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IL-31重组腺病毒载体的构建及鉴定
目的 构建并鉴定人白细胞介素31(IL-31)重组腺病毒Ad-IL-31,为下一步IL-31功能研究奠定基础.方法 以pGEM-T-IL-31为模板扩增IL-31基因,将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,PmeⅠ线性化后与腺病毒骨架质粒共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒质粒pAd-IL-31,经PacⅠ线性化后转染QBI-293A细胞,荧光显微镜下观察细胞内荧光,测定病毒效价,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(western blot)分析细胞内IL-31信使核糖核酸(mRNA)和蛋白质的表达.结果 经双酶切及基因扩增仪鉴定,重组穿梭质粒和重组腺病毒质粒均见500 bp插入片段,测序结果和基因库中的基因序列一致;重组病毒效价为2.6×108 pfu/ml;重组病毒感染后,QBI-293A细胞中有IL-31mRNA和蛋白质表达.结论 成功构建IL-31重组腺病毒载体,并在QBI-293A细胞中表达,为进一步研究IL-31的功能奠定了基础.
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IL-31通过调控TGF-β1/Smad4信号通路促进骨质疏松的机制研究
目的:探讨IL-31在促进骨质疏松过程中的作用及其机制.方法:选取本院2015年1月至2016年12月收治的100例骨质疏松患者为研究对象,并按性别、年龄匹配100例无骨质疏松的健康体检人群作为对照组,检测两组血清IL-31水平差异.构建C57BL/6J基因背景的IL-31敲除小鼠,将C57BL/6J小鼠(野生型小鼠)、IL-31敲除小鼠分别设置假手术(Sham)组和卵巢切除术(OVX)组各15只.手术8周后,检测小鼠血清中血钙、血磷水平和碱性磷酸酶水平(ALP);同时取小鼠的双侧股骨进行病理切片分析股骨组织形态结构、取脊柱进行骨密度仪检测脊柱骨密度变化.分离培养小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)并检测体外增殖能力和TGF-β1、Smad4和p-Smad4蛋白表达.通过IL-31特异性shRNA转染小鼠成骨细胞MC3T3-E1以敲低IL-31的表达,并检测MC3T3-E1细胞增殖、凋亡和蛋白改变.结果:骨质疏松患者血清中IL-31水平显著高于对照组、重度骨质疏松患者的IL-31水平高于轻度骨质疏松患者(P<0.05).接受OVX手术的野生型小鼠、IL-31敲除小鼠血清中血钙和血磷显著高于假手术组,而ALP水平显著低于假手术组(P<0.05),但接受OVX手术的IL-31敲除小鼠组血钙和血磷则显著低于接受OVX手术的野生型小鼠(P<0.05).股骨病理切片及脊柱骨密度结果显示,接受OVX手术的野生型小鼠、IL-31敲除小鼠均出现组织形态结构的破坏和骨密度下降,但IL-31敲除小鼠骨组织结构和骨密度优于野生型小鼠.接受OVX手术的IL-31敲除小鼠BMSCs增殖能力显著高于接受OVX手术的野生型小鼠,而TGF-β1、p-Smad4蛋白水平则显著高于接受OVX手术的野生型小鼠(P<0.05).MC3T3-E1细胞转染IL-31 shRNA后能明显反向激活TGF-β1、p-Smad4表达,促进MC3T3-E1细胞的增殖并抑制凋亡.结论:骨质疏松患者血清IL-31水平显著升高,IL-31可能是通过调控TGF-β1/Smad4信号通路抑制BMSCs增殖、促进成骨细胞的凋亡,从而促进骨质疏松的进展.
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CXCL13、IL-31在原发性肝癌患者血清中的表达及临床意义
目的：检测原发性肝癌（ Primary hepatic carcinoma ，PHC）患者血清CXCL13、IL-31的表达情况，探讨其对原发性肝癌诊断治疗和预后评估的临床价值。方法：收集78例PHC患者和36例健康体检者血清标本，采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测CXCL13、IL-31的表达水平，统计软件分析与临床病理特征和实验室指标的关系，Spearman相关分析检验与肝功能预后指标的相关性，ROC曲线分析CXCL13、IL-31、AFP对PHC的诊断价值。结果：PHC患者血清CXCL13表达明显高于对照组（ P＜0.001），与肿瘤大小、转移、TNM分期密切相关（ P＜0.05），与Child-pugh评分（ Child pugh score ）呈正相关；CXCL13联合AFP的ROC曲线下面积为0.938（ P＜0.05），灵敏度和特异性分别为82.8％、100％，较两种指标单独诊断时明显增高。然而，PHC患者血清IL-31的表达与对照组无显著差异，与临床各项指标均不相关。结论：CXCL13在PHC患者血清中高表达，其表达水平与肿瘤大小、转移、TNM分期密切相关，并未发现IL-31在PHC患者血清中存在表达增高的现象。因此，CXCL13可作为原发性肝癌诊断治疗及预后评估的血清学标志物。
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IL-31单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立
目的:制备抗人IL-31单克隆抗体,建立ELISA检测体系.方法:采用合成免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗IL-31单克隆抗体,用HRP标记单克隆抗体,ELISA和Western blot法检测抗体的亚类、滴度和特异性;采用ELISA技术制备IL-31检测试剂盒,并对自制试剂盒进行评价.结果:获得了两株稳定产生抗IL-31单克隆抗体的杂交瘤细胞,抗体亚类均为IgG3,抗体特异性好,杂交瘤细胞诱生的腹水抗体效价达106.试剂盒检测灵敏度为5.726 pg/ml,检测IL-1、IL-6、TNF-α、RF的P/N值均小于2.1,为阴性,靶抗原IL-31的检测结果为阳性(P/N值=13.76);自制试剂盒检测特应性皮炎血清IL-31水平为(532.83±90.39) pg/ml,对照组血清IL-31水平为(103.31±19.17) pg/ml,皮炎组明显高于对照组,有显著性差异(P ＜0.001).结论:成功制备了抗IL-31单克隆抗体,建立的ELISA试剂盒可用于临床检测IL-31.
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白细胞介素31与特应性皮炎
IL-31是由Th2细胞分泌的一种新型细胞因子,它能结合由IL-31BA和制瘤素M受体(OSMR)组成的异二聚体型Ⅰ类细胞因子受体进行信号传导.IL-31及其受体mRNA水平的高低与不同的组织及刺激条件有关,其生物学活性与皮肤病理及炎性细胞募集有关,在特应性皮炎(AD)的发生和发展中发挥着重要的作用.
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寻常型银屑病患者血清中IL-21、IL-31的表达水平
探讨寻常型银屑病患者血清中IL-21和IL-31的表达水平与银屑病发病的关联.采用双抗体夹心(ELISA)法检测23例寻常型银屑病患者及11例正常人血清中IL-21和IL-31的水平.病例组血清中IL-21和IL-31表达水平高于健康对照组,且进展期组的表达水平高于静止期组,差异均有统计学意义(P＜0.05)；血清中IL-21及IL-31表达水平与PASI评分值有正相关关系(P＜0.05).IL-21、IL-31可能参与介导寻常型银屑病的发病,在银屑病的发病及发展过程中均具有重要的作用.
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IL-31在哮喘患者的表达水平及其与疾病严重程度的相关性研究
目的 探讨IL-31在哮喘患者血清、支气管肺泡灌洗液以及支气管组织的表达水平及其与哮喘严重程度的相关性.方法 应用荧光酶联免疫法和酶联免疫吸附法(ELISA)测定支气管哮喘患者和健康者血清、支气管肺泡灌洗液以及支气管组织IL-5、IL-13、IL-31以及总IgE的表达水平.结果 (1)支气管哮喘患者血清及支气管肺泡灌洗液IL-31的表达水平明显高于健康者,差异具有显著性(P<0.05);(2)重度哮喘患者支气管组织IL-31的表达水平明显高于中度和轻度患者,差异具有显著性(P<0.05);(3)哮喘血清IL-31的表达水平与IL-5、IL-13、总IgE具有显著正相关,相关系数分别为0.457、0.659、0.783;与第一秒用力呼吸容量(FEV1)具有显著负相关(r=-0.983,P=0.012);与外周血嗜酸性粒细胞百分比无显著相关性(r=0.756,P=0.087).结论 哮喘患者不同组织的IL-31表达水平能够反映疾病的严重程度,可作为临床监测哮喘的生物指标.
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IL-31在结核性胸腔积液中的表达情况及其诊断价值
目的 观察IL-31在结核性胸腔积液中的表达情况以及诊断价值进行探讨.方法 选择在我科进行胸腔积液检查治疗且病例完整的患者共计89例进行研究,对患者使用标准胸腔穿刺术抽取胸水,进行IL-31测定,观察结核性胸腔积液和非结核性胸腔积液中IL-31、低密度脂蛋白(LDH)、腺苷脱氢酶(ADA)的浓度比较,观察结核性胸腔积液和类肺性胸腔积液、恶性胸腔积液、心源性胸腔积液患者之间的IL-31、LDH、ADA浓度差异.使用ROC曲线分析方法判断IL-31在结核性胸腔积液中的诊断价值.结果 检查发现结核性胸腔积液的IL-31、LDH、ADA浓度均明显高于非结核性胸腔积液(P＜0.05).分别于类肺性胸腔积液、恶性胸腔积液、心源性胸腔积液患者之间的IL-31、LDH、ADA浓度进行比较后发现结核性胸腔积液的各项数值均明显增高(P＜0.05).结核性胸腔积液诊断的敏感度为82.5％,特异度为100.0％.IL-31对胸腔积液的表达准确性为89.2％.结论 IL-31在结核性胸腔积液中的表达明显升高,具有显著的诊断价值.
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变应性鼻炎患者血清IL-12及IL-31水平测定及其临床意义
目的 探讨变应性鼻炎患者血清IL-12及IL-31水平及其临床意义. 方法 变应性鼻炎患者按照体外检测血清中抗体常规加入吸入性过敏原特异性抗体IgE(sIgE)抗体检测结果分为阳性组和阴性组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测164例变应性鼻炎患者和82例健康对照组血清中IL-12及IL-31水平. 特异性IgE测定采用德国欧盟优敏系列(EUROALLER)检测系统. 结果 变应性鼻炎特异性IgE阳性组、 阴性组的血清IL-12及IL-31检测结果分别为:23.8±9.1、19.1±7.9和27.9±9.4;22.8±6.7;对照组的血清IL-12及IL-31检测结果分别为:11.3±4.8、14.9±7.5;与对照组相比IL-12、IL-31均有统计学意义(P<0.05). 变应性鼻炎特异性IgE阳性组亚组中,螨虫过敏组的血清Il-12水平高,其次为蟑螂过敏组等;与对照组相比,螨虫过敏组与蟑螂过敏组均有显著性差异(P<0.05);变应性鼻炎特异性IgE阳性组的血清IL-31水平与对照组相比均有显著性差异(P<0.05). 结论 免疫因子IL-12及IL-31可能参与变应性鼻炎的发病过程,环境中的螨虫与蟑螂是变应性鼻炎的主要诱因.
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血清白介素-31水平与特应性皮炎瘙痒相关性的Meta分析
目的:采用Meta分析的方法分析特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)与血清白介素-31 (interleukin-31,IL-31)水平的变化关系.方法:以“atopic dermatitis” “pruritus”及“IL-31”为关键词,在PubMed,Science Direct,Web of Science,Cochrane等数据库中检索相关文献,并使用Meta分析对AD与IL-31表达水平的相关性进行分析.结果:Meta 分析结果显示相对于健康人群,AD患者血清IL-31表达水平更高,且重度AD患者的IL-31水平高于轻度AD患者;AD患者病情严重程度与IL-31表达水平呈正相关.结论:IL-31在AD患者中表达升高,且IL-31水平与AD患者瘙痒程度呈正相关.
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IL-31与儿童支气管哮喘的关系研究
支气管哮喘是多种细胞和细胞成分共同参与的慢性气道炎症性疾病，也是儿童期常见的慢性呼吸系统疾病。细胞因子特别是白细胞介素在哮喘气道炎症中发挥重要的作用，同时研究发现特应质与哮喘密切相关；IL-31是2004年发现的细胞因子，由CD4＋Th2细胞产生，通过与IL-31RA与OSMR（OncostatinM receptorβ）形成的异二聚体结合，参与多种炎症反应和过敏性疾病的发生发展。前期研究显示，IL-31受体在支气管哮喘小鼠肺组织和支气管的脱落细胞上表达明显增高，表明IL-31在支气管哮喘发病中可能发挥重要的作用；IL-31的发现对支气管哮喘气道炎症发生、发展机制的完善作用大，为哮喘病的免疫治疗提供新的靶点。
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血清AQP4-Ab和细胞因子在视神经脊髓炎谱系疾病中的表达水平及临床意义
目的 探究视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)患者血清中水通道蛋白抗体(AQP4-Ab)和细胞因子的表达,分析其与临床特征的关系及意义.方法 选取2016年1月至2017年12月就诊于本院眼科的77例NMOSD患者及20例健康者作为对照组.检测所有患者血清AQP4-Ab的表达及细胞因子(IL-25、IL-31、IL-1β)的含量,并分析二者与临床特征的关系及疾病的发生发展中的变化.结果 NMOSD中AQP4-Ab的阳性率为66.23％(51/77),NMOSD首发症状与AQP4-Ab的表达无关,差异无统计学意义(P＞ 0.05);AQP4-Ab阳性组女性所占比例、视神经损害发生率86.27％、74.51％,均明显高于AQP4-Ab阴性组61.54％、42.31％,差异均有统计学意义(均P＜0.05),且AQP4-Ab阳性组的疾病严重程度评分(4.65±1.51)分,明显高于AQP4抗体阴性组(3.23±1.24)分,差异有统计学意义(P＜ 0.05);NMOSD患者血清IL-25、IL-31分别为(30.95±1.86) pg/ml、(106.05±3.84)pg/ml,明显高于对照组(21.60±3.23) pg/ml、(74.30±2.90) pg/ml,差异均有统计学意义(均P＜0.05),且血清中IL-25与IL-31的水平呈正相关(r=0.847,P=0.000).结论 NMOSD中AQP4-Ab阳性的患者病情较重,IL-25、IL-31在NMOSD患者血清中水平明显增高且具有一定的相关性.
关键词： 视神经脊髓炎谱系疾病 水通道蛋白抗体 IL-25 IL-31 -
Hebra痒疹患儿血清IL-31水平检测及临床意义
目的 探讨IL-31在Hebra痒疹发病中所起的作用及其与瘙痒程度的关系.方法 选取2011年9月至2014年9月在宜宾市第二人民医院皮肤科就诊的42例Hebra痒疹患儿为实验组,同期儿保体检的38例健康儿童为对照组,运用酶联免疫吸附法(ELASA)对两组受检者的血清IL-31水平进行检测,并对实验组进行sIgE检测及皮肤瘙痒程度的视觉模拟评分(VAS评分).结果 Hebra痒疹患儿血清IL-31水平为(28.21±10.46)pg/mL,明显高于正常对照组的(16.75±9.53)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.05);Hebra痒疹患儿中sIgE(+)组和sIgE(-)组的血清IL-31水平分别为(29.43±8.65)pg/mL、(26.79±9.14)pg/mL,sIgE(+)组血清IL-31水平虽高于sIgE(-)组,但差异无统计学意义(P>0.05).此外,Hebra痒疹患儿血清IL-31水平与瘙痒评分呈正相关关系(r=0.515,r=0.327,P<0.05).结论 Hebra痒疹患儿血清IL-31水平增高,可能参与发病过程,并与瘙痒程度相关.
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白介素31及其受体在过敏性呼吸道疾病中的作用
白介素31（IL-31）是Dillon等[1]在2004年发现的一种新型细胞因子，主要是由活化的Th2型细胞分泌。其受体是由白细胞介素31受体A（IL-31RA）和抑瘤素M受体B（OSMRB）组成的异源二聚体复合物。近年来，国内外有研究表明，IL-31及其受体在瘙痒症、秃发症、气道超敏反应、特应性皮炎、炎症性肠病及自身免疫疾病的发病过程中发挥重要作用。本文对IL-31及其受体在过敏性呼吸道疾病中的作用作一综述。
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重组hIL-31抗体制备及其拮抗皮肤炎症的研究
目的:高效表达重组hIL-31制备IL-31抗体,探讨IL-31抗体拮抗皮肤炎症的作用,为研发IL-31抗体治疗性新药奠定基础.方法:①培养工程苗、IPTG诱导、菌体、超声破碎,用镍NTA柱纯化重组蛋白.②重组hIL-31蛋白溶液加佐剂免疫家兔,制备兔抗IL-31多克隆抗体.③将IL-31抗体分为3个剂量,经皮下注射和皮肤直接涂抹的途径,对已经致皮肤炎症的BALB/c小鼠治疗7d,治疗后3d取治疗部位皮肤作石蜡切片进行HE染色观察组织学变化,并检测血清中IL-6、IL-8、L选择素和MIP-3β等细胞因子的变化.结果:①SDS-PAGE电泳证实获得了高纯度的纯化人IL-31蛋白.②用重组hIL-31蛋白疫苗免疫家兔,在免疫后4周抗体滴度达到高峰,经ELISA法测血清抗体滴度为1:15 000～1:20 000,双扩滴度为1:16.Western blot结果重组IL-31蛋白能与抗IL-31抗体特异性结合.③小鼠皮肤组织切片HE染色显示,治疗组皮下和皮内均有炎症细胞浸润,呈现剂量依赖性趋势.④血清中炎性因子ELISA检测,涂抹组和注射组小鼠血清中IL-6、IL-8、MIP-3β均明显低于阴性对照组(P＜0.05).结论:①获得稳定表达的重组人IL-31蛋白,以此作为免疫原免疫家兔,诱导分泌高滴度的IL-31抗体.②IL-31抗体使皮肤炎症中炎性细胞减少,血清中炎症相关细胞因子明显降低.
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白细胞介素-31及其受体研究进展
IL-31由CD4+Th2细胞产生,其受体是由IL-31Rα与OSMRβ(Oncostatin Mreceptor β)组成的异二聚体,IL-31及其受体在人和小鼠多种组织中表达,二者结合后主要通过JAK-STAT通路和MPAK通路来进行信号转导发挥效应.IL-31的生物学功能还不完全清楚,初步研究表明IL-31可能在瘙痒症、特应性皮炎、诱导细胞因子、参与2型炎症反应及炎症性肠病等方面发挥作用.
