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脂肪酸对牛骨骼肌卫星细胞分化的影响
目的：近年来,脂肪酸对细胞分化的影响作用一直受到广泛关注。研究发现,脂肪酸可以通过调节过氧化物酶体增殖激活受体( PPAR)或其他转录因子而调控组织分化。单不饱和脂肪酸亚油酸( LA)和油酸( OA)在促进骨胳肌细胞的增殖和分化过程中具有重要作用。多不饱和脂肪酸如花生四烯酸( AA)和二十二碳六烯酸( DHA)还可以通过改变细胞膜的脂质分布,从而促进大鼠成肌细胞的分化。然而,脂肪酸是否能够影响牛骨骼肌细胞的发育,以及脂肪酸的摄取与骨骼肌卫星细胞分化的关系,仍不清楚。方法：本研究通过向牛骨骼肌卫星细胞( muscle-derived satellite cells,MDSCs)培养体系中添加三种不同的脂肪酸(棕榈酸PA、油酸OA和二十二碳六烯酸DHA ),以探讨不同脂肪酸对牛骨骼肌卫星细胞分化的影响。结果：PA、OA和DHA作用浓度均为50 umol/L,以2%马血清为对照,诱导分化牛骨骼肌卫星细胞。分化96h后分别收集细胞,采用免疫荧光染色,实时定量PCR和Western blot技术检测细胞分化过程中相关的标志性基因MyoG( Myogenin)和MyHC( Myosin Heavy Chian)的表达变化进而探讨脂肪酸对体外培养的牛骨骼肌卫星细胞分化程度的影响；此外,通过荧光定量RT-PCR法检测脂肪酸代谢途径中关键基因CPT2( Carnitine palmi-toyltransferase 2,肉碱棕榈酰转移酶Ⅱ)、DGAT2( Diacylglycerol acyltransferase 2,二酰甘油酰基转移酶Ⅱ)和ELOVL3(Fatty acid elongase 3,脂肪酸链延长酶III)的表达变化,进而探讨脂肪酸摄取对骨骼肌卫星细胞脂肪酸代谢的影响。实验结果显示,PA、OA和DHA处理的牛骨胳肌卫星细胞能够促进肌卫星细胞的分化。3种脂肪酸处理的细胞中脂肪酸代谢中的关键基因CPT2、DGAT2和ELOVL3的表达量显著增加。结论：脂肪酸( PA、OA、DHA)能够促进牛骨骼肌卫星细胞的分化,从而为探明肌肉发育和分化的分子机制提供帮助。
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重组人睫状神经营养因子对在体和离体大鼠成肌细胞不同作用比较
目的:观察重组人睫状神经营养因子对在体和离体大鼠成肌细胞的生物学作用.方法:通过混合酶消化和差速贴壁分离纯化大鼠成肌细胞,用含有不同浓度的重组人睫状神经营养因子(rhCNTF)的分化液培养,观察成肌细胞增殖分化的改变情况.另外,采用胫前肌肌内注射rhCNTF,随后利用免疫组化的方法观察在体大鼠成肌细胞的变化情况.结果:2.5～10ng/ml rhCNTF能显著抑制亚融合成肌细胞的体外分化(P＜0.01),这种抑制作用呈量效依赖性,且其作用是可逆的.rhCNTF对在体成肌细胞前体肌卫星细胞的影响不明显,但能够使肌纤维较对照组增粗.结论:在体和离体大鼠成肌细胞对重组人睫状神经营养因子的反应性存在差异.
关键词： 重组人神经睫状营养因子 大鼠成肌细胞 免疫组化 肌卫星细胞 -
蝙蝠葛碱促进大鼠成肌细胞分化成熟及可能机制
目的 探讨蝙蝠葛碱对成肌细胞分化成熟的促进作用及可能机制.方法 培养正常大鼠的成肌细胞系(L6)在含有100ng/mL蝙蝠葛碱的培养基中,21d后,通过相差显微镜观察细胞形态的变化和肌管的形成,采用RT-PCR分析肌红蛋白(MyoD)家族中肌细胞生成素(Myogenin)和肌细胞调节因子4(muscle-specific regulatory factors 4,MRF4) mRNA的表达,采用Western-blot检测Myogenin蛋白的表达.结果 随着培养时间的延长,分散的梭形成肌细胞相互聚集,逐渐形成双核连肌管和多核连肌管并产生自律性收缩.暴露于蝙蝠葛碱后,成肌细胞聚集融合形成的肌管数目明显增加,肌管直径显著增大,并产生明显的自律性收缩(未见于同期对照组).RT-PCR和Westemn Blot测表明,成肌细胞的Myogenin和MRF4的表达水平在培养5d后达到峰值.蝙蝠葛碱处理后,Myogenin峰值表达水平持续时间显著延长,MRF4表达高峰出现延迟但表达量明显升高.结论 蝙蝠葛碱可促进大鼠肌细胞分化成熟.
