OXO-Ses对小鼠神经病理性疼痛的镇痛作用研究

目的:研究毒草碱受体(muscarinic acetylcholine receptors,mAChRs)非选择性激动剂氧化震颤素半富马酸盐(oxotremorine sesquifumarate,OXO-Ses)对神经病理性疼痛的镇痛作用.方法:6～8周雄性C57BL/6小鼠,体重20～25 g.随机分为对照组、腓总神经(common peroneal nerve,CPN)损伤组.两组分别于造模前、后测定小鼠缩足反射阈值(paw withdraw thresholds,PWTs)和静态负重实验(static weight bearing,SWB)值.CPN后3天、14天腹腔注射OXO-Ses,浓度分别为0.01 mg/kg,0.05 mg/kg,0.10 mg/kg,在注射前、注射后0.5小时和2小时检测PWTs和SWB值.结果:与对照组相比,OXO-Ses能够显著提高实验组小鼠的PWTs(P＜0.05),并改变小鼠的后足重量分布状况 (P＜0.05),呈现出剂量依赖性.结论:OXO-Ses非选择性的激活mAChRs可以减轻慢性痛小鼠的机械性触诱发痛,对神经损伤小鼠的慢性痛有一定的镇痛作用.

毒蕈碱受体--治疗药物成瘾的新靶点

毒蕈碱受体亚型介导逼尿肌细胞收缩与IP3关系的实验研究

目的探讨信使分子IP3在毒蕈碱受体亚型M3R介导逼尿肌细胞收缩中的作用. 方法 MR非选择性激动剂(carbachol)、拮抗剂(atropine)及M2R拮抗剂(methoctramine)、M3R拮抗剂(4-DAMP)刺激原代培养人逼尿肌细胞,通过[3H]掺入法,检测磷脂酰肌醇(PI)代谢产物[3H]-IP含量. 结果 [3H]-IP含量随carbachol刺激浓度增加而增加;10-9、10-8、10-7、10-6、10-5、10-4 mmol/L的4-DAMP抑制carbachol后,[3H]-IP含量分别为3 926.57±273.29、2 780.52±211.09、2 436.84±153.62、1 973.22±164.71、1372.38±141.35及1 107.98±920.45 cpm,相同浓度的atropine作用后,[3H]-IP 含量分别为 3 602.69±280.17、2 891.31±207.45、1 983.97±145.74、1 269.57±105.31、1 106.37±75.23、927.50±77.36 cpm;而相同浓度的methoctramine作用后,[3H]-IP含量分别为4462.74±360.69、3938.61±327.13、3315.45±270.36、3 063.19±246.79、2 927.37±226.45及2 836.55±241.63 cpm,两者之间差异有非常显著性意义(P<0.01),表明4-DAMP和atropine能显著抑制carbachol诱导的代谢反应,而methoctramine不能显著抑制carbachol的作用;atropine与4-DAMP的作用相比差异无显著性意义(P>0.05). 结论 M3R与PI分解产生的第二信使分子IP3密切相关.

老年心肌缺血再灌注损伤中M受体途径的作用

目的通过模拟手术过程对老年心肌与青年心肌M受体途径影响的对比研究,探讨老年心肌的缺血再灌注损伤机制.方法成年犬10只(3～4岁,A组)、老年犬10只(7～8岁,B组).常规建立犬体外循环模型.应用MPA-2000生物信号分析系统,记录LVEDP、±dp/dt.分别于复跳即刻、复跳后0.5、1h取左室心肌,测定心肌M受体密度、G蛋白含量、cGMP、鸟苷酸环化酶活性.结果 (1)在各个时段B组的LVEDP均大于A组,而A组的±dp/dt max均大于B组.在体外循环后,随着时间的推移,两组手术前后的LVEDP无明显变化,但±dp/dt max均有下降.与A组相比,B组下降更为明显.(2)在复跳0.5、1h,B组的M受体密度较A组明显升高.(3)A组的Gs复跳前后均变化不大,而Gi在复跳后则下降明显;B组中复跳后Gs较前有较大下降,而Gi则下降较少.Gi/Gs B组仍较A组明显升高.(4)在再灌注后的各个时相,B组cGMP的含量以及鸟苷酸环化酶活性明显上升.结论心脏手术后在老年心肌中由于M受体途径信号强度增强,并且与心脏功能呈负相关,从而加重了老年心肌的缺血再灌注损伤.

低浓度阿托品治疗近视的临床研究进展

阿托品是毒蕈碱受体抑制剂,1％浓度滴眼可以抑制近视的发展及眼轴的增长,但是畏光、视近模糊等常见的副作用限制了其临床应用.近期研究者逐渐将兴趣转向低浓度阿托品(小于1％浓度)的临床研究,发现低浓度阿托品滴眼可以有效延缓近视发展,比1％浓度的阿托品副作用更小,疗效也更持久稳定.

M受体及相关选择性药物研究进展

毒蕈碱受体(M受体)是体内重要的G蛋白偶联受体之一,有M1～M5五种药理学亚型,各亚型在体内的分布和功能不同,受体蛋白结构和信号转导机制也有差异.对M受体、相关选择性药物及受体-配体作用位点的研究,将为设计以M受体各亚型为靶标的选择性药物提供帮助,对临床治疗多种M受体功能紊乱的疾病,如阿尔茨海默病等具有重要意义.

眼镜蛇毒MP成分与大鼠大脑皮层及心肌M受体结合的亚型选择性研究

目的 初步了解眼镜蛇毒MP成分与M受体结合的亚型选择性.方法 制备大鼠大脑皮层组织和大鼠心肌组织两种M受体膜蛋白底物.采用放射配体结合法,分别测定眼镜蛇毒MP成分对[3H]QNB与这两种膜蛋白底物结合的抑制百分率和IC50值,分析MP与M受体结合的亚型选择性.结果 MP均能完全抑制[3H]QNB与这两种膜蛋白底物的结合.大鼠大脑皮层组中,MP的抑制行为呈两相式:第Ⅰ相的抑制率为25％,IC50=0.4 nmol ·L-1;第Ⅱ相的抑制率为100％,IC50=248.8 nmol·L-1.心肌组MP的IC50值为22.1 nmol ·L-1,约为皮层组第Ⅰ相的55倍、第Ⅱ相的1/10.结论 MP对M受体的结合具有亚型选择性.

盐酸小檗碱对毒蕈碱型受体的作用

目的:研究盐酸小檗碱对乙酰胆碱系统的影响. 方法:采用离体血管环、离体支气管螺旋体及放射配基-受体结合实验等方法.结果:较低浓度的盐酸小檗碱(Ber)对乙酰胆碱的舒张反应有浓度依赖性的增强作用;而较高浓度的Ber可浓度依赖性地直接舒张带内皮的动脉环,此作用在去内皮或阻断M-受体后被完全抑制.在豚鼠离体气管条上,Ber可引起浓度依赖性的收缩反应,而阿托品可阻断这种作用.放射配基-受体结合实验显示盐酸小檗碱可特异性与大鼠脑组织的毒蕈碱受体结合,Ki值为1.6 μmol.L-1.结论:盐酸小檗碱可激动毒蕈碱受体,从而引起血管的内皮依赖性的舒张反应及支气管的收缩.

吗啡依赖大鼠脊髓和脑干毒蕈碱受体亚型基因的表达

目的观察吗啡依赖大鼠脊髓和脑干毒蕈碱型乙酰胆碱受体m1～5的表达.方法以β-actin为内标,用RT-PCR方法检测m1～5的表达.结果吗啡依赖大鼠脊髓m1～5受体和脑干中m1和m2表达较正常对照组明显升高,注射纳洛酮1 h后脊髓m1～4和脑干m1表达较依赖组减少.东莨菪碱(0.5 mg*kg-1,ip)或呱伦西平(10 mg*kg-1,ip)明显减少吗啡戒断症状,呱伦西平处理后脊髓m1,m2,m3和m5表达较戒断对照组增加,东莨菪碱处理后脊髓m2,m3和m4表达增加.结论脊髓M受体适应性改变是吗啡戒断症状表达的生物学基础.

托特罗定对膀胱活动过度疗效及安全性临床评价

目的：评价国产托特罗定治疗膀胱活动过度的疗效和安全性。方法：采用多中心、随机、双盲、双模拟平行对照方法，实验组101例，托特罗定2mg bid，共6周；对照组105例，奥昔布宁5mg bid，共6周。于治疗前和治疗后6周测24h平均排尿次数，24h平均排尿量及24h平均尿失禁次数，比较两者的结果及药物不良反应。结果：托特罗定治疗后，24h平均排尿次数由12.16±3.44减至7.15±1.78， 24h平均每次排尿量从117.97±31.84ml增至213.23±74.72ml， 24h平均尿失禁次数从2.98±2.45减至0.06±0.31，与治疗前比较差异非常显著，与奥昔布宁比较无显著性差异。托特罗定药物不良反应发生率32.68%，中度占不良反应的27.27%；奥昔布宁分别为55.24%和39.66%，两者差异非常显著。结论：国产托特罗定与奥昔布宁比较，疗效相当，药物不良反应少，是治疗膀胱活动过度的更安全、有效的药物。

在Sf9昆虫细胞-杆状病毒系统中表达毒蕈碱型M2及M5受体重组突变体

目的 为乙酰胆碱毒蕈碱(M)受体亚型特异性的变构调节剂及基因工程的研究提供实验平台.方法 用PCR及搭桥PCR法对乙酰胆碱M2及M5受体作以下突变:①将N-糖基化位点Asp突变为Asn;②删除对蛋白酶敏感的M受体的第三个细胞内环;③在C端添加凝血酶识别位点(CMV)和6-His标记.将PCR扩增出重组嵌合蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体,制备重组杆状病毒并感染昆虫细胞表达M2/M5受体蛋白.Western印迹及放射性配体受体结合实验验证受体的正确表达及功能.结果 通过搭桥PCR,成功扩增出1018 bp的重组M2受体和1041 bp重组M5受体核酸序列;使用pUC/M13的扩增引物成功构建M2/M5重组转移载体.将重组载体质粒与线性化病毒DNA共转染昆虫细胞Sf9,制备重组杆状病毒并感染昆虫细胞,见细胞空泡样病变.Western印迹分析确定重组杆状病毒感染昆虫细胞M2/M5蛋白表达,放射性配体受体饱和实验结果表明,表达的重组受体蛋白与[3H]N-甲基-东莨菪碱具有特异性结合能力.结论 Sf9昆虫细胞能够表达M2及M5重组受体蛋白,M2及M5重组受体蛋白的病毒样颗粒可用于M受体的新药研究.

毒蕈碱受体M3的表达与呼吸道疾病

M3受体广泛分布于呼吸道平滑肌中,通过与乙酰胆碱结合而引起呼吸道收缩,腺体分泌和呼吸道重构.近年研究表明,哮喘和慢性阻塞性肺疾病炎性反应中产生的各种炎性因子,如白细胞介素1β、白细胞介素13、肿瘤坏死因子α和干扰素γ等能影响M3受体在呼吸道内的表达,使M3受体表达上调.因此,使用长效选择性胆碱能受体拮抗剂能延缓肺功能下降,在慢性阻塞性肺疾病的治疗中有重要作用.

气道高反应性的发生机制与毒蕈碱受体功能的关系

近20年来人们对支气管哮喘的认识和诊治有了飞跃的发展,但其发病率和死亡率仍不断上升.全球哮喘的治疗花费超过了艾滋病和结核的总和.近年来关于气道副交感神经毒蕈碱受体,尤其是毒蕈碱M2受体的研究引起了广泛注意,这些研究对于哮喘发病机制以及治疗有很大的意义.

有机磷农药对心血管系统的损伤

有机磷农药中毒引起的心血管系统损伤屡有报道,但与其引起的胆碱能危象、中间综合征和迟发性神经病相比,还未引起足够的重视.本文就有机磷农药中毒对心血管系统的影响作一综述.

西地那非对中枢毒蕈碱受体阻断大鼠的抗抑郁药物作用

在人类和动物中,磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂西地那非具有精神相关作用,已经用于治疗抗抑郁药相关的勃起功能障碍.但是,它对于抑郁的神经牛物学作用尚不清楚.

幼年小鼠初级听皮层第Ⅴ层锥体神经元持续性放电与毒蕈碱受体亚型关系

激活胆碱能受体结合去极化电流诱导产生的持续性放电(persistent activity,PA)是神经元产生可塑性的一种特征表现.小鼠初级听皮层(primary auditory cortex,AI)神经元PA的产生与毒蕈碱受体(即M型受体)密切相关,但其涉及的毒蕈碱受体亚型尚不清楚.本研究采用离体脑片全细胞膜片钳技术结合药理学方法,探讨幼年小鼠AI第Ⅴ层锥体神经元PA与毒蕈碱受体亚型之间的关系.结果显示,激活胆碱能受体并同时注入去极化电流可诱导锥体神经元产生PA.M1、M2和M3受体拮抗剂分别能阻断PA的产生,而M4受体拮抗剂对PA的产生没有影响.该结果表明M1、M2和M3毒蕈碱受体均参与幼年小鼠AI第Ⅴ层锥体神经元PA的形成,而M4毒蕈碱受体不参与PA的形成.

氨甲酰胆碱通过M2毒蕈碱受体增加豚鼠心肌细胞钠钙交换电流

本文旨在研究氨甲酰胆碱(carbachol,CCh)对豚鼠心肌的正性变力性机制.用Axon200A膜片钳放大器观察CCh对电压钳制下的豚鼠心肌细胞L-型钙电流(ICa)和钠钙交换电流(INa/Ca)的效应.结果表明,CCh(100μmol/L)分别使正向INa/Ca从对照组的(1.2±0.1)pA/pF增加到(2.0±0.3)pA/pF,使反向INa/Ca从对照组的(1.3±0.5)pA/pF增加到(2.1±0.8)pA/pF(P＜0.01).CCh对ICa无影响.CCh对INa/Cc的激动作用可被阿托品和methoctramine所阻断.以上结果提示,CCh对豚鼠心脏的正性变力作用是通过激动了钠钙交换,而且是M2毒蕈碱受体所介导的.

迷走神经对心室功能的调控机制研究进展

自主神经系统由交感神经系统和副交感神经系统(迷走神经)组成,二者相互拮抗,对哺乳动物心脏的功能调控具有重要的作用.副交感(迷走)神经对心房可产生变时、变传导和变力作用,但是对心室的支配及对心室的调控作用还不清楚.一直以来都存在一个误解,认为交感神经支配心脏的各个部位而副交感神经仅支配心脏的室上性组织,对心室没有支配.近年来的研究显示在一些哺乳动物的心脏上,胆碱能神经在心室也有分布,且对左心室的功能有重要的调控作用.本文从解剖及组织化学、分子生物学和功能学三个方面阐述迷走神经对心室的支配及调控证据,并对心室收缩功能的迷走神经(毒蕈碱)调控及其信号转导途径进行综述.

脊髓毒蕈碱受体与镇痛

脊髓胆碱能系统在伤害性信息的传导过程中发挥重要作用.本文介绍脊髓毒蕈碱受体与痛觉调节,并对鞘内注射新斯的明镇痛的作用机制以及动物和临床研究的现状作了简介.

吗啡与新斯的明注入硬膜外腔术后镇痛的对照研究

传统的硬膜外注入吗啡镇痛已取得了明显的作用,但副作用也显而易见[1].近年来在研究脊髓非阿片受体镇痛方面取得了较大进展[2],放射自显影研究证实,毒蕈碱受体存在于脊髓背侧,新斯的明硬膜外腔注入可产生镇痛作用.本研究比较硬膜外腔注入吗啡与新斯的明镇痛的作用与副作用.资料与方法