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miRNA -145在子宫内膜异位症中的诊断价值及其机制研究
目的：探讨 miRNA -145在子宫内膜异位症（EMs）中的诊断价值及其可能的机制。方法采用实时荧光定量（RT - PCR）法检测不同病程阶段 EMs 患者血清及内膜组织中的 miRNA -145表达水平，分析其相关性，并预测其靶基因。选同期因不孕症（输卵管因素）及输卵管系膜囊肿等手术的患者27例作为对照组。结果 RT - PCR 检测结果显示，Ectopic 组和 Eutopic 组内膜组织 miRNA -145相对表达水平均高于对照组（ P ＜0.05），EMs1、EMs2、EMs3和EMs4组患者血清 miRNA -145相对表达量均高于对照组（ P ＜0.05），无疼痛组、轻度疼痛组、中度疼痛组和重度疼痛组患者血清 miRNA -145相对表达水平均高于对照组（ P ＜0.05），且随着 r - AFS 分期进展及 VAS 疼痛评分增加，miR-NA -145表达水平逐渐上升（ P ＜0.05）。靶基因预测结果提示与 EMs 相关的基因有5个：CRK、PTEN、VEGFA、PGR 和MMP9。结论 miRNA -145在 EMs 患者早期血清中存在特异性表达，可能作为 EMs 早期诊断指标，成为新兴的 EMs 诊断和预后的分子标志物。
关键词： 子宫内膜异位症 microRNA-145 异位内膜 在位内膜 诊断 -
冠心病患者血浆中 microRNA-145表达与冠状动脉侧支循环形成的相关性研究
目的：探讨冠心病患者血浆中 microRNA-145(miRNA-145)表达与冠状动脉侧支循环(CCC)形成的相关性。方法根据冠状动脉造影结果入选80例主要冠状动脉中至少一支直径狭窄≥90%的冠心病患者,按照 Rentrop 分级方法对 CCC 进行分级,其中0级24例,1级19例,2级20例,3级17例。 Real-time PCR 测定血浆中 miRNA-145的相对表达,酶联免疫吸附法检测血浆中血管内皮生长因子(VEGF)水平,Gensini 积分方法评价冠状动脉病变程度。结果随着 CCC 分级的增加,血浆中 VEGF 水平亦随之升高,miRNA-145相对表达随之下降。控制 miRNA-145相对表达水平后,血浆中 VEGF 水平与 CCC 的建立呈正相关(r =0.524,P ﹤0.01),控制血浆中 VEGF 水平后,miRNA-145相对表达与 CCC 的建立呈负相关(r =-0.669,P ﹤0.01),同时 miRNA-145相对表达水平与血浆中VEGF 水平呈负相关(r =-0.529,P ﹤0.01)。结论在冠心病患者中,CCC 形成良好的患者血浆中miRNA-145相对表达低于 CCC 形成不良患者,表明 miRNA-145在 CCC 的建立中可能起重要作用。
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MiR-145对人结肠癌细胞株HCT-116奥沙利铂耐药机制探讨
目的 探讨microRNA 145 (miR 145)对人结肠癌细胞株HCT-116奥沙利铂(L-OHP)耐药作用及其机制.方法 采用逐步增加药物浓度的方法,建立人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT-116/L-OHP.脂质体转染法将miR-145转入建立好的耐药细胞株中,并设立阴性miRNA对照组、miR-145 siRNA处理组(miR-145组)、空脂质体组和空白对照组(control组).MTT法测定转染48 h后细胞增殖能力和对L-OHP的敏感性;实时定量PCR检测转染后HCT-116/L-OHP细胞中多药耐药基因MDR1和抑癌基因PTEN的表达;蛋白质印迹法检测P-糖蛋白(P-gp)和PTEN蛋白表达.结果 成功建立耐药倍数为母本细胞7倍的HCT-116 /L-OHP细胞株.检测HCT-116母本与HCT-116/L-OHP细胞MDR1、PTEN基因表达结果显示,HCT-116/L-OHP细胞MDR1基因水平为0.86±0.05,较母本细胞的0.39±0.03显著升高;HCT-116/L-OHP细胞PTEN基因水平为0.41±0.04,较母本细胞的0.89±0.02显著下调.应用miR-145转染母本及耐药细胞发现,miR-145可明显抑制HCT-116母本及HCT-116/L-OHP细胞的增殖,生长抑制率分别为57％和38％,进而提高细胞对L-OHP的药物敏感性.进一步研究发现,miR-145过表达处理后,抑癌基因PTEN表达水平为0.78±0.03,较control组的0.42±0.01显著上调;而MDR1基因表达水平为0.47±0.01,较control组的0.87±0.02显著下调.经miR-145 siRNA预处理后,HCT-116/L-OHP细胞抑癌基因PTEN表达水平为0.35±0.02,较miR-145组显著下降;而MDR1基因表达水平为0.94±0,04,较miR 145组显著上调;PTEN蛋白及MDR1目的蛋白P-gp的变化呈现相同趋势,P值均＜0.05.结论 miR-145可降低人结肠癌HCT-116细胞株奥沙利铂耐药性,其作用机制可能是通过影响MDR1和PTEN基因及蛋白表达水平来实现的.
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microRNA-145在宫颈癌中的表达及其对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用
目的:探讨microRNA-145在宫颈癌中表达的临床意义及其对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用.方法:收集2002年1月至2004年12月解放军464医院62例宫颈癌患者的组织标本,采用实时荧光定量PCR方法检测microRNA-145表达并将其分为高表达组和低表达组,分析其与临床病理参数的关系.将microRNA-145表达质粒和无义对照质粒分别转染入宫颈癌HeLa中,分为过表达microRNA-145组和对照组,采用细胞免疫荧光染色法分析细胞中β-catenin表达定位的变化,双荧光素酶报告系统检测细胞中TCF/LEF转录活性及与Cateninδ-1的直接作用,采用Western blot法检测microRNA-145对Cateninδ-1、C-MYC和Cy?clinD1表达的影响.结果:microRNA-145低表达组患者的总生存期为(41.28±2.00)个月,高表达组为(46.06±0.95)个月,两者比较差异具有统计学意义(P<0.05),低表达组患者预后较差.过表达microRNA-145组HeLa细胞中的β-catenin主要分布于胞浆,对照组主要位于细胞核和胞浆;过表达microRNA-145组细胞中TCF/LEF转录活性受到抑制,伴随着Cateninδ-1、C-MYC和Cy?clinD1表达下调,microRNA-145与Cateninδ-1可直接结合发挥作用.结论:microRNA-145可通过与Cateninδ-1直接作用,抑制Wnt/β-catenin信号通路转导,从而发挥抑制宫颈癌演进的生物学功能.
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microRNA-145对卵巢癌SKOV3细胞抑癌基因p53表达调控研究
目的 探讨microRNA-145(miR-145)对卵巢癌SKOV3细胞抑癌基因p53表达的调控.方法 选取2012年2月至2013年4月在重庆医科大学,通过慢病毒转染技术将含miR-145的质粒转入SKOV3细胞中,经嘌呤霉素筛选建立稳定表达miR-145的SKOV3细胞株.实时定量荧光RT-PCR验证miR-145的表达情况,western-blot检测过表达miR-145后SKOV3细胞中p53蛋白表达量的变化.结果 过表达miR-145的SKOV3细胞p53蛋白相对表达量实验组0.714±0.18,对照组0.333±0.07,增高114倍(P＜0.05).结论 miR-145可能通过增强卵巢癌SKOV3细胞中抑癌基因p53的表达来降低细胞的肿瘤恶性程度.
关键词： microRNA-145 卵巢肿瘤 SKOV3 P53 -
miRNA-145通过下调ROCK1的表达抑制人牙周膜成纤维细胞的迁移
目的:研究微小核糖核酸-145(microRNA-145,miRNA-145)对人牙周膜成纤维细胞迁移的影响及其作用机制.方法:体外采用酶消化法培养人牙周膜成纤维细胞并传代,将其分为对照组和转染miRNA-145组,按50 ng/mL的miRNA-145浓度转染人牙周膜成纤维细胞,转染72 h后提取各组蛋白,用Western blot检测miRNA-145的靶蛋白ROCK1的表达水平的相关变化;采用划痕试验检测各组划痕细胞间距离的相关变化,选取划痕后的0h、24 h、48 h、72 h时间点,测量各时间点划痕细胞间的距离并计算平均值.结果:与对照组相比,转染miRNA-145后,miRNA-145靶蛋白ROCK1的表达量显著降低(p＜0.05);转染24 h、48 h后细胞间距离的均值大于对照组(p＜0.05).结论:miRNA-145可能通过下调ROCK1的表达抑制人牙周膜成纤维细胞的迁移.
关键词： microRNA-145 人牙周膜成纤维细胞 细胞迁移 ROCK1 -
microRNA-145调控大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究
目的 探讨microRNA-145在大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的作用.方法 取3周龄雄性大鼠胫骨骨髓间充质干细胞,分为阴性对照组与microRNA-145下调组,分别感染慢病毒,观察microRNA-145对大鼠骨髓间充质干细胞在细胞增殖、细胞周期、凋亡和成骨分化方面的影响.结果 microRNA-145下调表达组(pLy3-(anti) miR-145)与阴性对照组(pLv3-Negative control)相比,大鼠骨髓间充质干细胞的增殖、细胞周期和凋亡无统计学差异(P＞0.05);rnicroRNA-145下调表达组成骨相关基因Sema3A、OPG、Runx2及Osterix/SP7表达均明显高于阴性对照组,且microRNA-145下调组茜素红染色范围也大于阴性对照组.结论 microRNA-145下调表达可以促进大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化,但对其细胞增殖、细胞周期和凋亡无明显影响.
关键词： microRNA-145 大鼠骨髓间充质干细胞 成骨分化 -
非小细胞肺癌患者血清中miRNA-145的表达和意义
目的 非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)已成为癌症死亡的主要原因.文中旨在探讨microRNA-145(miRNA-145)在NSCLC患者血清中的表达及其临床意义. 方法 收集2014年3月至2015年4月在南京军区南京总医院接受原发性NSCLC手术切除的61例患者作为NSCLC组,统计分析其临床资料,同时选取同期80例健康体检者为对照组.采用RT-PCR技术检测NSCLC患者和对照者血清miRNA-145的表达水平,利用ROC曲线评价其在NSCLC诊断中的特异性和敏感性. 结果 NSCLC组血清miRNA-145相对表达量明显高于对照组[(1.37±0.89) vs(0.42±0.27),P＜0.05].NSCLC患者miRNA-145相对表达量与组织学类型、临床分期有关,在腺鳞癌中的表达(0.21±0.44)显著低于腺癌(1.01±0.62)和鳞状细胞癌(1.43±0.76),差异有统计学意义(P＜0.001),TNM分期Ⅰ-Ⅱ期的表达量显著高于Ⅲ-Ⅳ期[(1.34 ±0.76)vs(0.42 ±0.52),P＜0.05].ROC曲线下面积为0.863(95％CI:0.793 ～0.933),临界值取0.653时,灵敏度和特异度分别为80.30％和87.50％. 结论 NSCLC患者血清miRNA-145水平明显升高,提示miRNA-145是NSCLC诊断的特异标志之一.
关键词： microRNA-145 非小细胞肺癌 实时荧光定量PCR -
miR-145对大鼠静脉桥血管内膜增生的影响
目的探讨微RNA-145(miR-145)对自体静脉桥内膜增生的影响。方法18只雄性SD大鼠均分为慢病毒处理组、慢病毒对照组和未处理组。移植前,慢病毒处理组将移植静脉浸入慢病毒介导的miR-145溶液中(病毒滴度为1．0×109 pfu/ml)15 min,慢病毒对照组将移植静脉浸入空载慢病毒溶液(病毒滴度为1．0×109 pfu/ml)浸泡15 min,未处理组在生理盐水中浸泡15 min。术后2周取出移植血管,应用HE染色和Masson染色观察血管内膜的病理学改变,以及荧光定量 RT-PCR 法检测移植血管中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及血管内皮生长因子( VEGF)的表达。结果慢病毒处理组移植血管内膜厚度和管腔狭窄度均较慢病毒对照组和未处理组明显减少, MCP-1、PCNA、α-SMA及 VEGF的表达水平明显低于慢病毒对照组和未处理组。结论 miR-145可以有效抑制移植静脉内膜的增生。
关键词： microRNA-145 慢病毒 静脉桥 基因治疗 -
MicroRNA-145在原发性膝关节骨关节炎软骨中的表达及意义
目的 明确microRNA-145(miR-145)在骨关节炎(OA)组织中的表达水平及miR-145对软骨细胞胶原蛋白表达的作用.方法 收集20例膝关节OA患者的膝关节软骨和10例正常患者的膝关节软骨,根据改良的Mankin评分标准对OA关节软骨进行分组.使用RT-PCR方法检测miR-145在关节炎组织及TNF-α处理的软骨细胞中的表达,软骨细胞中X型胶原、RANK、MMP13、ALP的蛋白表达用Western blot检测.结果 miR-145在原发性OA和正常膝关节软骨中均能检测到表达,RT-PCR结果表明,miR-145的表达在不同退变程度的OA软骨组织及软骨细胞中有表达差异,而且随着OA退变程度的提高,miR-145在软骨细胞及软骨组织中的表达呈下降趋势,在重度退变的OA软骨中,上述差异与正常及轻度退变软骨有统计学意义(P＜0.05).将miR-145转染至培养的软骨细胞,Western blot对软骨细胞进行检测分析,MMP13、X型胶原纤维蛋白受到抑制.结论 原发性膝关节OA的软骨组织及细胞中miR-145的表达较正常软骨的表达明显减低,而且,随着软骨退变程度的加重,miR-145表达呈下降趋势;miR-145可以抑制软骨细胞MMP13、X型胶原、RANK的表达.
关键词： 骨性关节炎 microRNA-145 软骨细胞 -
microRNA-145在肝细胞肝癌中的表达及临床意义
[目的]探讨肝细胞肝癌中microRNA-145(miR-145)水平的变化及其临床意义.[方法]采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测30例肝癌组织、癌旁组织及3例正常肝组织中miR-145表达量,以及Hep G2肝癌细胞、L-O2胎肝细胞中miR-145表达量并计算miR-145相对表达量.结合采集组织的性别、年龄、淋巴结转移、肿瘤大小、HBV感染、AFP浓度等临床病理参数分析miR-145表达水平有无明显差异.[结果]肝癌组织中miR-145表达明显低于正常肝组织,差异有统计学意义(P＜0.05),癌旁组织与正常肝组织及肝癌组织之间表达差异无统计学意义(均P＜0.05),Hep G2细胞中miR-145表达明显低于L-O2细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).miR-145在肝癌中的表达异常与性别、年龄、淋巴结转移、肿瘤大小、HBV感染、AFP浓度无相关,差异无统计学意义.[结论]miR-145在肝癌患者中低表达,在肿瘤发生发展过程中可能担任了抑癌基因的角色,对肝细胞肝癌的临床诊断有意义.
关键词： 肝细胞肝癌 microRNAs microRNA-145 -
大鼠microRNA-145慢病毒表达载体的构建及其对血管平滑肌细胞表型转化的影响
目的 构建针对Rno-iR-145的慢病毒表达载体并探讨其在血小板源生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用.方法 人工合成驶有酶切位点粘端miR-145 shDNA双链模板序列,克隆于LV3 pGLV/H1/GFP+ Puro-miRNA慢病毒穿梭载体中,转染293T细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染大鼠原代VSMC,倒置荧光显微镜下观察VSMC感染后的荧光表达情况,实时荧光定量PCR检测miR-145的表达情况；实验分为空白对照组、PDGF组、PDGF+ miR-145组和细胞转染阴性慢病毒载体组(miR-NC组)；采用实时荧光定量PCR测定miR-145对VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun及分化相关基因SM22α mRNA表达水平的影响.结果 成功构建了microRNA-145慢病毒载体,测定病毒滴度为1×109TU/mL.倒置荧光显微镜下观察大鼠microRNA-145慢病毒表达载体感染成功,MOI值为50,感染72h时感染率高.实时荧光定量PCR结果显示PDGF可使PCNA、c-Jun表达增加,而使SM22α表达降低；miR-145可使PDGF诱导的去分化型VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun表达降低,分化相关基因SM22α表达增加.结论 miR-145慢病毒载体可高效感染大鼠原代VSMC.感染miR-145慢病毒后可抑制VSMC的表型转化.
关键词： microRNA-145 慢病毒表达载体 血管平滑肌细胞 表型转化 -
microRNA-145对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞上皮间充质转化的影响
目的 研究microRNA-145(miR-145)对转化生长因子(TGF)-β1诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)上皮间充质转化(EMT)的影响.方法 人工合成miR-145基因序列,构建真核重组质粒pCMV-miR-145.以未处理HK-2细胞为对照组;以TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1组;以pCMV-myc空白质粒转染后经TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1空白质粒组;以pCMV-miR-145质粒转染后经TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1+miR-145组.采用实时荧光定量PCR检测miR-145表达.采用Western blot检测TGF-β/Smad信号传导蛋白TGF-β1、Smad3、Smad2/3、p-Smad2/3,以及EMT生物标记物蛋白 α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)和I型胶原蛋白(ColⅠ)的表达水平.采用ELISA法检测培养细胞上清液中FN和Col I的含量.结果miR-145表达质粒构建成功,重组质粒有效转染TGF-β1诱导HK-2细胞.与对照组比较,TGF-β1+miR-145组细胞中miR-145表达上调(P<0.01);与对照组和TGF-β1+miR-145组比较,TGF-β1组和TGF-β1空白质粒组细胞中miR-145表达均下降(P<0.01).与TGF-β1组和TGF-β1空白质粒组比较,TGF-β1+miR-145组细胞内TGF-β1、Smad3、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达量减少(P<0.05);α-SMA、FN、ColⅠ蛋白表达亦明显减少(P<0.05);TGF-β1+miR-145组培养液上清中FN、ColⅠ含量减少(P<0.05).结论 miR-145 参与TGF-β1 处理 HK-2 细胞 EMT 的调控.miR-145 可能通过抑制 TGF-β 依赖的 Smad 信号通路活性,从而抑制肾小管 EMT.
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microRNA-145调控Catenin-δ1表达及其与结直肠癌侵袭和转移的相关性
目的 探讨microRNA-145(miR-145)调控Catenin-δ1表达与结直肠癌侵袭和转移的关系.方法 应用实时荧光定量PCR和显色原位杂交技术检测36例结直肠癌组织和配对正常肠粘膜组织中miR-145的表达;利用LipofectamineTM 2000试剂将miR-145模拟物瞬时转染SW620肠癌细胞株,通过RT-PCR和Western blot分析Catenin-δ1及Fascin-1表达情况;CCK-8试剂盒和Transwell小室检测各组细胞转染后增殖、侵袭和迁移能力的变化.结果 miR-145在结直肠癌组织中的表达低于配对正常肠粘膜组织,且表达水平与淋巴结转移相关(P<0.05).体外细胞实验显示,转染miR-145模拟物可显著降低SW620肠癌细胞株Catenin-δ1和Fascin-1蛋白表达水平,并抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移.结论 miR-145低表达与结直肠癌侵袭和转移相关,其机制可能与调控Catenin-δ1的表达水平相关.
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VEGF-C调节miR-145/SIP1增强宫颈癌细胞侵袭能力
[目的]研究VEGF-C促子宫颈癌细胞侵袭能力的影响,探讨microRNA-145/Smad相互作用蛋白1在其中的作用.[方法]体外培养宫颈癌细胞株SiHa细胞,观察VEGF-C对miR-145、SIP1表达的影响;转染SIP1 siRNA后,采用transwell侵袭小室法观察其对宫颈癌细胞株增殖和侵袭的影响.[结果]VEGF-C(100 ng/mL)处理SiHa细胞12、24、48 h后,均能抑制miR-145表达,与对照组比较,其表达幅度分别为(82.4±6.4)%(P<0.05)、(72.5±7.2)%(P<0.01)、(60.6±9.6)%(P<0.001).同时,VEGF-C处理后可增强SIP1蛋白表达,与对照组(100%)比较,表达幅度分别为(142.4±16.5)%(P<0.05)、(183.6±11.4)%(P<0.01)、(220.8±15.7)%(P<0.001).miR-145类似物(mimic)可显著抑制VEGF-C促SIP1表达的效应.SiHa细胞转染特异性SIP1 siRNA 48 h后,VEGF-C促细胞侵袭的能力明显减弱,抑制率为(56.6±10.3)%(P<0.01).[结论]VEGF-C可能下调miR-145,进而上调SIP1蛋白表达,增强宫颈癌侵袭能力及其恶性进展.
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血浆microRNA-145表达水平与急性心肌梗死的相关性研究
目的 探讨血浆microRNA-145在急性心肌梗死(AMI)中的表达及相关性.方法 选取2015年1月-2016年10月河北省涿州市医院院就诊的疑似AMI患者282例,根据AMI诊断标准将患者分为AMI组174例与非AMI组108例;以同期健康体检者85例作为对照组.AMI患者分别于发病3、8、24、72、120和168 h采用荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测血浆microRNA-145含量,电化学发光法检测心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)及肌红蛋白(Mb)水平.应用受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆microRNA-145、cTnⅠ及Mb对AMI的诊断价值,Logistic回归模型分析血浆microR-NA-145与AMI的关系.Spearman秩相关分析AMI患者血浆microRNA-145水平与cTnⅠ、Mb的相关性.结果 AMI组和非AMI组血浆microRNA-145 (2-△△Ct)分别为1.06±0.25和0.48±0.12,cTnⅠ分别为2.96(0.56,10.28)ng/mL和0.05(0.01,0.23) ng/mL,Mb分别为87.35(68.42,139.34) ng/mL和43.62(30.28,70.41) ng/mL,均高于对照组的0.07±0.01、0.00(0.00,0.00)ng/mL和19.53(11.46,32.53)ng/mL,差异有统计学意义(P＜0.05).与cTnⅠ和Mb相比,血浆microRNA-145水平在AMI患者中出现较早,3h开始升高(0.72±0.16),8h达到高峰(1.84±0.52),在7d仍可见microRNA-145高表达.血浆microRNA-145佳临界值为0.72时,其诊断AMI的敏感度和特异度好,分别为86.4％和91.3％.Logistic回归分析显示,血浆microRNA-145及cTnⅠ是AMI患者的独立危险因素(P＜0.05).AMI患者血浆microRNA-145与cTnⅠ呈正相关(r=0.586,P＜0.01).结论 血浆microRNA-145在AMI中具有较高的敏感度和特异度,可作为早期诊断AMT的生物学指标.
关键词： 急性心肌梗死 microRNA-145 生物学标记 敏感度 特异度 -
PA K1基因3′-U TR区荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定
目的：针对人p21小GTP酶活化激酶1（p21‐activated kinase‐1，PAK1）基因的3′端非翻译区（3′‐untranslated region ，3′‐UTR）构建PAK1的荧光素酶报告基因载体，并对其进行鉴定和筛选，为后续 PAK1与microRNA‐145（miR‐145）的功能和机制研究提供实验基础。方法用PCR法扩增出 PAK1基因3′‐U T R片段，经连接、酶切插入到pGL3载体上，构建了 PAK13′‐UTR荧光素酶报告基因载体。通过生物信息学方法预测miR‐145可能靶向作用于PAK1基因的3′‐UTR ，后将上述重组质粒以及miRNA mimics（miRNA模拟物）、miRNA‐Con（miRNA control ，miRNA 阴性对照）瞬转到膀胱癌 T24和J82细胞系中，并检测其相对荧光素酶活性。另外，利用实时定量 PCR法检测不同实验组中 PAK1的表达情况。结果成功构建了重组pGL3‐PAK13′‐UTR WT质粒，并通过双酶切以及测序的方法验证所得结果的正确性。且转染 pGL3‐PAK13′‐UTR WT 质粒后， T24／miR‐145组和J82／miR‐145的相对荧光素酶活性显著低于T24／miR‐con和J82／miR‐con组，差异有统计学意义（P＜0．05）。另外，通过实时定量PCR法发现，miR‐145 mimics组的PAK1表达水平显著低于miR‐145 con组。结论成功构建了PAK1基因3'‐UTR区荧光素酶报告载体，且miR‐145能够显著降低其荧光素酶活性，提示miR‐145能靶向负调控 PAK1的表达。
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microRNA-145对食管鳞状细胞癌细胞增殖的影响
目的 探讨microRNA-145(miR-145)对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖的影响.方法 用脂质体法将miR-145转染入ESCC细胞,实验分为正常对照组、随机序列组和miR-145组.在荧光显微镜下观察细胞生长及基本形态,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-145的表达,采用噻唑蓝(MTT)增殖试验检测细胞增殖情况,用伤口愈合实验检测细胞迁移.结果 72 h后,MTT增值实验显示,miR-145组[表达值为(0.56+0.04)]的癌细胞增殖速度较正常对照组[表达值为(0.98+0.09)]和随机序列组[表达值为(0.95+0.11)]明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-145对ESCC细胞的增殖可能有抑制作用.
关键词： 食管鳞状细胞癌 microRNA-145 增殖 -
MicroRNA-145在各类肿瘤的表达水平
MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中发现的一类具有调控功能的非编码小分子RNA,是一种极为重要的基因调控物质,参与细胞周期、细胞凋亡、增殖及迁移等过程.MicroRNA-145(miR-145)是miRNA家庭中的一员,它对肿瘤基因调控起到了关键的抑制作用.目前已发现miR-145在多种肿瘤组织中表达降低,与许多细胞过程如分化、增殖和凋亡有关.近年来,miR-145在抑制肿瘤细胞生长方面的作用得到广泛关注,其在肿瘤发生、进展、迁移和侵袭中起到重要作用,对肿瘤早期诊断、靶向治疗及预后判断方面的应用价值日益受到重视.
关键词： microRNA-145 肿瘤 表达
