离子色谱法测定血和尿中麦芽糖

目的研究应用离子色谱法测定血浆和尿液中麦芽糖的条件,探讨该方法的性能及临床实用性.方法采用带脉冲电化学检测器的高压液相离子色谱仪,层析系统由GP40梯度泵和ED40电化学检测器组成.测量电极为金电极,Ag-AgCl为参比电极.分离柱为CarboPac-PA1阴离子柱.流动相A为0.1mol/LNaOH,流动相B为0.5mol/LAcNa/0.1 mol/LNaOH.结果血浆和尿样高、中、低3个浓度检测的变异系数分别为:血浆批内CV:0.17～6.38(n=5);批间CV:3.68～4.68(n=25).尿样批内CV:0.34～9.15(n=5);批间CV:2.91～7.63(n=25).血浆回收率为97.41%～102.02%,尿样回收率为100.48%～107.06%.血浆和尿样标准曲线的线性范围分别是0.25～40μg/ml和0.5～160μg/ml,低检测线为0.125μg/ml.结论该方法灵敏度高,取血量少,可以作为临床研究和检验的方法.

用电化学检测器HPLC法测定美容产品中的溴硝丙二醇

库伦型电化学检测器背压升高的处理

随着高效液相色谱技术在医药领域应用范围的扩展,电化学检测已成为高效液相色谱分析必不可少的检测器之一,在神经递质测定、血药浓度分析等方面得到广泛应用.美国ESA公司Coulochem Ⅲ电化学检测器因反应灵敏度高、平衡时间短,深受医药行业用户的欢迎.我院用Agilent 1260高效液相色谱分析仪,选配Agilent公司紫外检测器、荧光检测器及美国ESA公司Coulochem Ⅲ电化学检测器,能满足对精神药物的血药浓度测定、神经递质、神经肽及一些小分子物质测定的临床科研需要.

亚慢性乐果染毒对大鼠脑组织及血清中单胺类神经递质的影响

[目的]探讨有机磷农药乐果90d染毒对大鼠脑组织及血清中单胺类神经递质的影响. [方法]48只健康雄性SD大鼠随机分成4组,分别使用生理盐水,5、10、20mg/kg的乐果灌胃给药,每周染毒5d,每天1次,实验周期90d.染毒结束后断头处死大鼠,分离血清及脑组织皮层、海马,高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)联用电化学检测器(electrochemical detector,ECD)测定大鼠脑组织及血清中单胺类神经递质去甲肾上腺素(noradrenalinebitartrate,NE)、肾上腺素(epinephrine,E)、多巴胺(dopamine,DA)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量. [结果]低、中、高剂量组大脑皮层的NE含量明显低于对照组,分别约为对照组水平的48.7%(P<0.01)、56.8%(P<0.01)和76.5%(P<0.05),与对照组相比差异均有统计学意义,大脑皮层的5-HT含量也明显低于对照组.分别约为对照组水平的65.4%、32.8%(P<0.01)、40.1%(P<0.05),中、高剂量组与对照组的差异有统计学意义.除中剂量组大脑皮层E含量明显低于对照组(P<0.05)外,低、中、高剂量组和对照组大脑皮层E和DA水平无明显差异.大鼠海马各单胺类递质水平有随染毒剂量的升高而降低的趋势,呈现一定的剂量-效应关系;低、中、高剂量组的NE水平分别约为对照组水平的96.9%、85.6%、76.9%(P<0.05);E水平分别约为对照组水平的87.3%、85.5%、76.2%(P<0.05);DA水平分别约为对照组水平的81.4%、69.1%、42.0%(P<0.05);5-HT水平约为对照组水平的81.4%(P<0.01)、33.9%(P<0.01)、32.9%(P<0.01),且与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01).乐果染毒组与对照组血清NE和DA水平无明显差异(P>0.05);低、中、高剂量组血清中E和5-HT含量明显低于对照组,分别约为对照组水平的47.8%、59.1%、60.9%和58.9%、26.6%、23.9%,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01). [结论]乐果亚慢性染毒影响大鼠脑组织皮层、海马及其血清中单胺类递质的含量.

HPLC-电化学法测定人血浆中盐酸克仑特罗浓度

目的应用HPLC-电化学法检测人血浆中盐酸克仑特罗含量.方法采用内标法定量,使用Nucleodur C18色谱柱,以磷酸二氢钾缓冲液-乙腈(7:3,V/V,pH 5.0)为流动相,检测器电位0.80V(A/AgCl).结果该方法的线性范围1.5～120μg·L-1,回归方程Y=0.753X+0.011,r=0.9993;低检测浓度0.015μg·L-1;RSD 2.6%～4.2%;平均回收率93.4%.结论该方法适合临床监测.

甲磺酸罗哌卡因中2,6-二甲基苯胺的HPLC-电化学法测定

建立了测定甲磺酸罗哌卡因中2,6-二甲基苯胺的高效液相色谱-电化学检测法.采用C18柱,流动相为含乙二胺四乙酸二钠和磷酸氢四丁铵的0.5 mol/L磷酸盐缓冲液-乙腈(60∶40),流速1.0 ml/min,电极电压为0.90 V.2,6-二甲基苯胺在5×10-3～6×10-2 μg/ml的范围内线性良好(r=0.9980),RSD为2.7%.

帕金森病模型大鼠脑D2受体与血流灌注的对比研究(摘要)

目的对偏侧帕金森病(PD)模型大鼠脑多巴胺(DA)D2受体改变与脑血流灌注进行对比研究。方法立体定位脑黑质、腹侧被盖区，以6-羟基多巴胺定向损毁制作偏侧PD大白鼠模型，通过阿朴吗啡(Apo)诱发其向健侧旋转的转数筛选模型；并用高效液相-电化学检测器(HPLC-ECD)检测PD模型及对照组大鼠脑纹状体DA含量；采用125I-左旋-3-碘-2-羟基-6-甲氧基-N[Cl-乙基-2-吡咯烷)甲基]苯酰胺(IBZM)放射自显影图分析、99mTc-6-甲基丙二胺肟(HMPAO)大鼠脑内分布观察进行D2受体与脑血流灌注研究。结果 PD模型大鼠损毁侧(右侧)纹状体DA及其代谢产物含量比左侧(健侧或未损毁侧)及假手术对照组明显降低(P＜0.05)；模型组损毁侧纹状体/小脑125I-IBZM摄取比值为8.04±0.71，比健侧及假手术对照组明显增高(P＜0.05)，提示损毁侧纹状体D2受体出现上调效应，损毁侧比健侧增高(30.11±4.53)％，这与Apo诱导偏侧PD模型大鼠向健侧旋转的30 min转数呈良好的正相关(r=0.98)。血流灌注研究显示偏侧PD模型大鼠两侧脑区内的放射性分布差异无显著性(P＞0.05)。结论偏侧PD模型大鼠损毁侧纹状体DA及其代谢产物含量降低、D2受体出现上调反应，后者与Apo诱导的行为学改变呈良好的相关性；与脑血液灌注相比较，放射性标记IBZM揭示的D2受体变化更能特异及时地反映实验性偏侧PD模型的脑功能变化。 [全文刊登于中华核医学杂志2000.20(2)：59]

反相高效液相色谱法测定尿液香草扁桃酸的含量

香草扁桃酸 (3-甲氧-4-羟-苦杏仁酸,VMA)是儿茶酚胺的代谢产物.测定尿中VMA水平,临床上主要用于诊断和鉴别诊断嗜铬细胞瘤及神经母细胞瘤[1,2].传统的测定尿中VMA方法所受干扰因素多、准确度低.国内外相继报道用高效液相色谱电化学检测和紫检测联合进行[2,3].由于电化学检测器价格昂贵,普及率低,而紫外光检测器一般高效液相色谱仪都配备.笔者参考了国内外已有文献,建立了一种仅用高效液相色谱紫外光检测器进行检测VMA的方法.

HPLC-ECD检测尿液中儿茶酚胺含量

目的 建立一种准确可靠、易于临床推广的测定尿液中儿茶酚胺(CAs,包括NE、E、DA)的检测方法.方法 采用活性氧化铝吸附标本中CAs,酸解吸附后,以3,4-二羟基苄胺(DHBA)为内标,利用离子对高相液相色谱及电化学检测器进行测定.结果 显示NE、E、DA在0.135～100ng/ml浓度范围内与响应值(色谱峰高对内标峰高之比)线性关系良好(r值分别为0.9999、0.9998、0.9998),其方法回收率分别为63.2%～93.4%、65.6%～103.7%、70.4%～111.3%,CV值为1.23%～19.52%.结论 此法简单、准确、灵敏、特异性高,便于临床和实验室推广应用.

高效液相色谱-电化学法测定人血浆中盐酸克仑特罗浓度

目的:应用高效液相色谱法(HPLC)-电化学法检测人血浆中盐酸克仑特罗含量.方法:采用乙醚-乙醇混合液提取,用C18色谱柱,流动相为体积比7GA6FA3的0.02 mol/L磷酸二氢钾-乙腈混合液,检测器为电化学检测器,电位0.80 V,内标法定量.结果:本法的线性范围是1.5～120.0 μg/L,回归方程Y=0.753X+0.011,r=0.999 3;低检出限0.015 μg/L,RSD为2.6%～4.2%,平均回收率为93.8%.结论:本法具有灵敏、准确、快速、稳定的特点.

HPLC-ECD法测定复方甲哌卡因注射液中左旋异肾上腺素的含量

目的:建立HPLC-ECD法测定复方甲哌卡因注射液中左旋异肾上腺素含量的方法.方法:采用VenusilXBP C8色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为醋酸盐缓冲液(取冰醋酸50ml,庚烷磺酸钠1.2g,乙二胺四醋酸二钠0.04g,加水930ml,用2mol·L-1的氢氧化钠溶液调节pH至3.4,加水稀释至1 000ml)-甲醇(90:10);柱温20～25℃;流速为1.0 ml·min-1;电化学检测器检测.结果:左旋异肾上腺素在0.2～10μg·ml-1范围内线性关系良好,r=1.0000(n=6);平均回收率为100.9%,RSD 0.6%(n=9).结论:方法快速,准确,灵敏,可作为注射液中微量肾上腺素类药物的测定方法.

HPLC-ECD法检测血浆中儿茶酚胺含量

目的:建立一种准确可靠、易于临床推广的血液中去甲肾上腺素(NE) 、肾上腺素(E) 和多巴胺(DA)的检测方法.方法:采用活性溶剂萃取标本中儿茶酚胺,以3,4-二羟基苄胺(DHBA) 为内标,利用离子对高相液相色谱及电化学检测器进行测定.结果:NE、E、DA的加样回收率分别为(95.3±6.7)%、(101.8±5.4)%和(100.3±5.7)%.批内和批间精密度分别小于11.23%和17.66%.该方法测定NE和E在0.5~16×10-9 g范围内,DA在1~16×10-9 g范围内含量与峰面积比呈良好的线性关系,相关系数为0.998 5~0.999 8,低检测限分别为:NE 0.3×10-9 g,E 0.35×10-9 g,DA 0.7×10-9 g.结论:此法简单、准确、灵敏、特异性高,便于临床和实验室推广应用.

阳离子交换-高效液相色谱-电化学法测定人血浆中儿茶酚胺的浓度

目的:采用弱阳离子固相萃取小柱(WCX-SPE)优化人血浆儿茶酚胺检测实验条件,以减少血浆周量,提高实验稳定性,建立操作简单、可靠的人血浆儿茶酚胺浓度检测方法.方法:采用waters WCX固相萃取小柱提取血浆中儿茶酚胺,采用高效液相色谱-电化学检测法测定儿茶酚胺,并对其线性范围、方法回收率、提取回收率、日间日内精密度及稳定性进行考察.结果:去甲肾上腺素(NE)在50～2 000 pg·ml 1(n=6,r=0.998 5),肾上腺素(E)在50～2 000 pg·ml-1(n=6,r=0.999 3)浓度范围内线性关系良好,低检测限分别为25,50 pg·ml-1 (S/N≥3),NE、E样品的平均提取回收率分别为89.6％、91.5％,平均方法回收率分别为100.6％,99.4％,平均日间RSD分别为5.1％,4.3％,平均日内RSD分别为3.9％,3.6％.结论:采用WCX固相萃取小柱提取血浆中儿茶酚胺灵敏度高,操作简便,结果准确可靠,适合于临床诊疗需要.

HPLC/ECD测定人血小板中5-羟色胺浓度

用HPLC/ECD法测定血小板5-HT,运用Waters μBondapak C18柱,3,4二羟基苄胺(DH-BA)作内标,以0.07 mol/L乙酸钠缓冲液+乙腈为流动相(20+1),每1L缓冲液含0.05 mol/L柠檬酸、2.5mmol/L庚烷磺酸钠、0.1 mmol/LNa2EDTA,流速0.8 mL/min.DHBA和5-HT的保留时间分别为5.4和11.5 min,线性范围为0.025～1 mg/L(r=0.9997).5-HT日内RSD低于1.87%,日间RSD低于8.54%,方法回收率为100.4%±2.3%.提示本方法快速简便,灵敏准确,适用于临床基础研究.

HPLC法电化学检测阿奇霉素片的有关物质

目的:建立以高效液相色谱法电化学检测阿奇霉素片中有关物质的方法.方法:色谱柱为Gamma ARP-1/P,流动相为0.014 mol·L-1磷酸氢二钾/0.020 mol·L-1氢氧化钠(用磷酸和氢氧化钠调pH至11)-乙腈(71:29).流速为0.7 mL·min-1,柱温为40℃,进样量为50 μL,玻璃碳电极的检测电位为+900mV.结果:红霉素过氧化物、阿奇霉素脱氧化物、阿奇霉素杂质A和N脱甲基阿奇霉素进样量的线性范围分别为0.15～1.80(r=0.999)、0.09～1.08(r=0.999)、0.23～2.76(r=0.998)、0.30～3.60μg(r=0.998);平均回收率分别为98.9%(RSD=1.1%)、94.6%(RSD=5.4%)、103.4%(RSD=3.4%)、96.2%(RSD=4.3%),有关物质含量检测结果均＜0.7%.结论:本方法重现性好、灵敏度高、结果稳定准确,可用于检测该制剂的有关物质.

高效液相色谱-电化学法测定人尿液中儿茶酚胺的浓度

目的：建立测定人尿液中儿茶酚胺浓度的方法。方法：尿液样品经氧化铝提取后，以3，4-二羟基苄胺为内标，采用高效液相色谱-电化学法测定，色谱柱为Shim-Pack C18，流动相为混合溶液[每500 ml混合溶液中含离子对试剂（辛烷磺酸钠）0.5 mmol、甲醇10 ml、0.06 mmol/L二正丁胺50μl、无水乙酸钠2.0 g、柠檬酸5.5 g、乙二胺四乙酸二钠60 mg和氯化钠584.4 mg，pH＝3.5]，流速为0.8 ml/min，柱温为30℃，电化学检测器检测电压为750 mV，进样量为40μl。结果：去甲肾上腺素和肾上腺素的尿药浓度均在3.125～100 ng/ml范围内线性关系良好（r分别为0.9985和0.9992），定量下限均为3.125 ng/ml；日内、日间RSD均＜10％；方法回收率分别为99.2％～101.6％、98.9％～100.5％，提取回收率分别为63.8％～66.8％、60.5％～62.6％。结论：本方法特异性强、灵敏度较高、检测成本低，可用于人尿液中儿茶酚胺浓度的测定。

电化学检测器及其在中美欧药典中的应用与展望

对高效液相色谱中电化学检测器进行了综述,介绍了电化学检测器的基本原理、类型及应用,重点探讨了电化学检测器在美国药典、欧洲药典中的应用,同时结合中国药典,比较了中国药典相关品种的检测方法和工作,并对电化学检测器在中国药典中的应用进行了展望.

反相高效液相色谱测定动物源食品中大观霉素残留

目的 建立反相高效液相色谱法配合电化学检测器测定动物源食品中大观霉素残留.方法 用三氯乙酸匀浆抽提以脱去试样中的蛋白,然后用二氯甲烷去除试样中的脂溶性物质,再经LC-SCX阳离子固相萃取小柱净化处理,产物进行检测.流动相为离子对缓冲体系(0.02mol/L柠檬酸:0.004mol/L庚烷磺酸钠,50%NaOH调pH至6.10):乙腈(体积比为92.5:7.5),流速0.6ml/min,工作电极电压1.0V,柱温35℃,检测波长254nm.结果 大观霉素在0.01～10.0μg/ml范围内线性关系良好,相关系数R=0.99998.结论 该法简便、直接、准确.

血浆儿茶酚胺的同时提取及反向高效液相测定法

目的建立一种操作简便、高效的测定血浆中去甲肾上腺素(NA)、肾上腺素(AD)、的方法,为有关药物作用机制的研究提供实验手段.方法以有机溶剂提取,高效液相色谱-电化学检测器(HPLC-EC)测定大鼠血浆NA、AD的含量.结果测得NA、AD的绝对回收率分别为:86.3±11.6%,88.5±16.3%.线性范围0.04～4ng,批内与批间变异系数分别小于6%及7%.结论该方法具有简便、迅速、回收率较高的特点,便于应用.

大鼠脑内儿茶酚胺类递质及其代谢物的同时提取及反向高效液相测定法

目的建立一种操作简便、高效的测定脑组织中去甲肾上腺素(NA)、肾上腺素(AD)、多巴胺(DA)、3,4二羟基苯乙酸(DOPAC)及高香草酸(HVA)的方法,为有关药物作用机理的研究提供实验手段.方法以有机溶剂提取,高效液相色谱--电化学检测器(HPLC-EC)测定大鼠纹状体、皮质、下丘脑NA、AD、DA、DOPAC及HVA的含量.结果测得NA、AD、DA、DOPAC及HVA的绝对回收率依次分别为:80.3%±12.4%,86.5%±14.3%,90.3%±12.1%,89.5%±17.2%、87.6%±[13].2%.线性范围0.2～20ng,批内与批间变异系数分别小于8%及10%.结论该方法具有简便、迅速、回收率较高的特点,便于实验室应用.