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间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展
脊髓损伤目前在全球呈高发生率、高致残率、高耗费、发病年轻化等特点.一个多世纪以来,医疗界先后采用了手术、药物、针灸、物理治疗等多种方法来治疗脊髓损伤,但都不能有效地解决患者截瘫这一难题.近年来关于脊髓再生的一系列的实验研究取得了令人鼓舞的结果.许多新的方法如神经营养因子、神经移植、基因治疗等均可使成年动物的脊髓功能表现出某种程度的恢复.20世纪90年代Prockop成功地分离出骨髓间充质干细胞.利用骨髓间充质干细胞的强大增殖力、多向分化潜能及移植免疫排斥反应弱等特性,行骨髓间充质干细胞(mesenchvmal stem,MSCs)移植治疗脊髓损伤,引起众多学者的关注.加强其研究具有重大的理论价值和现实意义.本文就MSCs及其在脊髓损伤中的应用研究作一简要综述.
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多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞的免疫表型
目的:用多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞,并了解其在体外的增殖能力及免疫表型的变化.方法:用Ficoll Hypaque淋巴细胞分离液分离获取10例大肠癌患者外周血单个核细胞,rhIFN-γ,rhIL-2,Anti-CD3mAb共孵育.分别在第0,4,7,10,13 d计细胞数,并通过流式细胞术检测细胞免疫表型.结果:大肠癌患者外周血单个核细胞与IFN-γ,IL-2,Anti-CD3mAb共孵育4,7,10,13 d,细胞数分别增加2.69±0.9,14.1±3.7,23.0±5.0和31.2±3.0倍.CD3+,CD4+,CD8+和CD3+CDl6+CD56+细胞在培养第13 d分别从(62.8±7.6)%,(31.5±5.8)%,(44.9±8.2)%和(1.9±0.9)%增加到(90.6±9.0)%,(48.0±6.3)%,(57.3±9.0)%和(41.0±12.7)%.结论:rhIFN-γ,rhIL-2和Anti-CD3mAb能诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞,体外增殖力强,是以CD3+CDl6+CD56+为主的异质细胞群.
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脂肪源性干细胞的研究进展
2001年Zuk和Zhu[1]首次从人抽脂术中抽取的脂肪组织悬液中分离获得了多向分化干细胞,自此,众多学者致力于脂肪源性干细胞(Adipose-derived stem cells)的研究并取得了重大进展.脂肪源性干细胞不仅与骨髓间充质干细胞形态相似,而且和骨髓间充质干细胞同样具有强大的体外增殖力和多向分化潜能.尤其令人鼓舞的是脂肪组织容易获得,对供区的损伤也小,抽取后残留于供区的脂肪组织仍可扩增.这些特点使脂肪源性干细胞从众多种子细胞中脱颖而出,有望成为理想的种子细胞来源.
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当归补血汤对循环内皮祖细胞功能及Bcl-2表达的影响
目的 观察当归补血汤对人循环内皮祖细胞(EPCs)功能及B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)表达的影响.方法 分离培养人外周血单个核细胞,7d后对贴壁细胞行EPCs鉴定后,将EPCs随机分为6组:空白组、对照组、辛伐他汀组、当归补血汤高、中、低浓度组.空白组用不合血清的培养液培养;对照组用0.2％的牛血清白蛋白培养;辛伐他汀组用0.1 μmol/L的辛伐他汀培养;当归补血汤高、中、低浓度组分别用浓度4、2、1 g/L的当归补血汤培养.各组培养24 h后移去上清,加入不含血清的培养液继续培养24 h.采用四唑盐(MTT)法检测细胞增殖力,黏附实验检测黏附力,迁移小室检测迁移力,体外血管生成试剂盒检测成小管力,RT-PCR法检测Bc1-2 mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测Bc1-2蛋白的表达.结果 当归补血汤高浓度组及辛伐他汀组可显著促进EPCs的各项功能并上调细胞Bcl-2 mRNA的表达(P＜0.05);当归补血汤中、低浓度组对EPCs的增殖、迁移及成小管功能具有促进作用,但对细胞黏附力和Bcl-2 mRNA表达无明显影响;当归补血汤高、中、低浓度组及辛伐他汀组均可上调EPCs Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05).结论 当归补血汤可通过上调Bcl-2的表达来促进循环EPCs的功能.
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异位子宫内膜细胞凋亡的研究进展
子宫内膜异位是指正常的子宫内膜腺体和间质存在于子宫内膜以外的部位,当异位于子宫肌层时,称为子宫腺肌病(adenomyosis),异位于其他部位的则称为子宫内膜异位症(简称内异症)(endometriosis,EMT),异位内膜增殖力强,具有粘附性强及侵蚀性生长的特点[1],表现出类似肿瘤的生长特性,常引起不孕、盆腔疼痛及性交困难等.迄今为止关于两病的发病机制尚未明确,临床上亦缺乏有效的治疗方法.
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骨髓间充质干细胞简易分离纯化法
目前比较常用的分离骨髓间充质干细胞(MSC)的方法有全骨髓法.全骨髓法即根据干细胞贴壁特性,定期换液除去不贴壁细胞,从而达到纯化MSC的目的,此方法简单、易行,所得细胞多能分化能力和增殖力好,但是对成纤维样细胞污染的问题不易解决[1].
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脂肪干细胞分化潜能研究进展
组织工程技术的兴起和迅猛发展为组织或器官缺损的修复重建带来了新的治疗途径,并已逐渐成为目前有前景的生理性修复技术[1].然而,种子细胞来源不足、功能老化等问题严重限制了组织工程技术的进一步发展与应用.成体干细胞(adult stem cells,ASC)因分布广、增殖力强且具有多分化潜能而成为当前组织工程种子细胞研究的重点.ASC可来源于骨髓、脂肪、皮肤、肌肉、角膜等各类组织.其中以骨髓基质干细胞(Bone marrow stem cells,BMSC)研究多,应用广.近年来,随着研究的不断深入,脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSC)逐渐被人们发现并迅速进入种子细胞研究领域,因其体内分布广,取材创伤小,细胞获得量大,还能对病人进行体形重塑等优点,近已成为新的研究热点.
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肺癌胸水中肿瘤浸润淋巴细胞的生物学活性研究
目的:探讨肺癌胸水中肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的生物学活性,便于更好地应用于临床.方法:用白细胞介素2(IL-2)诱导培养肺癌胸水TIL,按常规法计数TIL细胞增殖量,采用流式细胞仪分析TIL细胞表型及MTT法检测其杀瘤活性.结果:经IL-2诱导培养TIL 21天后:TIL增殖大于1 000倍的患者有17例占77%.CD3差异无显著性(P＞0.05),CD4、CD8差异有显著性(P＜0.01),而CD4/CD8比值高达3.53±0.82,并且在21天时TIL具有较高的细胞毒性.结论:肺癌胸水中的TIL体外诱导培养21天时TIL具有较强的生物活性,此时用于胸水治疗可取得可靠的疗效.
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骨髓间充质干细胞与成骨
种子细胞研究是骨组织工程学的重要内容.理想的骨种子细胞应该具有以下特点:结构比较简单,是不具有特定机能的原始细胞;取材容易,对机体损伤小;体外培养时增殖力强;自我更新,一定的条件下能向特定的方向分化;稳定表达成骨细胞表型;植入体内后能继续产生成骨活动;无致瘤性.
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优化底物酶及冻存剂组成对软骨细胞增殖力及活力的影响
[目的] 本文研究的目的在于找到软骨细胞分离的合适方法及优化冰冻保存软骨组织的配方.[方法] 来源于骨关节炎膝关节置换术的软骨标本被用于本次试验,采用300或400 u/ml Ⅱ型胶原酶(CTⅡ-1或2)进行软骨细胞体外分离,保存在不同组成的冷冻剂中,进行梯度冷却并保存在液氮中48h,随后进行软骨细胞活力及增殖潜力的测定.[结果] CTⅡ-1较CTⅡ-2更能分离出高活力的软骨细胞(P＜0.05),并且300或400 u/ml的底物酶浓度比较合适.10％ DMSO +90％ FCS是一种比较合适的冰冻保护剂,能够大程度保留软骨细胞的增殖潜力与活力,并且毒副作用小.[结论] 通过相关的优化措施诸如软骨细胞体外分离底物酶以及冰冻保护剂的组成,从关节软骨组织中分离具有高增殖潜力的活力软骨细胞是一种可行的方法.
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TWEAK对人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响及其机制的研究
目的:研究肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用机制.方法:水溶性四唑盐(WST-1)比色法检测TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力的影响,细胞黏附和移动实验检测TWEAK对细胞体外黏附和移动力的影响,细胞侵袭重建基底膜实验检测TWEAK组细胞体外侵袭力的变化.采用Western blot法检测TWEAK对细胞IkB-α、NF-kB(P65)和VEGF蛋白表达的影响.通过应用NF-kB拮抗剂PDTC,观察阻断NF-kB通路后VEGF蛋白表达的变化.结果:TWEAK组在24、48h和72h时细胞增殖率无明显变化(P>0.05).TWEAK组细胞黏附力提高23.67%(P<0.01);TWEAK可增强细胞体外的移动和侵袭力,其趋化指数和侵袭指数分别为1.9±0.3和1.7±0.3(P<0.01).TWEAK能显著下调IkB-α蛋白表达,上调NF-kB(P65)蛋白在核内的表达,并使VEGF蛋白表达量显著增加.用NF-kB拮抗剂PDTC阻断NF-kB通路,能有效抑制VEGF蛋白的表达.结论:TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力无明显影响.TWEAK能促进HO-8910PM细胞移动、黏附和侵袭力.TWEAK促肿瘤侵袭转移的机制之一可能是通过激活NF-kB通路上调VEGF蛋白表达.
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癌性胸水肿瘤浸润淋巴细胞的生物学特性研究
目的:探讨癌性胸水肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的生物学特性,以便更好地应用于临床.方法:用低浓度白细胞介素2(IL-2)诱导培养癌性胸水TIL,按常规法计数TI L细胞增殖量,采用流式细胞仪分析TIL细胞表型及MTT法检测其杀伤细胞活性.结果:经低浓度IL-2(100IU/ml)诱导培养TIL 21d后:TIL增殖倍数为2?130±1?140,大于1?000倍占 72%.CD3无显著性变化(P＞0.05),CD4、CD8有显著性差异(P＜0.01),而C D4/CD8 比值高达3.53±0.82,并且在21d时TIL具有较高的细胞毒性.结论:癌性胸水TIL体外诱导培养3周时TIL具有较强的生物活性,此时进行胸水治疗可取得可靠的疗效.
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碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖的影响
目的 观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)增殖的影响.以探索体外培养HAMSCs的适条件.方法 分离、培养HAMSCs,选取第3代细胞进行鉴定及检测.实验组将bFGF分为0.1、0.5、1、5、10、20、40、80 ng/ml 共8个浓度组;阴性对照组只加HAMSCs,不加bFGF;空白对照组只加培养基.各组孵育48 h后加入Am-Blue试剂,继续孵育,待培养基由靛青蓝色开始变成粉红色时取出用酶标仪测量各组的吸光度(OD),重复3次实验.结果 0.5、1、5、10、20、40、80 ng/ml浓度组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10 ng/ml组与0.5、1、5 ng/ml组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10 ng/ml组与40、80 ng/ml组相比,差异无统计学意义(e=0.067),表明bFGF促增殖作用强的小浓度为10 ng/ml.结论 bFGF能够促进HAMSCs增殖,且促增殖作用强的小浓度为10 ng/ml.
关键词： 羊膜 间充质干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 增殖力 Am-Blue -
上皮根鞘细胞表面超微结构及牙根发育中上皮根鞘增殖力的变化
目的:观察体外培养的上皮根鞘细胞超微结构及牙根发育中上皮根鞘增殖力的变化.方法:体外培养大鼠上皮根鞘细胞,扫描电镜观察.制备出生后5d、7～8d和15 d的SD大鼠下颌磨牙石蜡切片,增殖细胞核抗原,检测免疫染色.结果:上皮根鞘细胞表面有许多微绒毛,细胞间连接紧密.牙根发育中上皮根鞘增殖力有序变化.结论:上皮根鞘细胞具有典型的上皮细胞表面结构特性.牙根发育中上皮根鞘有序断裂与其增殖力变化有关.
