首页 > 文献资料
-
青蒿素类抗疟药的作用机制
70年代,我国学者自中草药黄花蒿中分离出抗疟药青蒿素之后,又陆续合成了蒿甲醚、青蒿琥酯和双氢青蒿素等有效衍生物.这类药物的问世,在抗疟药物研究史上树立了新的里程碑.在目前疟原虫对传统抗疟药普遍产生抗性情况下,青蒿素类抗疟药投入使用十余年,迄今尚未见抗药性出现,故其抗疟作用机制引起了学者的注意.青蒿素类药物具有独特的过氧桥结构,阐明其作用机制,对开发新一代高效低毒抗疟药具有重要意义.本文就近年来有关青蒿素类抗疟药作用机制方面的研究进展一综述.
-
双氢青蒿素对体外培养阴道毛滴虫作用的电镜观察
目的 观察双氢青蒿素(DHA)对阴道毛滴虫超微结构的影响.方法 在2.5×106个/ml滴虫培养液中加入双氢青蒿素1 mg/ml.37℃培养3和3.5 h,进行扫描电镜观察,培养2.5和4 h进行透射电镜观察.结果 双氢青蒿素作用滴虫后,虫体细胞膜受损明显,表面皱褶加深、表膜凹陷,并出现裂隙.细胞核膜破损,细胞核和细胞质均出现裂隙.内质网呈囊状肿胀,氢化酶体受损、变形.细胞质从细胞膜破裂处溢出.细胞膜剥脱后细胞核、氢化酶体和盾等结构裸露.后虫体变性、坏死.结论 双氢青蒿素能破坏阴道毛滴虫膜系结构并导致虫体裂解死亡.
-
双氢青蒿素对体外蓝氏贾第鞭毛虫的损伤
目的探讨双氢青蒿素(DHA)对蓝氏贾第鞭毛虫的损伤作用.方法用含不同浓度DHA的TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体.分别在光镜和电镜下观察药物作用后虫体的形态结构变化.结果随着药物作用时间延长和浓度的增加,虫体死亡率增高.在同一时间内随着药物浓度的增高,虫体死亡率升高(P＜0.01).DHA浓度为100μg/ml,作用12 h,虫体死亡率为46.6%,浓度增至200μg/ml时,虫体死亡率为100%;同一药物浓度随着作用时间延长,虫体死亡率也升高(P＜0.05),当浓度为100μg/ml,作用12 h,虫体死亡率为46.6%,作用24 h死亡率增至100%.药物作用后24、48和72 h光镜下观察结果显示,虫体变形、肿胀、出现空泡、失去正常的瓢形运动能力;鞭毛摆动迟缓或停止运动.电镜下观察,见虫体变形、肿胀、细胞膜崩解、脱落,表面出现胞质突起;细胞质内核糖体溶解,出现空泡;吸器失去凹状结构,隆起变成大泡;核染色质稀疏,核周间隙变宽,并出现异形核.结论DHA对蓝氏贾第鞭毛虫的质膜及细胞骨架有较强的损伤作用.
-
双氢青蒿素与磷酸萘酚喹伍用治疗恶性疟的疗效观察
目的观察双氢青蒿素与磷酸萘酚喹配伍使用治疗恶性疟的疗效.方法以显微镜血检单纯恶性疟原虫阳性患者为观察对象,药物为双氢青蒿素160 mg加磷酸萘酚喹400 mg(成人量),一次顿服,服药后按时测量体温和血检原虫,随访28 d,观察治疗效果.结果收治37例恶性疟患者,有1例复燃,治愈率为97.3%.平均退热时间为(15.8±8.7)h,24 h平均原虫下降率为96.7%±26.5%,原虫无性体转阴时间平均为(27.6±13.2)h,药后无明显不良反应.结论双氢青蒿素与磷酸萘酚喹配伍使用治疗恶性疟具有良好的效果.
-
双氢青蒿素诱导外周T细胞淋巴瘤Hut-78细胞凋亡及其可能的机制
目的:考察双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)诱导的外周T细胞淋巴瘤Hut-78细胞凋亡,并进一步研究其作用机制.方法:CCK-8法检测1～30 μg/ml DHA对Hut-78细胞增殖的影响,运用Hochest 33258染色技术在共聚集显微镜下观察DHA对Hut-78细胞核形态的影响,流式细胞术检测DHA对Hut-78细胞凋亡的影响,10 mmol/L的活性氧(reactive oxygen species,ROS)清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理细胞1h,观察ROS在DHA引起的细胞线粒体膜电位变化中的作用,Western blotting检测在Hut-78细胞凋亡过程中ROS对DHA引起的细胞色素C释放的影响.结果:DHA呈浓度依赖性抑制Hut-78细胞的增殖,并引起细胞核固缩,形成凋亡小体.5、10、20 μg/ml DHA引起的细胞凋亡率分别为(25.1±2.8)％、(43.6±3.1)％、(68.9±2.6)％,与对照组相比差异有统计学意义(均P＜0.01).20 μg/ml DHA处理导致Hut-78细胞线粒体膜电位下降(59.4±2.6)％,而经ROS抑制剂NAC预处理之后,线粒体膜电位下降(38.4±2.1)％.DHA能够引起线粒体中细胞色素C的释放,而NAC的预处理能够明显地抑制这一过程,统计结果进一步证明这一点.结论:DHA能够抑制外周T细胞淋巴瘤Hut-78细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与DHA促进ROS依赖的细胞色素C释放有关.
-
双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞中p16INK4A蛋白表达的调控作用及其机制探讨
目的:探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人前列腺癌PC-3细胞株中p16INK4A表达的影响及其可能的分子机制.方法:用不同浓度(25、50和100 μmol/L)的DHA处理PC-3细胞48 h,同时设置DHA未处理的空白对照组.然后,采用FCM法检测各组细胞的凋亡率和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;亚硫酸氢盐基因组测序法检测p16INK4A基因的甲基化水平;实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)和p16INK4A的mRNA及蛋白表达水平;细胞免疫荧光法检测p16INK4A蛋白的定位及表达情况.结果:与空白对照组相比,各浓度DHA处理组的PC-3细胞凋亡率和ROS水平均明显升高(P值均＜ 0.05).DHA处理后,PC-3细胞中p16INK4A基因的甲基化水平明显降低(P＜0.05),DNMT1 mRNA和蛋白的表达水平也明显降低(P值均＜ 0.05),而p16INK4A mRNA和蛋白表达水平明显升高(P值均＜ 0.05).p16INK4A蛋白在细胞核及细胞质中均有表达;与空白对照组相比,DHA处理组的p16INK4A蛋白荧光强度明显提高(P＜0.05).结论:DHA可能通过下调DNMT1表达,使p16INK4A基因的甲基化水平降低,从而恢复p16INK4A蛋白的表达,终诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡,并伴有ROS的产生.
-
双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞中UCHL1基因表达的调控机制研究
目的:研究双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人前列腺癌PC-3细胞株中抑癌基因泛素羧基末端水解酶L1(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase L1,UCHL1)表达的影响,并探讨其可能的调节机制.方法:PC-3细胞株经不同浓度(25、50和100 μmol/L)的DHA处理48 h,并设空白对照组.采用FCM法检测各组细胞凋亡率和细胞周期的变化.采用免疫荧光染色法检测UCHL1和DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)在细胞内的蛋白定位及表达量.蛋白质印迹法检测UCHL1、DNMT1、磷酸化Akt (phospho-Akt,p-Akt)和Akt蛋白的表达;并且以1μmol/L磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)家族抑制剂Wortmanin作为阳性对照,比较分析DHA处理组p-Akt蛋白的表达量.结果:DHA能明显诱导PC-3细胞凋亡,并使细胞停滞在G2/M期,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).DHA处理组中DNMT1蛋白由细胞核转移到细胞质,与空白对照组比较,DNMT1蛋白在细胞核与细胞质中总的表达水平明显下调(P＜0.05);而UCHL1蛋白表达在细胞质内明显上调(P＜0.05).与空白对照组比较,DHA处理组与阳性对照组的UCHL1蛋白表达均上调(P＜0.05),DNMT1表达水平均下调(P＜0.05),p-Akt蛋白表达水平下调(P＜0.05),而Akt蛋白表达量无明显变化(P＞0.05);其中,高浓度DHA处理组的p-Akt蛋白表达下调更为显著,更接近于阳性对照组.结论:DHA能够抑制DNMT1的表达,恢复抑癌基因UCHL1的表达,从而诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡,阻滞细胞周期进程;推测其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的活性有关.
-
我国新药研究开发的现状及存在的问题
1我国新药研究开发的现状我国自1993年实施药品专利保护以来,国家逐渐重视新药研究开发,新药研究开发已取得较大成果,质量和速度不断提高,自新药审批法于1985年实施起至1994年12月共批准新药1123种(新药763种,中药360种),其中一类新药28个,60%以上是四类西药.1995～1998年这几年中申报新药(西药)总量达3151个,比1986年增加了30多倍,其中一、二、三、四类新药分别为141、622、484和1865个;共批准新药(西药)生产2040个(包括进口原料药分装制剂),其中一类新药38个如双氢青蒿素、盐酸苯环壬酯、硫酸依替米星(悉能)、乙氧苯柳胺(艾迪特)、洛铂、阿拉瑞林、胸腺蛋白口服液(欣络维)、血卟啉和人生长激素等,四类药1200多个,占60%以上.
-
三波长分光光度法测定复方双氢青蒿素片中双氢青蒿素的含量
目的:建立复方双氢青蒿素片中双氢青蒿素含量测定的方法.方法:主波长为250nm,基线波长1为271nm,基线波长2为301nm.结果:在6～30μg·mL～,范围内线性良好,r=0.999 92(n=10),平均回收率为101.7%,RSD为0.66%.结论:三波长分光光度法可不经分离,能消除甲氧苄啶和磷酸哌喹的干扰,从而直接测定复方制剂中双氢青蒿素的含量,该法操作简便、快捷、准确.
-
高效液相质谱联用法测定人血浆中蒿甲醚及其活性代谢物双氢青蒿素的浓度
目的建立高效液相质谱联用法以测定人血浆中蒿甲醚(ARM)及其活性代谢物双氢青蒿素(DHA)的浓度.方法色谱条件:色谱柱为C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.2%醋酸-甲醇梯度洗脱系统,流速为1.0 mL·min-4.质谱条件:大气压化学电离方法(APCI)采集正离子,SIM方式对ARM和DHA检测m/z 221,对内标(青蒿素)检测m/z 283.血浆样品的预处理采用甲基叔丁基醚萃取法.结果ARM和DHA的线性范围为5～300μg·L-1,相关系数r＞0.999 0,检测限均为2μg·L-11.ARM和DHA日内和日间测定的RSD＜9.3%,回收率在92%～105%的范围内,提取回收率为80%～96%.结论该法简便、准确、灵敏、专属,适用于ARM和DHA的人体药动学研究.
-
同位素稀释液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中青蒿琥酯及其代谢产物双氢青蒿素的含量
目的 建立液相色谱-串联质谱法测定人血浆中青蒿琥酯及其代谢产物双氢青蒿素的浓度.方法 以稳定同位素化合物氘4-青蒿琥酯和碳13,氘4-双氢青蒿素为内标,血浆样品经甲醇蛋白沉淀后进样分析.色谱柱为反相C18一体柱(4.0 mrm×3.0 mm,5μm),柱温为室温,流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈溶液,以1.5 mL·min-1的流速等度洗脱,进样量15 μL.电喷雾离子源,正离子多反应监测(MRM)扫描分析,青蒿琥酯和双氢青蒿素离子通道分别选择为m/z 402.2→267.2和m/z 302.2→267.2,内标氘4-青蒿琥酯和碳13,氘4-双氢青蒿素离子通道分别选择为m/z 406.2→267.2和m/z 307.2→272.2.结果 青蒿琥酯和双氢青蒿素分别在l～1 000 μg·L-1和3～3 000 μg· L-1范围内线性关系良好,定量下限分别为1 μg·L-1和3 μg·L-1.日内、日间精密度RSD均小于9％,平均提取回收率在85.5％～96.0％范围内.结论 本方法灵敏度高、专一性好、操作简单,可用于人血浆中青蒿琥酯和双氢青蒿素含量的检测.
-
双氢青蒿素哌喹片治疗无并发症恶性疟的临床随机对照试验
目的:探讨双氢青蒿素哌喹片在柬埔寨马德望省治疗无并发症恶性疟的有效性和安全性.方法:无并发症恶性疟疾病人50例,按随机数字表随机分成2组,每组25例,一组用双氢青蒿素哌喹片,一组用复方双氢青蒿素片,采用2 d内4次给药,成人总量8片的给药方案,观察治愈率、复燃率、平均原虫转阴时间、退热时间和不良反应.结果:双氢青蒿素哌喹片组的原虫转阴时间为(36± s 20) h,复方双氢青蒿素片组为(36±17) h;退热时间双氢青蒿素哌喹片组为(42±25) h,复方双氢青蒿素片为(31±21) h;随访28 d,双氢青蒿素哌喹片组治愈率为100 %,复方双氢青蒿素片组有1例于d 21复燃,治愈率为96 %.病人对两药均有较好的耐受性,个别病人在服药过程中出现恶心、腹痛等症状,均轻微而且是自限性的.结论:双氢青蒿素复方具有高效、速效、低毒、病人顺应好等优点.
-
PEG修饰蒿甲醚纳米结构脂质载体在大鼠体内的药动学
建立了液相色谱-串联质谱法同时测定大鼠血浆中蒿甲醚及其活性代谢物双氢青蒿素的浓度.以未修饰的蒿甲醚纳米结构脂质载体(NLC)作对照,考察聚乙二醇(PEG)修饰体系(PEG-NLC)经尾静脉注射给药后在大鼠体内的药动学行为.结果显示,蒿甲醚及其代谢物双氢青蒿素在大鼠体内的药动学特征均符合双室模型.PEG-NLC组大鼠血浆中蒿甲醚的AUC0→t[(1 487.87±215.3 0)h·ng·ml-1]、t1/2(β)[(4.68±0.53)h]和MRT[(6.43±0.71)h]均显著大于NLC组[(1 054.11±192.95)h·ng·ml-1、(3.43±0.45)h和(4.67±0.5 4)h](P＜0.01);同时,双氢青蒿素的AUC0→t[(1 170.03±176.76) h.ng·ml-1]、t1/2(β)[(4.29±0.54)h]和MRT[(5.81±0.68)h]也均显著大于NLC组[(756.32±142.52)h·ng·ml-1、(2.71±0.44)h和(3.68±0.56) h] (P＜0.01).结果显示,与未修饰的蒿甲醚NLC相比,PEG-NLC静脉注射后可使蒿甲醚及其活性代谢物双氢青蒿素的血浆半衰期延长,血药浓度整体水平增加,血浆中的循环时间延长.
-
双氢青蒿素对前列腺癌裸鼠种植瘤Bcl-2和Bax表达的调控
目的 研究双氢青蒿素(DHA)诱导前列腺癌细胞凋亡作用及其机制.方法 采用人前列腺癌PC-3细胞株建立裸鼠种植瘤模型,将20只模型鼠随机平均分为对照组、溶剂(DMSO)组、DHA 200 μmol/kg体质量组和DHA 100 μmol/kg体质量组,经13 d干预后,电镜观察肿瘤组织形态学表现;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达水平;TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡.结果 与对照组及DMSO组比较,DHA治疗组电镜观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2表达减弱、Bax表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05);TUNEL检测结果显示肿瘤组织细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 DHA具有较强的诱导前列腺癌细胞凋亡作用,这种作用可能是通过下调Bcl-2和上调Bax表达实现的.
-
双氢青蒿素与雷公藤甲素对神经胶质瘤细胞的抑制作用
目的 探讨两种天然药物双氢青蒿素(DHA)与雷公藤甲素(TP)单独及联合用药对神经胶质瘤细胞体外抑制和体内治疗的作用.方法 CCK-8法检测DHA与TP单独及联合用药对神经胶质瘤细胞活性的抑制作用.Hochest 33258染色观察给药后细胞核的形态变化,采用Rhodamine123和PI染色技术在流式细胞仪下分别检测细胞线粒体膜电位和细胞周期的情况.建立神经胶质瘤小鼠移植瘤模型,给药后分别监测小鼠体质量以及肿瘤体积大小并作统计学分析.苏木精-伊红(H-E)染色主要脏器的病理切片,观察药物的在体毒性.结果 12μg/mL的DHA与TP单独及联合用药处理神经胶质瘤C6和U87细胞48 h可明显抑制细胞的活性,抑制率分别达到85％和80％.DHA与TP单独及联合用药组分别都引起细胞核固缩,细胞线粒体膜电位下降明显,联合用药组的细胞线粒体膜电位的下降明显高于单独用药组(P＜0.01).DHA与TP联合处理细胞主要使细胞周期阻滞在Sub-G1和G2/M期.在体实验结果显示:相比于对照组和单独给药组,联合用药组更能够有效抑制肿瘤的生长(P＜0.01).病理切片H-E染色发现联合用药几乎没有在体毒性.结论 DHA与TP联合用药对神经胶质瘤细胞具有显著的协同抑制效果,并且在体治疗效果也非常显著,为临床使用天然药物治疗神经胶质瘤提供一个新的方法和思路.
-
双氢青蒿素抗日本血吸虫作用的体内实验观察
目的 观察不同发育阶段日本血吸虫对双氢青蒿素的敏感性,探索双氢青蒿素抗日本血吸虫的效果.方法 采用尾蚴腹部贴片法感染小鼠,每鼠感染日本血吸虫尾蚴40条;在血吸虫不同发育阶段灌服用药,于感染后50 d解剖小鼠,收集成虫,计算减虫率和减雌率.①在小鼠感染后2 h,3、5、7、10、14、18、21、28 d和35 d灌服双氢青蒿素(300 mg/kg),观察双氢青蒿素对不同发育阶段血吸虫的作用效果.②以不同剂量双氢青蒿素分别给感染后7 d或35 d的小鼠用药,观察双氢青蒿素抗日本血吸虫作用的量-效关系.③以不同药物剂量分别在感染后第7天和第35天给药(共2次),观察双氢青蒿素对日本血吸虫的作用效果.结果 300 mg/kg双氢青蒿素一次灌服用药对7 d龄童虫和35 d龄成虫有明显杀灭作用,减虫率分别为64.81%和60.47%,减雌率分别为73.81%和90.48%.以200、300、400 mg/kg和600 mg/kg双氢青蒿素治疗感染后7 d小鼠,减虫率分别为46.84%、60.63%、59.55%和60.21%,减雌率分别为59.73%、72.29%、72.58%和76.61%;治疗感染后35 d小鼠,减虫率分别为47.23%、62.33%、76.31%和83.63%,减雌率分别为59.73%、89.36%、89.65%和93.96%;在感染后第7天和第35天共治疗2次,减虫率分别为58.16%、82.66%、83.42%和83.79%,减雌率分别为68.69%、90.43%、93.74%和94.63%.结论 双氢青蒿素具有一定的抗日本血吸虫作用,对7 d童虫和35 d成虫较为敏感.
-
双氢青蒿素哌喹对大鼠肺孢子虫肺炎的治疗效果
目的 观察双氢青蒿素哌喹(科泰复)对大鼠肺孢子虫肺炎(PCP)的治疗效果,并探讨其可能的作用机理.方法 以每周2次连续6周皮下注射地塞米松诱导SD清洁级大鼠建立肺孢子虫肺炎动物模型,采用科泰复40mg/kg,连续3d,双氢青蒿素(科泰新)60mg/kg,连续6d治疗实验大鼠,以复方新诺明为治疗对照组,通过存活率、体重回升率、肺重/体重比、肺印片的每视野包囊均数、大鼠外周血CD4+、CD8+T细胞亚群和血清一氧化氮(NO)、γ-干扰素(IFN-γ)、α-肿瘤坏死因子(TNF-α)水平等指标考核其疗效.结果 科泰复、科泰新治疗组的大鼠存活率提高,治疗后大鼠体重增加,肺重/体重比、肺印片的每视野包囊均数和血清NO和TNF-α水平均显著低于PCP模型阳性对照组(P<0.05),而科泰复和科泰新治疗组大鼠外周血CD4+T淋巴细胞亚群和IFN-γ水平则均显著高于PCP模型阳性对照组(P<0.05).结论 科泰复、科泰新对大鼠肺孢子虫肺炎具有治疗和免疫调节作用.
-
双氢青蒿素抗寄生虫作用研究进展
双氢青蒿素是青蒿素及其衍生物蒿甲醚和青蒿琥酯在体内的有效活性代谢产物,为广谱抗寄生虫药物.本文系统综述其抗疟原虫、血吸虫、肺孢子虫、弓形虫、阴道毛滴虫、利什曼原虫、蓝氏贾第鞭毛虫作用.
-
双氢青蒿素对前列腺癌细胞PC-3M生长的影响及其机制探讨
目的:观察双氢青蒿素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3M细胞凋亡和血管内皮生长因子( VEGF)表达的影响. 方法:不同浓度(0、25、50、100 umol/L)的双氢青蒿素分别作用于PC-3M细胞48 h,MTT法检测细胞生长活性；流式细胞仪测定细胞凋亡率；分光光度法检测细胞凋亡过程中caspase-3、caspase-8活性变化；半定量RT-PCR法检测PC-3M细胞内VEGF mRNA的表达；Western印迹法检测细胞VEGF蛋白表达. 结果:双氢青蒿素能显著抑制PC-3M细胞的增殖,与对照组(0 umol/L)的细胞凋亡率(2.92±0.45)％相比,各剂量组(25、50、100 umol/L)的细胞凋亡率[(8.85±0.74)％,(12.83±0.84)％,(18.65±1.24)％]显著增加,caspase-8[(0.47±0.05) U/ugvs(1.22±0.15) U/ug,(1.76±0.07) U/ug,(2.91±0.24) U/ug]、caspase-3[ (0.44±0.07) U/ugvs (0.95±0.08) U/ug,(1.48±0.14)U/μg,(2.92±0.45) u/μg]活性显著增加,呈剂量依赖性(P＜0.01).PC-3M细胞内VEGF mRNA的表达和蛋白表达呈剂量依赖性降低. 结论:双氢青蒿素能显著抑制体外PC-3M细胞的生长,并促进其凋亡,机制可能与增加凋亡蛋白酶和抑制VEGF表达有关.
-
大孔树脂富集发酵液中9α-羟基双氢青蒿素的工艺研究
9α-羟基双氢青蒿素由双氢青蒿素生物转化发酵而得,该研究考察了大孔吸附树脂法富集发酵液中9α-羟基双氢青蒿素的工艺,为9α-羟基双氢青蒿素的转化制备提供参考.静态吸附法考察4种型号大孔吸附树脂对目标产物的吸附及解吸性能,优选出AB-8树脂作为9α-羟基双氢青蒿素吸附树脂;动态吸附法进一步考察目标产物佳分离条件,HPLC-ELSD法检测9α-羟基双氢青蒿素的含量.结果表明:当发酵液上样体积流量为25 BV/h时,大上样量为5 BV,以8 BV水洗除去水溶性杂质,再以4 BV 95％乙醇洗脱,9α-羟基双氢青蒿素回收率可达87.46％,按照佳工艺重复操作3次,9α-羟基双氢青蒿素回收率稳定在87％左右.该工艺操作简单,稳定性好,可应用于9α-羟基双氢青蒿素大规模生产制备.
