伦理问题已经得到乌兰察布医学高等专科学校动物实验伦理委员会的批准,伦理批号:WYZLL[2016]1601.结果与结论:实验组平均囊胚细胞数明显高于对照组平均囊胚细胞数(P<0.05);2组的线粒体DNA拷贝数均随胚胎发育逐渐增加,且实验组增长速度较对照组快(P<0.05);实验组的活性氧水平显著低于对照组(P<0.05),实验组各胚胎时期胚胎细胞的谷胱甘肽水平显著高于对照组(P<0.05).提示C型钠肽预处理对小鼠胚胎的发育能力有了明显的提高.
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体质性发育迟缓男童邻苯二甲酸酯暴露与线粒体DNA拷贝数及氧化损伤的关联性研究
[目的]采用病例对照研究方法,观察邻苯二甲酸酯暴露对男童线粒体DNA氧化损伤及线粒体DNA拷贝数的影响,探索邻苯二甲酸酯影响男性性发育的可能机制. [方法]将2013-2014年经上海市某三级甲等医院确诊为体质性发育迟缓的8～15岁男童纳入研究,共48例病例,匹配以同一年龄段同一医院就诊于外科的正常男童60例作为对照.采用高效液相色谱-串联质谱法检测病例和对照男童尿液中邻苯二甲酸单丁酯(MnBP)、邻苯二甲酸甲酯(MMP)、邻苯二甲酸乙酯(MEP)邻苯二甲酸(2-乙基已基)单酯(MEHP)、邻苯二甲酸(2-乙基-5羟基己基)单酯(MEHHP)、邻苯二甲酸(2-乙基-5氧己基)单酯(MEOHP)浓度.运用t检验及多元线性回归模型分析邻苯二甲酸酯水平与线粒体DNA氧化损伤、线粒体DNA拷贝数在病例和对照中的差异及两者间的关联. [结果]病例组男童尿液MnBP、MMP、MEHP、SumDEHP浓度显著高于正常对照组(P值分别为0.017、0.008、0.038、0.020).病例组男童线粒体DNA拷贝数高于对照组(P=0.001),两组线粒体DNA氧化损伤水平差异无统计学意义.男童尿液MMP、MEHP、SumDEHP浓度与线粒体DNA拷贝数存在显著正相关(P＜0.05),但未发现线粒体DNA氧化损伤水平与邻苯二甲酸酯暴露水平间显著关联.[结论]体质性发育迟缓男童体内邻苯二甲酸酯暴露水平和线粒体DNA拷贝数显著升高,邻苯二甲酸酯暴露可能是线粒体功能受损的一个危险因素.
关键词： 体质性发育迟缓 邻苯二甲酸酯 线粒体DNA氧化损伤 线粒体DNA拷贝数 -
铅作业工人外周血线粒体DNA拷贝数与血铅水平的关系
[目的]探究铅蓄电池厂工人外周血线粒体DNA拷贝数(mitochondrial DNA copy number,mtDNAcn)与血铅水平(blood lead level,BLL)之间的关系.[方法]招募873名某铅蓄电池厂工人作为研究对象,根据岗位的铅暴露情况,其中193位无铅和其他职业有害因素暴露者,作为对照组;680位仅有铅暴露者,作为暴露组.采用问卷收集铅作业工人的一般情况,血常规检测其血液学参数,采用实时荧光定量PCR检测外周血相对mtDNAcn,并用石墨炉原子吸收光谱法检测BLL.采用广义线性回归、多项式广义线性回归和限制性立方样条回归方法进行统计学分析.[结果]研究对象总人群BLL的中位数(四分位数间距)是218.90 μg/L(180.60 μg/L);对照组为65.50 μg/L(44.20 μg/L),暴露组为251.00 μg/L(141.05 μg/L).对照组红细胞计数、平均红细胞血红蛋白量、平均红细胞血红蛋白浓度和血红蛋白浓度的中位数(四分位数间距)分别是4.71×1012/L(0.77×1012/L)、29.20 pg(2.00 pg)、316.00 g/L(9.00 g/L)和139.00 g/L(26.00 g/L);暴露组红细胞计数、平均红细胞血红蛋白量、平均红细胞血红蛋白浓度和血红蛋白浓度的中位数(四分位数间距)分别是4.83×1012/L(0.74×1012/L)、28.80 pg(2.00 pg)、313.00g/L(10.00g/L)和140.00 g/L(21.00g/L).与对照组相比,暴露组BLL升高(P＜0.01),红细胞计数、平均红细胞血红蛋白含量、平均红细胞血红蛋白浓度和血红蛋白浓度均降低,差异均有统计学意义(均b＜0且P＜0.05);暴露组相对mtDNAcn降低,差异有统计学意义(b=-0.13,P=0.04).在血铅8.90～275.86μg/L范围内随着BLL的上升,mtDNAcn有明显下降趋势(b=-0.0016,P＜0.01);在血铅275.86～647.70 μg/L范围内,mtDNAcn随BLL的上升呈上升的趋势(b=0.0000029,P=0.02).[结论]铅作业工人的BLL可以导致外周血mtDNAcn的变化,提示职业性铅暴露可能导致线粒体损伤和功能异常,mtDNAcn可能可以作为职业性铅暴露的潜在生物标志.
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人线粒体DNA缺失宫颈癌细胞及其转线粒体细胞的建立与初步分析
目的：探讨溴化乙锭（EB）诱导法建立人线粒体DNA（mtDNA）缺失宫颈癌Hela S3细胞，以及再转入线粒体构建融合细胞的可行性，并对转线粒体细胞进行初步分析。方法：采用低剂量（100 ng/mL）EB诱导法建立mtDNA缺失的ρ0 Hela S3细胞，通过普通PCR、荧光定量PCR（qPCR）进行mtDNA缺失鉴定。采用聚乙二醇（PEG）介导细胞融合法，以正常人血小板为mtDNA供体转入ρ0 Hela S3细胞，构建转线粒体细胞（transmitochondrial cybrids），并通过PCR、qPCR和透射电镜观察进行初步分析和鉴定。结果：普通PCR和qPCR结果证实EB诱导法能够成功建立ρ0 Hela S3细胞，同时结合透射电镜证明转线粒体细胞能够恢复线粒体正常结构。结论：采用EB诱导法可成功建立ρ0 Hela S3细胞，且通过细胞融合构建的转线粒体细胞能够恢复mtDNA复制和正常线粒体结构，为研究mtDNA突变与线粒体功能异常相关疾病的关系提供可靠的实验基础。
关键词： 线粒体DNA缺失细胞 转线粒体细胞 线粒体DNA拷贝数 线粒体嵴 -
脑创伤大鼠外周血白细胞线粒体DNA拷贝数与神经功能损伤程度的相关性
目的 探索脑创伤(traumatic brain injury,TBI)后外周血白细胞线粒体DNA拷贝数变化与神经功能损伤程度的相关性.方法 按随机数表法将40只SD大鼠分为4组:对照组(10只)、轻度TBI组(10只)、中度TBI组(10只)、重度TBI组(10只),采用皮质撞击致伤法构建不同损伤程度TBI大鼠模型;TBI后24 h、48 h、72 h进行神经功能评分(mNSS、网屏实验、旷场实验),在每次神经功能评分完成后行眶下静脉丛取血,提取基因组DNA,real-time PCR法测量相对线粒体DNA拷贝数;实验完成后大鼠安乐死,取脑组织做HE染色.结果 脑组织病理HE检测结果实验各组之间均差异有统计学意义(P＜0.05).各组大鼠TBI后外周血线粒体DNA拷贝数在24 h(9.63±3.62)和48 h(9.80±3.58)时升高,在72 h(4.97±2.68)时开始下降(P＜0.05);在大鼠mNSS评分在TBI后24 h(r=0.578,P＜0.05)和48 h(r=0.559,P＜0.05)与线粒体DNA拷贝数均正相关,TBI后72 h(r=0.487,P＞0.05)不相关;网屏实验评分在TBI后24 h(r=0.573,P＜0.05)和48 h(r=0.501,P＜0.05)与线粒体DNA拷贝数均正相关,TBI后72 h(r=0.273,P＞0.05)不相关;旷场实验的水平评分在TBI后24 h(r=-0.662,P＜0.05)和48 h(r=-0.507,P＜0.05)与线粒体DNA拷贝数均负相关,TBI后72 h(r=-0.410,P＞0.05)不相关;旷场实验的垂直评分在TBI后24 h(r=-0.683,P＜0.05)和48 h(r=-0.607,P＜0.05)与线粒体DNA拷贝数均负相关,TBI后72 h不相关(r=-0.141,P＞0.05).结论 TBI早期外周血白细胞线粒体DNA拷贝数与大鼠神经功能损伤程度具有一定相关性,外周血白细胞线粒体DNA拷贝数有可能成为临床评估TBI神经功能损伤程度的一个潜在生物标志物.
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线粒体DNA相关因子与骨质疏松症中医证型的关系研究
【目的】从线粒体DNA （mtDNA）角度探讨骨质疏松症中医证型的生物学特征，以期认识和了解骨质疏松症及其不同中医证型的本质。【方法】选择符合诊断标准的女性骨质疏松症患者210例，根据骨质疏松症的中医辨证分型分为肝肾阴虚证67例，脾肾阳虚证70例，气滞血瘀证73例。同时选择年龄相仿的绝经后非骨质疏松症女性69例作为对照组，该证型为气血平和证。分别收集其外周血，采用荧光定量PCR及酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组mtDNA拷贝数及8－羟基脱氧鸟苷酸（8－OHdG）的含量，并分析各组骨密度与mtDNA拷贝数及8－OHdG的相关性。【结果】在mtDNA拷贝数方面，各组与气血平和组比较，差异均有统计学意义（P＜0．05），肝肾阴虚组、脾肾阳虚组与气滞血瘀组比较，差异均有统计学意义（P＜0．05）。在8－OHdG浓度方面，各组与气血平和组比较，差异均有统计学意义（P＜0．05），肝肾阴虚组、气滞血瘀组与脾肾阳虚组比较，差异均有统计学意义（P＜0．05）。在相关性方面，各组mtDNA拷贝数与骨密度呈正相关，8－OHdG与骨密度呈负相关。【结论】 mtDNA拷贝数和8－OHdG含量与骨质疏松症中医证型存在相关关系，其中脾肾阳虚与8－OHdG，肝肾阴虚与mtDNA拷贝数关系为密切。
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凋亡抑制剂zVAD对脑缺血再灌注小鼠外周血线粒体DNA拷贝数的影响
目的 探讨凋亡抑制剂zVAD对脑缺血再灌注小鼠线粒体DNA拷贝数的影响.方法 80只雄性25～30 g C57BL/6小鼠,随机分为大脑中动脉栓塞(MCAO)模型组(3组共24只)、模型给药组(3组共24只)、假手术组(3组共24只)和对照组(8只).MCAO模型组应用线栓法,构建小鼠大脑中动脉栓塞模型并在1h后进行再灌注,模型给药组在再灌注前腹腔注射10 mmol/L的zVAD 10 mL/kg,假手术组暴露颈内动脉后缝合皮肤,对照组不进行任何操作.分别于再灌注后不同时间点(24、48、72 h),对经手术操作的每组各8只小鼠进行改良神经功能损伤评分(mNSS),评分后取血约200 μL并提取外周血基因组DNA,real-time PCR法检测相对线粒体DNA拷贝数.结果 MCAO模型组和模型给药组术后24、48和72 h的mNSS评分均明显高于相应对照组(P＜0.05),术后48、72 h,模型给药组mNSS评分均明显低于相应MCAO模型组(P＜0.05);术后24、48 h,MCAO模型组和模型给药组线粒体DNA拷贝数均高于对照组或假手术组,模型给药组高于MCAO模型组(P＜0.05);术后72 h,各组的线粒体DNA拷贝数差异无统计学意义(F=1.58,P＞0.05).结论 凋亡抑制剂zVAD对脑缺血再灌注小鼠可起到一定的脑保护作用,这可能由于zVAD抑制了线粒体介导的凋亡通路,并通过端粒—线粒体途径促进了外周血线粒体DNA拷贝数的升高.
关键词： 凋亡抑制剂 脑缺血再灌注 线粒体DNA拷贝数 改良神经功能损伤评分
