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去整合素和金属蛋白酶10与阿尔兹海默病的研究进展
去整合素和金属蛋白酶（ a disintegrin and metalloprotease ， ADAM）家族为一个包含了三十多个成员的家族，它们在细胞黏附、细胞迁移、白细胞募集、炎症、蛋白水解等方面发挥各自的作用［1］。 ADAM10为ADAM家族中一员，早从牛的脑髓鞘膜中分离纯化所得，当时被称为哺乳动物整合素金属蛋白［2］，其后实验发现其为细胞质髓鞘碱性蛋白酶［3］；随后的研究显示 AD-AM10在人的大脑［4］及外周结构［5］均有表达；而在过表达AD-AM10 cDNA的HEK293细胞中首次证实ADAM10具有切割APP的α分泌酶活性［6］。其后，Postina等［7］将阿尔兹海默病（Alzhei-mer disease，AD）小鼠与ADAM10转基因小鼠杂交，发现小鼠脑内淀粉样斑块明显减少，而α分泌酶切割淀粉样前体蛋白（ amy-loid precursor protein ，APP）所产生的可溶性片段APPsα增多，杂交小鼠的学习及记忆能力均有所增强；与此相反，ADAM10突变小鼠的APPsα减少，淀粉样斑块增多，学习能力降低［8］。上述结果表明，ADAM10是一种功能性的分泌酶，其对APP的加工可抑制淀粉样斑块的形成。
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茯苓发酵液中蛋白质的电泳分离与质谱分析
目的 研究茯苓发酵液中的蛋白质,对其进行分离与鉴定.方法 采用液体发酵获得茯苓发酵液,Bradford法测定样品中蛋白质的质量浓度,有机酸沉淀法提取蛋白质,SDS-PAGE电泳分离蛋白质,蛋白质电泳片段进行胶内酶解、质谱分析和搜库鉴定.结果 茯苓发酵液中蛋白质的质量浓度为74.01 μg/mL,其相对分子质量(M)主要分布在2.8×104～1.3×105.通过质谱鉴定从茯苓发酵液中鉴定得到了51种蛋白质,如过氧化氢酶、蛋白激酶、碱性蛋白酶、糖化酶和溶菌酶等.结论 茯苓发酵液中蛋白质种类丰富,是开展茯苓蛋白质研究及开发茯苓发酵保健食品与饮料的理想材料.
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酪蛋白抗凝血肽的制备及其体外抗凝血、溶栓作用研究
目的 研究抗凝血肽的制备、分离方法及其体外抗凝血、溶栓效果.方法 用木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶对酪蛋白进行4酶混合水解制备抗凝血肽,以固定化凝血酶对抗凝血肽进行萃取,用新西兰兔进行体外抗凝血、溶栓实验.结果 实验确定的抗凝血肽制备条件为酪蛋白质量浓度15％,水解每克酪蛋白的木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶用量分别为1 500、2 400、1000、1250U,水解温度50℃,pH 7.0,水解时间4h.固定化凝血酶萃取抗凝血肽的初始浓度6ATU/mL,萃取温度30℃,pH 5.0,萃取时间30 min.反萃取温度30℃,pH 7.6,反萃取时间40 min.抗凝血肽经高效体积排阻色谱分析,主要成分分子大小与马尿酰-组氨酰-亮氨酸相当.体外抗凝血时间超72 h,溶栓时间24 h.结论 酪蛋白抗凝血肽主要成分为3肽,体外抗凝血及溶栓实验效果良好.
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鹿胎保健食品原料的工艺研究
目的：优选出双酶水解鹿胎原料效果佳的生产工艺。方法：以水解度为指标，通过单因素试验，分别考察酶解温度、酶解时间、pH值、酶底比、料液比对蛋白酶酶解鹿胎的影响。结果：双酶水解佳条件为碱性蛋白酶佳酶解条件，即分别加入酶底比为1∶80的碱性蛋白酶与胰蛋白酶，料液比1∶40，pH值为9.0，温度45℃，酶解4h。结论：优选方法稳定，操作简便，提取率高。
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马鹿茸酶解工艺优选
目的:优选Alcalase AF 2.4L碱性蛋白酶水解马鹿茸生成多肽的工艺.方法:采用L9(34)正交试验,通过甲醛滴定法测得多肽得率为评价指标,考察酶解温度、加酶量、PH和酶解时间等因素对酶解工艺的影响.结果:酶解过程在温度60 ℃,PH7.5,加酶量4％,酶解1.5 h后多肽获得率高.结论:分析正交试验结果,优选马鹿茸多肽佳酶解工艺.
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桑椹提取物对胰蛋白酶的抑制作用及对小鼠胰腺组织的损伤
目的 研究桑椹对胰蛋白酶的抑制作用及其对小鼠胰腺组织的影响.方法 体外采用Na-苯甲酰-DL-精氨酸-对硝基苯胺(BAPNA)法研究桑椹提取物(ME)对胰蛋白酶的抑制作用,将桑椹提取物分别经丙酮及硫酸铵分级沉淀,并测定各沉淀组分对胰蛋白酶的抑制作用,用酶解法失活桑椹提取物中的胰蛋白酶抑制剂(TI),得到胰蛋白酶抑制剂失活的桑椹提取物(T-ME),并通过动物试验进一步研究桑椹提取物及胰蛋白酶抑制剂失活的桑椹提取物对小鼠胰腺组织的影响.结果 桑椹提取物(ME)对胰蛋白酶表现出较强的抑制作用;丙酮沉淀组分对胰蛋白酶的抑制作用远远强于硫酸铵沉淀组分;桑椹提取物(ME)中的TI可经碱性蛋白酶失活;体内实验显示桑椹提取物(ME)高剂量组可致幼年小鼠胰腺组织氧化损伤及结构损伤,而胰蛋白酶抑制剂失活的桑椹提取物(T-ME)高剂量组未见相应损伤.结论 桑椹中含有蛋白质类TI,很可能为Bowman-Birk型;碱性蛋白酶可以有效失活桑椹中的TI;桑椹中TI可造成幼年小鼠胰腺组织损伤,损伤机制可能与胰腺组织产生的氧化应激有关.
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2709碱性蛋白酶酶活测定的影响因素研究
目的：研究福林法测定蛋白酶酶活时的影响因素。方法测定2709碱性蛋白酶酶活，对比分析了各种常见差异造成的影响。结果酪蛋白、滤纸的选择及样品稀释液配制时间对酶活测定影响较大，福林试剂、样品溶解方式等影响不明显，而酶活计算方法的不同也会带来差异。结论检测人员在检测前应明确采用的方法、试剂及计算方法。
