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反义miR-21抑制宫颈鳞状细胞癌CaSki细胞系生长体外研究
目的 探讨敲低miR-21表达对宫颈鳞状细胞癌细胞系CaSki增殖活性与凋亡的影响.方法 实时荧光定量RT-PCR法检测正常宫颈组织、CaSki细胞转染前后miR-21的表达水平,采用MTT法、流式细胞术等技术检测转染后CaSki细胞增殖活性与凋亡的变化.结果 miR-21在CaSki细胞中表达水平为正常宫颈组织的3.25倍.CaSki细胞中转染反义miR-21(AS-miR-21)可显著抑制其表达.转染后24 h、48 h、72 h、96 h,MTT检测提示10 nmol与20 nmol AS-miR-21转染组中细胞增殖率较对照组明显降低(P<0.05),自48 h抑制作用显现,且随着转染浓度增加,抑制作用增强,呈现剂量依赖性.细胞周期检测结果显示AS-miR-21转染组的G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少(P<0.05).Annexin Ⅴ联合PI技术检测细胞凋亡,结果显示AS-miR-21转染组早期凋亡细胞率[(23.40±2.16)%]明显高于空白对照组[(5.1±2.16)%]、阴性对照组[(6.87±0.55)%](P＝0.000).结论 AS-miR-21转染可敲低CaSki细胞中miR-21表达,并有效抑制细胞增殖活性,促进细胞凋亡.
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钙结合蛋白S100A8/A9对宫颈癌细胞系CasKi细胞F-肌动蛋白的影响
目的 探讨钙结合蛋白S100A8/A9复合物对人宫颈癌上皮细胞癌细胞系CasKi 细胞骨架及表面超微结构的影响. 方法应用20 μg/ml S100A8/A9复合物作用于CasKi细胞,对细胞骨架F-肌动蛋白进行染色,应用快速共聚焦荧光显微镜观察细胞骨架的改变.在生理条件下,应用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)对活体细胞进行高分辨成像,观察细胞表面超微结构及应力纤维. 结果 S100A8/A9复合物作用24 h后宫颈癌细胞系CasKi细胞的F-肌动蛋白排列出现紊乱,主要分布于细胞的周边,细胞中央F-肌动蛋白含量明显减少.CasKi细胞经过20 μg/ml S100A8/A9蛋白复合物处理前细胞核部位F-肌动蛋白光密度为92.42±5.16,经过S100A8/A9 72 h处理后,F-肌动蛋白的光密度降为57.67±3.70,两者相比较差异具有显著的统计学意义(t=5.268,P=0.000).AFM成像显示S100A8/A9复合物作用后细胞边缘卷曲,高度增加,伪足减少,细胞膜下应力纤维结构遭到破坏.结论 S100A8/A9蛋白复合物可以对宫颈癌细胞系CasKi细胞表面的超微结构及应力纤维产生影响,并且这种影响主要是通过肌动蛋白的重新分布实现的.
关键词： 原子力显微镜 钙结合蛋白S100A8/A9 CasKi细胞 宫颈癌 F-肌动蛋白 -
不同温度热疗对宫颈癌Caski细胞坏死和凋亡的分析
目的 探讨不同温度热疗对宫颈癌Caski细胞坏死和凋亡的影响. 方法 采用水浴对宫颈癌Caski细胞行43 ℃,45 ℃,47 ℃实验组和37 ℃对照组热疗,四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡和坏死率,免疫组化检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达. 结果 45 ℃,47 ℃组的细胞增殖抑制率在24 h、48 h、72 h、96 h分别为76.11%±5.32%、81.08%±4.03%、74.71%±3.78%、72.16%±4.75%和88.57%±3.77%、91.33%±2.43%、91.09%±1.17%、92.05%±1.67%,明显高于43 ℃组的26.57%±3.46%、25.49%±2.76%、22.80%±3.16%、26.87%±4.01%(q=10.41,18.23,14.53,13.57,P＜0.05;q=14.41,21.62,16.03,16.01,P<0.05).45 ℃与47 ℃组细胞增殖抑制率在24 h、72 h、96 h的差异无显著性(q=3.01,1.49,2.44,P＞0.05).45 ℃组的细胞凋亡率高,为12.82%±1.77%,与其他各组之间的差异具有显著性(F=18.69,P＜0.05).47 ℃组的细胞坏死率高,为39.15%±5.67%,各组之间的差异均有显著性(F=69.16,P＜0.05).PCNA的表达随着温度的增加而降低,45 ℃,47 ℃组的平均光密度值(average optical density,AOD)分别是0.22±0.02、0.21±0.01,与37 ℃对照组0.28±0.02相比差异具有显著性(q=4.75,5.76,P＜0.05). 结论 45 ℃及以上的热疗能够明显抑制Caski细胞的增殖,增加凋亡和坏死率,降低PCNA的表达.
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阿司匹林对宫颈癌细胞系Caski的生长抑制作用
目的探讨阿司匹林对宫颈癌细胞系Caski作用.方法利用细胞计数法对宫颈癌细胞系Caski细胞进行活细胞计数,利用流式细胞仪检测细胞DNA含量.结果阿司匹林对宫颈癌细胞系Caski细胞的抑制呈剂量依赖性,在1-5 mM浓度范围内,生长抑制率为20%～86%.阿司匹林作用后的Caski细胞呈现出G1和G2期细胞数目增加,而S期细胞数目减少的趋势.结论阿司匹林对宫颈癌细胞系Caski有抑制作用.
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加温对宫颈癌CaSki细胞Survivin表达影响的研究
目的:探讨不同温度热疗后宫颈癌CaSki细胞中Survivin的表达.方法:采用实时荧光定量PCR技术和蛋白质印迹法,检测45℃、47℃实验组和37℃对照组宫颈癌CaSki细胞中Survivin的表达.结果:Survivin mRNA在37℃、45℃和47℃处理后24 h的表达倍数分别为1、0.707±0.089和0.814±0.068,F=114.48,P＜0.001.Survivin蛋白在对照组呈高表达,在45℃和47℃的表达明显减弱甚至完全缺失,F=14 355.4,P＜0.001.结论:＞45℃的热疗可以在mRNA的水平抑制宫颈癌CaSki细胞中Survivin表达,导致Survivin蛋白表达降低甚至完全缺失.
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DEK基因沉默对宫颈癌CaSki细胞增殖和凋亡影响的研究
目的:通过观察DEK基因沉默后对CaSki细胞增殖、细胞周期及凋亡影响,探讨DEK原癌基因siRNA对宫颈癌细胞的影响和机制.方法:将DEK siRNA真核表达载体转入CaSki细胞,转染48 h后,采用MTT法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期改变情况.结果:与对照组和未转染组相比,转染psiRNA-hHDEK组CaSki 细胞增殖的抑制率和凋亡率均增高,分别为53.2%和(13.84±3.19)%,P值分别为0.038和0.002;psiRNA-hHDEK转染组G0/G1期细胞比率(82.65±5.23)较对照组(74.36±7.49)和未转染组(70.25±5.11)增多,差异有统计学意义,P=0.003;psiRNA-hHDEK转染组细胞增殖指数(17.35%)明显低于未转染组(29.75%)和对照组细胞(25.64%),差异有统计学意义,P=0.02.结论:DEK基因抑制可能诱导CaSki细胞凋亡,并能影响肿瘤细胞内DNA的复制和合成,抑制细胞的正常分裂,从而抑制细胞增殖.
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雷公藤内酯醇对人宫颈癌CaSki细胞株的体外作用研究
目的 探讨雷公藤内酯醇(TPL)对人宫颈癌CaSki细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT比色法检测不同浓度(0、5、10、20ng/ml)TPL作用24、48、72h后对CaSki细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,细胞免疫化学法检测Ki-67及p53蛋白表达的改变.结果 倒置相差显微镜脱察可见TPL处理后细胞皱缩变圆变粗糙,体积缩小,且不断地脱落悬浮于培养液中,数量减少,细胞间隙增大,且随药物浓度增加及作用时间延长,这种变化趋于明显.5、10、20ng/ml TPL在体外对CaSki细胞的生长具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖方式(P＜0.01).免疫细胞化学检测显示TPL作用后Caski细胞Ki-67及p53蛋白表达下调,且呈剂量、时间依赖方式(P＜0.01).结论 TPL可抑制CaSki细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制癌细胞Ki-67及p53蛋白表达有关.
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顺铂诱导人宫颈鳞癌细胞Caski细胞凋亡的分子机制
目的 研究顺铂对人宫颈癌Caski细胞体外增殖抑制作用及凋亡的影响,探究顺铂诱导宫颈鳞癌细胞凋亡的分子机制.方法 运用体外细胞培养,顺铂以不同浓度(20、10、5、2、1 μg/ml)作用于人宫颈癌Caski细胞.采用噻唑蓝(MTT)法测定顺铂对细胞杀伤率;用流式细胞检测法测定细胞周期时相改变及细胞凋亡率;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNA Ladder 现象;Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2等表达;荧光染色观察细胞线粒体膜电位的改变.结果 顺铂对人宫颈癌Caski细胞有较强的抑制作用,有明显的时间和剂量依赖性;可使Caski细胞G2/M期比例明显下降(P<0.01),S期比例升高(P<0.01);诱导细胞凋亡发生;顺铂作用Caski细胞后,Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,Caspase3活化,线粒体膜电位改变.结论 顺铂在体外可有效抑制人宫颈癌Caski细胞增殖,可能通过影响肿瘤细胞DNA合成,改变细胞周期时相分布、诱导凋亡发挥抑制细胞增殖作用,其凋亡分子机制与Bcl-2家族表达调控,线粒体膜跨膜电位下降的线粒体参与凋亡途径相关.
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CXCR4-siRNA逆转录病毒载体对宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的抑制作用
目的:构建针对趋化因子受体CXCR4的RNA干扰逆转录病毒载体,检测由逆转录病毒介导的RNA干扰对人宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的抑制作用.方法:人工合成CXCR4特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段,将其插入带有绿色荧光蛋白(EGFP)的逆转录病毒载体质粒pSOS,测序正确后进行重组,转染PT67细胞包装成病毒,收获病毒上清用其转染Caski细胞,采用实时定量PCR和Western blot分别从mRNA水平和蛋白水平检测其对Caski细胞CXCR4表达的抑制作用.结果:成功构建pSOS-siCXCR4逆转录病毒载体,筛选出高效抑制序列,与对照组比较,在Caski细胞的mRNA水平,CXCR4-siRNA在24h、48h和72h对CXCR4 mRNA表达的抑制率分别为29.9%、56.8%和62.8%,而在蛋白水平对CXCR4蛋白的抑制率分别为43.6%、49.6%和62.9%.结论:pSOS-HUS-siCXCR4干扰载体可以有效抑制Caski细胞中CXCR4表达.
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转染HPV16E6基因人树突状细胞疫苗的制备及生物学特性
目的:制备来源于人外周血并转染HPV16E6基因的树突状细胞(DC)疫苗,检测其细胞形态、分子表型及诱导的免疫效应.方法:细胞因子扩增人外周血DC,Lipofectamine转染HPV16E6制备DC疫苗.动态形态学观察,免疫细胞化学及流式细胞术检测分子表达,体外诱导并测定CTL活性.结果:转染DC呈形态迥异的多突起状,其E6蛋白、CD80、CD86和CD83分子的表达率依次为47.3%、82.5%、79.8%和85.7%,诱导杀伤Caski细胞的活性明显高于对照组(P＜0.01).结论:转染DC疫苗保持了功能成熟DC的形态特征,且内源性表达E6蛋白,能诱导高效的特异性抗肿瘤免疫应答.
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力达霉素诱导人宫颈癌Caski细胞发生免疫原性细胞凋亡
目的：：探讨抗肿瘤药物力达霉素能否抑制人宫颈癌Caski细胞增殖并且诱导Caski细胞发生免疫原性细胞凋亡。方法：MTT比色法检测Caski细胞增殖；Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测Caski细胞凋亡。 Western blot 分析细胞中Bax和Bcl-2的表达；免疫荧光流式细胞术检测细胞凋亡后细胞膜上钙网蛋白的表达。结果：力达霉素抑制Caski细胞的增殖，具有时间和剂量依赖性；5μg/L的力达霉素作用Caski细胞48 h后，肿瘤细胞凋亡率为11.5%；Bax表达量显著增加，而Bcl-2含量明显减少(P<0.05)；细胞膜表面钙网蛋白表达高达67.2%，显著高于对照组的2.31%。结论：力达霉素能够有效抑制人宫颈癌Caski细胞增殖，其作用机制与线粒体途径诱导细胞凋亡相关，同时促使钙网蛋白转移到Caski细胞膜表面表达，可能具有诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞凋亡的能力。
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胡桃醌对宫颈癌caski细胞的细胞毒作用的研究
目的：探讨胡桃醌对宫颈癌caski细胞增殖的影响。方法将宫颈癌caski细胞传代培养至对数生长期，分组加入不同浓度的胡桃醌，并设空白对照组，用MTT比色法观察胡桃醌对体外培养的宫颈癌caski细胞生长的抑制作用，光学显微镜观察细胞形态学变化。结果 MTT比色法测定显示，胡桃醌作用于宫颈癌caski细胞后可以抑制其增殖且呈剂量依赖性。结论胡桃醌能抑制体外培养的宫颈癌caski细胞的增殖。
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S100A8/A9对人宫颈癌CasKi细胞增殖和侵袭的影响
目的：研究 S100A8/A9（为钙结合蛋白 A8和钙结合蛋白 A9形成的异源二聚体）对人宫颈癌 CasKi 细胞增殖和侵袭转移的影响，以初步探讨S100A8/A9是否有抑制宫颈癌CasKi细胞增殖和侵袭转移能力的作用。方法：体外培养人宫颈鳞癌CasKi细胞系细胞，取10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml三种不同浓度S100A8/A9和PBS分别处理第4代CasKi细胞，采用噻唑蓝（MTT）比色法和Transwel 迁移实验检测处理前后CasKi细胞增殖能力和迁移能力的变化，并作统计学分析。结果：⑴MTT比色法实验结果显示：10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml组CasKi细胞增殖能力明显减弱（P﹤0.01）；其中48小时组，20μg/ml抑制率大。⑵迁移实验结果显示：CasKi细胞迁移能力下降（P<0.01）。结论：⑴S100A8/A9对宫颈癌 CasKi细胞有增殖抑制作用，以浓度为20μg/ml、作用时间为48小时组抑制作用强；⑵S100A8/A9具有减弱宫颈癌CasKi细胞迁移能力的作用，并且该作用随着浓度的增加而增强。
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siRNA靶向Twist基因对宫颈癌Caski细胞化疗敏感性的影响研究
目的：沉默宫颈癌细胞中的Twist基因，并予紫杉醇作用，研究其增殖、克隆、凋亡的情况，揭示Twist基因是否引起宫颈癌细胞紫杉醇耐药。方法：1.体外培养宫颈癌Caski细胞，利用Lipofectamine TM 2000将各组siRNA转入宫颈癌Caski细胞中，荧光定量PCR检测Twist mRNA表达，筛选出沉默Twist基因效果佳siRNA；瞬时转染Caski细胞，予1umol/L 浓度紫杉醇溶液作用，MTT法检测细胞半数抑制浓度(IC50)；流式细胞学术检测细胞凋亡情况。结果：在1umol/L（IC50）紫杉醇作用各组Caski细胞不同时间后，si-Twist 组细胞生长抑制率明显高于NC-Twist组及Mock组（p<0.05）：1umol/L紫衫醇作用后, si-Twist组、NC-Twist组凋亡率分别为43.21±6.19％、26.16±5.89％，si-Twist 组凋亡率明显高于NC-Twist组，其差异显著（p<0.05结论：Twist基因在Caski细胞中高表达。沉默Twist基因，予紫杉醇作用后，可抑制Caski细胞增殖及克隆，促进其凋亡，从而提高其化疗敏感性。
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腺病毒载体介导的HPV16E7基因沉默及其对宫颈癌CaSki细胞的影响
目的:构建利用RNA干扰技术沉默HPV16E7基因的腺病毒载体,并探讨其对人宫颈癌细胞系CaSki细胞增殖的影响,以及腺病毒载体在宫颈癌基因治疗中的可行性.方法:利用腺病毒载体介导的RNA干扰对CaSki细胞中HPV16E7蛋白的表达进行抑制.显微镜观察细胞病变情况.MTT实验用来检测腺病毒载体感染的CaSki细胞的增殖情况.结果:成功构建了用以介导CaSki细胞中HPV16E7基因沉默的腺病毒载体.腺病毒感染后的CaSki细胞发生典型病理变化,HPV16E7基因表达受到明显抑制,细胞分裂明显减慢.结论:腺病毒载体介导的RNA干扰能够特异性的沉默HPV16E7基因,抑制CaSki细胞的增殖,为腺病毒载体用于宫颈癌基因治疗的可行性提供了依据.
关键词： 宫颈癌 HPV16 E7基因 腺病毒载体 RNA干扰 CasKi细胞 -
miR-140靶向抑制PD-L1表达增强宫颈癌HeLa和Caski细胞对奥沙利铂的敏感性
目的:探究miR-140能否通过靶向抑制程序性细胞死亡蛋白-1 (programmed death-1,PD-L1)表达增强宫颈癌(cervical cancer,CC)细胞对奥沙利铂的敏感性.方法:采用qPCR检测miR-140在人正常宫颈细胞、CC细胞株及其奥沙利铂耐药细胞株中的表达情况;采用miR-140模拟物转染细胞,CCK-8法检测CC正常细胞株及其奥沙利铂耐药细胞株的增殖情况、克隆形成实验检测细胞的克隆形成率.通过Starbase及TargetScan在线分析软件预测miR-140与PD-L1的靶向结合位点,并通过双荧光素酶报告基因验证miR-140与PD-L1的靶向结合关系.采用AnnexinV FITC/PI双染色法和Wb法分别检测过表达miR-140或同时过表达PD-L1,且在使用奥沙利铂处理后CC细胞的凋亡、迁移及凋亡相关蛋白的表达情况.建立裸鼠CC移植瘤模型,检测miR-140加强肿瘤对奥沙利铂处理敏感性的效果.结果:miR-140在奥沙利铂耐药性CC细胞中表达显著下调(P＜0.01),过表达miR-140能够明显上调奥沙利铂耐药CC细胞对奥沙利铂的敏感性(P＜0.05),抑制CC细胞的增殖及克隆形成(均P＜0.01).miR-140与PD-L1 3'-UTR靶向结合并抑制其表达.过表达miR-140显著促进CC细胞的迁移及凋亡(P＜0.01),过表达miR-140的同时过表达PD-L1明显减弱了miR-140对CC细胞迁移的抑制及细胞凋亡的促进作用(均P＜0.05).小鼠异体移植瘤模型验证了miR-140促进肿瘤对奥沙利铂的敏感性.结论:miR-140通过靶向抑制PD-L1表达增加CC细胞对奥沙利铂的敏感性,上调miR-140或抑制PD-L1的表达再与奥沙利铂联合处理有可能作为奥沙利铂耐药CC治疗的新策略.
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抑制多胺调节因子-1表达增强地塞米松对人宫颈癌细胞的抗肿瘤活性
目的:探讨在人宫颈痛Caski细胞中抑制多胺调节因子-1 (polyamine-modulated factor,PMF-1)表达对糖皮质激素类药物地塞米松(dexamethasone,DEX)抗肿瘤作用的影响.方法:设计合成靶向人PMF-1基因的siRNA,Western blotting法鉴定其对Caski细胞PMF-1中表达的影响.用DEX处理PMF-1表达抑制的Caski细胞和对照细胞,然后分析PMF-1表达下调是否影响瘤细胞对DEX的敏感性.MTT法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,Westemblotting法测定糖皮质激素受体(glucocorticoids receptor,GR)的表达水平,高效液相色谱法分析细胞内的多胺含量.结果:用靶向PMF-1基因的siRNA瞬时转染Caski细胞能显著性下调细胞中PMF-1蛋白的表达水平.与对照细胞相比,用DEX处理PMF-1表达下调的Caski细胞能更有效地抑制细胞增殖(P＜0.01),上调细胞内GR表达水平(P＜0.01),并显著抑制细胞分裂导致G2周期阻滞(P＜0.01),同时能显著性地降低细胞内的多胺水平(P＜0.01).结论:抑制PMF-1表达可增强DEX对人宫颈癌细胞的抗肿瘤活性,其机制可能与降低细胞内多胺水平和增强细胞周期阻滞相关.
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CPC/CMC-CD55sp纳米微球对宫颈癌Caski细胞的靶向杀伤作用
目的:制备一种新型C-藻蓝蛋白(C-phycocyanin,CPC)/羧甲基壳聚糖-CD55配体肽(carboxymethyl chitosan-CD55-specific ligand peptide,CMC-CD55sp) (CPC/CMC-CD55sp)纳米微球,并探究其对宫颈癌Caski细胞的靶向治疗作用.方法:采用离子交联法制备新型CPC/CMC-CD55sp纳米微球,通过透射电镜(DLS)和红外光谱仪(FTIR)观察纳米微球的表征,Western blotting和流式细胞术检测CD55在Caski细胞和成纤维(L-929)细胞表面的表达情况,CCK-8法检测纳米微球对Caski细胞增殖的影响,流式细胞术和荧光显微镜检测纳米微球被细胞摄取情况,Western blotting和流式细胞术检测纳米微球对Caski细胞凋亡相关信号蛋白和凋亡率的影响,溶血试验测定药物的生物安全性.结果:成功制备新型CPC/CMC-CD55sp纳米微球,其形态良好、直径分布均匀,CD55在宫颈癌细胞Caski表面高表达而在小鼠L-929细胞表面低表达(P＜0.01).纳米微球能靶向、高效地到达Caski细胞并被摄入细胞;其在人外周血中溶血作用微弱,且在安全范围;其对Caski细胞的增殖具有明显的抑制作用并且能够诱导Caski细胞凋亡(P＜0.05或P＜0.01).结论:新型CPC/CMC-CD55sp纳米微球能够靶向抑制宫颈癌Caski细胞的增殖并诱导其凋亡,具有较好的安全性,为海洋抗肿瘤药物的研发提供了新思路.
关键词： 藻蓝蛋白 羧甲基壳聚糖 CD55特异性配体肽 纳米微球 CasKi细胞 -
树突状细胞疫苗的制备及其体外诱导细胞毒性T淋巴细胞对宫颈癌CaSki细胞的杀伤作用
目的:制备树突状细胞(dendritic cells,DCs)疫苗并观察其在体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocytes,CTLs)对宫颈癌CaSki细胞的杀伤效应.方法:分离培养小鼠未成熟DCs,FCM检测小鼠未成熟DCs表面标志物CD40、CD86、主要组织相容性复合体-Ⅱ (major histocompatibility complex-11,MHC-11)和CD11c;将己成功构建的携带人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPn 16 E6E7基因的重组腺病毒pAd-E6E7感染体外培养的小鼠未成熟DCs,提取CaSki细胞裂解物负载DCs,制备DC疫苗,激光共聚焦显微镜下观察pAd-E6E7感染的小鼠未成熟DCs绿色荧光蛋白表达,Western印迹法检测E6蛋白的表达:DCs疫苗诱导产生CTLs后与CaSki细胞共培养,CCK8 (cell counting kit8)法检测其对CaSki细胞的杀伤效应.结果:成功分离培养了小鼠未成熟DCs,并制备获得了HPV16E6E7特异性DCs疫苗.DCs疫苗诱导产生的CTLs对CaSki细胞具有杀伤作用,pAd-E6E7感染组对CaSki的杀伤效应明显高于CaSki细胞裂解物负载组及未处311-DCs组(P＜0.05).结论:以携带HPV16E6E7基因的重组腺病毒感染DCs制备基因修饰的DCs疫苗,具有诱导CTLs体外杀伤子宫颈癌CaSki细胞的作用.
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短发夹状RNA抑制子宫颈癌CaSki细胞HPV 16 E7基因的研究
目的:研究短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)构建的人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16 E7siRNA表达载体转染宫颈癌细胞株CaSki细胞后,在体内外对CaSki细胞E 7基因的抑制作用.方法:利用脂质体将构建有HPV16 E7特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)的表达载体P1、P2、P3转染CaSki细胞,以实时荧光定量RTPCR及流式细胞仪检测不同时间点E7 mRNA和蛋白的变化,并将载体P1转染后的细胞接种到裸鼠皮下,4周后观察裸鼠体内皮下移植瘤体积和质量的差异,并用免疫组化检测瘤体组织中E7蛋白的表达变化.结果:表达载体P1、P2、P3均能抑制CaSki细胞E7 mRNA和蛋白的表达.其中载体P1抑制作用强,在抗性克隆形成后1周,对E7 mRNA和蛋白的抑制率分别为92.86%、84.21%;在抗性克隆形成后4周,抑制率仍分别为68.95%、62.50%.在接种后4周载体P1组裸鼠体内皮下移植瘤的体积和重量明显小于空载体组和对照组,同时E7蛋白的表达也被有效抑制,抑制率为74.75%.结论:构建有shRNA的E7 siRNA表达载体在体内外可明显抑制E7基因的表达.
