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CD3AK细胞与IL-2联合治疗癌性胸腹腔积液的护理
目的研究CD3AK细胞与IL-2联合治疗癌性胸腹腔积液的护理要点.方法对16例腹腔积液和14例胸腔积液恶性肿瘤患者从胸腔或腹腔抽出积液后立即注射CD3AK细胞与IL-2,在治疗中实施相应护理.按QOL的指标对睡眠、疲乏、食欲在用药前后进行计分.结果癌性胸腔积液患者的有效率为 77%,癌性腹腔积液患者的有效率为62.5 %,用药前后的患者睡眠、疲乏、食欲比较,有显著性差异(P<0.05),用药后的睡眠、疲乏、食欲明显改善.结论 CD3AK细胞与IL-2联合是治疗癌性胸腹腔积液的有效手段.通过治疗前的心理护理及术后更换体位,密切观察生命体征的变化,特别是体温、呼吸、疼痛,做好基础护理,对预防并发症,提高病人的生活质量有着重要意义,对辅助其他治疗方法有积极的意义.
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双特异性抗体介导的CD3AK体外杀伤实验研究
目的:研究在双特异性抗体的介导下CD3AK细胞(CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞)对人小细胞肺癌细胞株LTEP-sml.细胞毒作用.方法:用51Cr-Na2CrO4释放试验检测单抗(2D6、UCHT1)和双特异性抗体(WST-HT)与CD3AK共同对人小细胞肺癌细胞株的杀伤活性.结果:双特异性抗体外能明显增强CD3AK细胞对人小细胞肺癌的杀伤活性.结论:与单纯CD3AK相比加入双特异性抗体后的CD3AK细胞的细胞毒活性显著增强.
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低温冻存对人脐血CD3AK某些生物学特性的影响
目的探讨人脐血CD3AK细胞的佳诱导体系及低温保存对其生物特性的影响.方法以适离心参数制备单个核细胞.用CD3McAb、完全培养基、人AB血清或同一自体脐血清,设计不同浓度组以优化诱导体系.经佳诱导体系培养的CD3AK细胞低温保存不同时间后复苏.检测免疫表型、活率以及细胞集落形成率.结果佳诱导体系为(15%自体脐血清+85%全培基+自体红细胞+CD3McAb),诱导的人脐血CD3AK细胞形态良好,低温冻存150天,免疫表型的变化无显著性,复苏活率均数高于90%,细胞集落形成率下降则有显著意义.结论以佳诱导体系培养的人脐血CD3AK细胞可低温保存一定时间,其免疫表型的变化无显著性,复苏活率均数高于90%.这对临床生物治疗有实用意义.
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脐血CD3AK细胞治疗恶性肿瘤的临床应用研究
目的:研究用脐血单个核细胞制备CD3AK细胞的抗肿瘤作用,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标.方法:分离脐血单个核细胞,分别用IL-2和IL-2+CD3Ab诱导LAK和CD3AK细胞,并测其扩增数量和对K562细胞的杀伤活性;测定肿瘤患者用CD3AK细胞治疗前后外周血T淋巴细胞亚群绝对计数的变化情况和外周血单核细胞(PBMC)的NK杀伤活性.结果:脐血LAK细胞和脐血CD3AK细胞均于培养后11天时扩增倍数高,分别是培养前的18倍、24倍,对K562的杀伤活性分别是培养前的2.6倍和3.2倍;肿瘤患者输注CD3AK细胞一疗程后,其外周血T淋巴细胞亚群绝对计数有明显升高:总T升高66.0%,Th升高68.0%,Ts升高58.0%;其PBMC的NK杀伤活性由63.0%升高到81.0%,平均升高28.0%.结论:1)脐血单个核细胞是LAK细胞和CD3AK细胞良好的前体细胞.2)LAK和CD3AK细胞的数量和杀伤能力在培养的11天时达高峰,而且CD3AK细胞数量和杀伤活性明显优于LAK细胞.3)CD3AK细胞输注能明显提高肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群绝对计数和PBMC的NK活性.4)肿瘤患者的外周血T淋巴细胞计数和PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗的一个近期疗效参数.
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CD3AK与LAK细胞体外培养增殖及细胞毒活性的比较
我院1 993～1 998年应用CD3AK细胞、LAK细胞治疗癌症过程中,在细胞培养期间进行了两种细胞增殖力及杀伤力的比较.近年来对于LAK细胞的抗肿瘤作用及临床已有J广泛深入的研究.对CD3AK也有了初步探讨.但对两种效应细胞的体外增殖及抗肿瘤作用同时进行比较则未见报道.本文对CD3AK、LAK细胞的体外扩增、杀伤作用进行了比较,以期为选择合适的抗癌效应细胞用于临床治疗提供依据.
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CD3AK、LAK与CIK细胞生物学特性的研究
①目的探讨CD3AK、LAK及CIK细胞的诱导、增殖能力及杀伤活性的变化.②方法采用CD3单抗和IL-2刺激诱生扩增CD3AK细胞,用IL-2刺激诱生LAK细胞,采用第0天加入IFN-γ,第1天加入IL-1,CD3单抗,IL-2诱生CIK细胞,观察它们的扩增情况;用MTT法以K562和H7402细胞为靶细胞,测定CD3AK、LAK及CIK细胞的杀伤活性.③结果CD3AK和CIK细胞的扩增能力远大于LAK细胞(P＜0.05).CIK细胞和CD3AK相比,在前期无明显差异,至第19、22天时CIK细胞的扩增能力显著高于CD3AK的扩增倍数(P＜0.05).CD3AK和CIK细胞对K562和H7402细胞的杀伤活性均显著高于LAK细胞(P＜0.05).④结论CIK细胞具有更高的扩增能力和更强的杀伤活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀瘤效应细胞.
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淫羊藿甙逆转转化生长因子β2对LAK、CD3AK细胞的免疫抑制作用
目的:探讨淫羊藿甙逆转转化生长因子β2(Transform ing Growth Factor β2,TGFβ2)对LAK、CD3AK细胞的免疫抑制作用及其机制.方法:采用 MTT法,RT-PCR和流式细胞术.结果:淫羊藿甙能逆转受TGFβ2抑制的LAK和CD3AK细胞的杀伤活性,并能部分恢复受TGFβ2抑制的LAK细胞表面IL-2Rα表达和CD3AK细胞内穿孔素mRNA水平,以及CD3AK细胞的增殖活性.结论:淫羊藿甙通过恢复LAK细胞IL-2Rα表达,提高CD3AK细胞内穿孔素mRNA水平及促进CD3AK增殖,逆转TGFβ2对LAK 、CD3AK的免疫抑制作用.
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汉黄芩素提高人CD3 AK细胞杀伤肝癌细胞的实验研究和机理探讨
目的：观察汉黄芩素对人CD3AK细胞增殖及对肝癌细胞SMMC-7721杀伤活性的影响，并探讨其发生的机制。方法：分离健康者外周血PBMC；在体外用多种细胞因子联合诱导培养CD3AK细胞。收集培养第7天的CD3AK细胞给予不同浓度汉黄芩素诱导48 h：CCK-8法检测人CD3AK细胞增殖率；MTT法检测汉黄芩素对SMMC-7721细胞生长的影响；流式细胞术（FCM）检测汉黄芩素作用前后CD3AK细胞穿孔素（PFP）、颗粒酶B（GrB）、CD107a的表达；乳酸脱氢酶（LDH）释放法测定汉黄芩素对CD3AK细胞杀伤肝癌细胞SMMC-7721活性；Western blot检测药物诱导前后CD3AK细胞胞外信号调节激酶（ ERK1／2）蛋白表达。用transwell chambers小室进行药物诱导前后肝癌细胞SMMC-7721迁移率检测。划痕愈合实验观察药物诱导后肝癌细胞SMMC-7721生长融合情况。结果：汉黄芩素能明显促进CD3AK细胞增殖，汉黄芩素浓度为3.2 mg／L时，细胞增殖率比对照组（0 mg／L）高23％，两者比较有统计学差异（ P＜0.05）。在汉黄芩素为3.2 mg／L时诱导的CD3AK细胞对靶细胞SMMC-7721杀伤活性高（60.4％），与对照组（42.7％）比较差异有统计学意义（ P＜0.05）。经汉黄芩素诱导后的CD3AK细胞PFP、GrB、CD107a表达显著高于对照组（P＜0.05）。汉黄芩素作用48h后的CD3AK细胞其ERK1／2蛋白表达较对照组均有所上调，浓度在12.5～0.8 mg／L时，ERK1／2蛋白表达高于对照组（ P＜0.05）。经浓度为50、12.5、3.2、0.8、0.2 mg／L汉黄芩诱导48 h 后，肝癌细胞SMMC-7721通过transwell 小孔细胞数以汉黄芩浓度为12.5 mg／L时低、肝癌细胞SMMC-7721的融合率以3.2 mg／L时低，与对照组比较有统计学意义（ P＜0.05）。结论：汉黄芩素在一定浓度范围内能够促进CD3AK细胞增殖，增强其对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤活性，抑制SMMC-7721细胞生长、迁移和细胞的融合。汉黄芩素促进CD3AK细胞增殖和功能改变可能与活化细胞ERK1／2蛋白，上调CD3AK细胞表面PFP、GrB、CD107a的表达有关。
关键词： 汉黄芩素 肝癌/SMMC-7721 CD3AK细胞 -
CD3AK细胞对肝癌患者细胞免疫功能影响
本文采用抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(CD3AK)对38例原发性肝癌患者进行治疗,并对该患者治疗前后的T细胞亚群进行测定.观察CD3AK细胞对肝癌的疗效以及对该患者细胞免疫功能影响.结果显示:肝癌患者治疗后CD3、CD4和CD8均比治疗前有不同程度的增高,CD3和CD4均有统计学意义.提示CD3AK细胞能增强肝癌患者细胞免疫功能,临床疗效观察亦显示出良好的效果.
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CD3AK细胞在肿瘤治疗中的研究进展
随着免疫学、分子生物学与基因工程技术的发展,以肿瘤免疫治疗为代表的肿瘤生物治疗已成为继手术、化疗和放疗后的新模式.CD3AK(anti-CD3 antibody induced activated killer cells)是指抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞,以其存活时间长、外源性IL-2用量小,以及体内外抗瘤作用优于LAK细胞等优势,成为继LAK(Lymphokineactivated killer,LAK)和TIL(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)之后,肿瘤AIT研究中受关注的肿瘤效应细胞[1].
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双特异抗体介导的CD3AK对人小细胞肺癌细胞株的细胞毒作用
目的:研究在双特异性抗体的介导下CD3AK细胞(CD3单克隆性激活的杀伤细胞)对人小细胞肺癌细胞株LTEP-sm1的细胞毒作用.方法:用51Cr-Na2CrO4释放试验检测单抗(2D6、UCHT1)和双特异性抗体(WST-H7)与CD3AK共同对人小细胞肺癌细胞株的杀伤活性.结果:双特异性抗体体外能明显增强CD3AK细胞对人小细胞肺细胞株LTEP-sm1的杀伤活性.结论:与单纯CD3AK相比,加入双特异性抗体后的CD3AK细胞的细胞毒活性显著增强.
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荷CEA-rV的DC增强CD3AK对CEA阳性肿瘤的特异杀伤作用
癌胚抗原(carcino embryonic antigen,CEA)是一种常见的肿瘤相关抗原,是目前国际上公认的肿瘤标记物.在人体上皮细胞恶性肿瘤中,包括90%的胃肠道肿瘤、胰腺癌、80%以上的非小细胞肺癌和50%左右的乳腺癌,都呈CEA阳性.人们称这类肿瘤为CEA阳性肿瘤[1].罗超权等[2]用牛痘病毒构建的CEA-重组基因痘苗病毒(CEA-rV)既有CEA抗原的高表达,又可刺激机体产生CEA抗体.
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淋巴结来源的CD3AK细胞的增殖和表型变化分析
目的:研究肺癌清扫淋巴结的淋巴细胞,经CD3单克隆抗体激活后的杀伤细胞(CD3AK细胞)在体外的增殖和表型变化.方法:取肺癌清扫淋巴结,用机械方法分离成单细胞悬液,加CD3单克隆抗体和小剂量IL-2共同培养,每隔1天用流式细胞术进行细胞表型分析及用台盼蓝活细胞计数法观察细胞增殖情况.结果:表型分析显示CD3,CD8,CD56,CD25增加.培养第8天淋巴细胞增殖达高峰,数量是培养前的2.33倍.结论:CD3单克隆抗体能明显激活各种T细胞增殖,使CD3AK细胞维持杀伤功能.
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人γδT细胞、CD3AK细胞、CIK和DCs对荷胃癌裸鼠的疗效
Rosenberg等将LAK细胞应用于临床以来,人们对肿瘤的细胞免疫治疗进行了深入的研究.由于肿瘤细胞分泌的免疫抑制因子和肿瘤微环境,以及荷瘤机体抗肿瘤免疫效应细胞不同程度地存在数量和质量上的异常,因此,在肿瘤细胞免疫治疗上必须用固有免疫细胞联合适应性免疫细胞进行治疗,才能有效地清除肿瘤细胞或抑制肿瘤生长.本研究应用术后2年末复发胃癌患者的树突状细胞(dendritics cells,DCs)、CIK细胞、CD3AK细胞和γδT细胞对已建立的人胃癌(SGC-7901细胞株)模型裸鼠进行单独或联合治疗,以观察这些细胞单用和联用的治疗效果.
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CD3AK细胞抗肿瘤作用与MHC限制性关系
目的研究抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(anti-CD3McAb activated killer cells ,CD3AK细胞)杀伤肿瘤细胞作用与MHC限制性的关系.方法采用微量淋巴细胞毒实验方法测定CD3AK细胞及肿瘤细胞MHC表型,用MTT法测定CD3AK细胞杀伤活性.结果 (1)不同人来源的CD3AK细胞,其MHC表型不同,但对同种肿瘤传代细胞都有很强的杀伤作用,且不同人来源的CD3AK细胞间杀伤作用差异无显著性(P>0.05);(2)同一来源CD3AK细胞对不同肿瘤传代细胞株(MHC表型不同)的杀伤作用差异无显著性(P>0.05);(3)人外周血诱导的CD3AK细胞对鼠肿瘤细胞株(Yac-1)与对人肿瘤传代细胞株(K-562,Raji)一样具有很强的杀伤作用.结论 CD3AK细胞杀伤肿瘤的作用是非MHC限制的,在临床应用中可用正常人外周血诱导得到的CD3AK细胞体外培养增殖后输给肿瘤病人进行治疗.该效应细胞来源方便,可用于肿瘤术后清除残留肿瘤细胞,具有重要应用价值.
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IL-2基因转导CD3AK细胞免疫学功能的研究
目的：观察白细胞介素-2(IL-2)基因转导后CD3AK细胞免疫学功能的变化。方法：应用逆转录病毒载体将IL2基因转导入CD3AK细胞。检测转导细胞中特异性NeoR基因、培养上清IL2的表达水平及转导CD3AK细胞的体外增殖活性、细胞毒活性和细胞表型。结果：从转导细胞mRNA中扩增出长度为347bp的特异性NeoR基因片段，转导细胞培养上清的IL2表达水平显著增高，体外增殖活性和细胞毒活性均强于未转导组细胞，CD4+/CD2+值升高。结论：PLIL2SN逆转录病毒转导CD3AK细胞后，IL-2基因得到表达并增强CD3AK细胞的免疫学功能。
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人γδT细胞、CD3AK细胞和NK细胞对裸鼠移植人结肠癌的抑制作用及对肿瘤细胞凋亡的影响
目的 探讨人γδT细胞、CD3AK细胞和NK细胞对裸鼠移植人结肠癌的抑制作用及对肿瘤细胞凋亡的影响.方法 将人结肠癌细胞株(SW-116)接种于BALC /c裸鼠皮下,建立结肠癌裸鼠模型,随机分为4组,每组6只.设定建立模型为第1天,分别于第1天、第4天、第7天每组给予相应的治疗.A组:尾静脉注射RPMI 1640培养液;B组:注射NK细胞+γδT细胞;C组:注射NK细胞+CD3AK细胞;D组:注射NK细胞+CD3AK细胞+γδT细胞.并于第10天处死裸鼠,测量肿瘤体积,用Tunel法检测肿瘤细胞凋亡率.结果 24只裸鼠接种5×106结肠癌细胞后第4天,在接种部位均有肿瘤形成,皮下结节大径为2～3 mm,成瘤率为100%.治疗组肿瘤体积增加小于对照组,第1次治疗后10天时测A、B、C、D组平均肿瘤体积分别为(86.78±7.19)、(52.80±5.59)、(54.05±6.53)、(43.16±7.40)mm3,各治疗组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),B、C组组间无显著差异(P>0.05),D组与B、C组相比有显著差异(P<0.05).Tunel检测结果显示,与对照组相比,治疗组肿瘤细胞的凋亡率升高(P<0.05),以D组为甚.结论 人的γδT细胞、CD3AK细胞和NK细胞能不同程度延缓裸鼠移植的人结肠癌瘤体生长,免疫治疗能提高肿瘤细胞的凋亡率.
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细胞因子诱导的杀伤细胞对胆囊癌细胞株GBC-SD杀伤活性的影响
目的 研究脐血单个核细胞体外多向诱导分化为LAK,CD3AK,CIK细胞及体外对胆囊癌细胞株GBC-SD杀瘤活性的变化.方法 采用IL-2刺激诱生LAK细胞;用CD3单抗和IL-2刺激诱生扩增CD3AK细胞;加入IFN-γ,24 h后加入IL-1,CD3单抗,IL-2刺激诱生CIK细胞,观察它们的扩增情况,并分析其相互关系;取培养的CIK细胞用流式细胞仪分析表型;用MTT法以胆囊癌细胞株GBC-SD为靶细胞,分组测定LAK,CD3AK,CIK细胞的杀伤活性.结果 CD3AK和CIK细胞的扩增能力远大于LAK细胞(P＜0.05).CIK细胞和CD3AK相比,在前期无明显差异,至第20天左右时CIK细胞的扩增倍数显著高于CD3AK(P＜0.05).流式细胞仪分析结果显示CIK细胞培养后,其主要效应细胞CD3+ CD56+细胞较培养前显著增加(P＜0.05),CD8+细胞也较培养前显著增加(P＜0.05).CD3AK和CIK细胞对胆囊癌细胞株GBC-SD的杀伤活性均显著高于LAK细胞(P＜0.05),而CIK细胞杀伤活性又强于CD3AK细胞(P＜0.05).结论 CIK细胞具有更高的扩增能力和更强的杀伤活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀伤效应细胞.
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肝癌患者自体CD3AK细胞与LAK细胞的杀伤活性比较
目的比较肝癌患者自体CD3AK细胞和LAK细胞的杀伤活性,为临床应用提供依据.方法以流式细胞仪检测细胞的杀伤活性.结果原发性肝癌患者自体的CD3AK细胞的NK活性和LAK活性均高于LAK细胞.结论CD3AK细胞效果稳定,抗瘤效应明显高于LAK细胞,CD3AK细胞可望作为一种新的生物治疗手段用于肿瘤治疗.
