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CDK2干扰RNA对人脑胶质瘤细胞质蛋白质组的影响
目的 构建人CDK2的干扰RNA真核表达载体,稳定转染人脑胶质细胞瘤SHG44细胞,经RT-PCR检测后,运用双向电泳-图像分析-质谱技术研究人脑胶质瘤细胞质蛋白质组的改变,探讨CDK2在SHG44细胞中的作用,为人脑胶质瘤的发生、发展的研究及诊断与治疗提供有价值的资料.方法 (1)构建CDK2干扰RNA真核表达载体并用双酶切和测序鉴定.(2)G418筛选阳性转染细胞克隆,制备稳定转染的SHG44细胞系.(3)通过RT-PCR比较转染后CDK2 mRNA的表达量.(4)双向凝胶电泳-质谱技术-数据库搜索,比较转染前后细胞质蛋白质组的变化.结果 (1)成功构建了CDK2干扰RNA真核表达载体PGPU6/GFP/Neo-CDK2-1.(2)获得稳定转染细胞系,命名为PCDK2-1-SHG44细胞.(3)通过双向电泳-图像分析-质谱技术得到细胞质未见表达的蛋白质5个,包括醛缩酶A、波形蛋白等蛋白质.结论 成功建立稳定转染CDK2干扰RNA的SHG44细胞系.质谱鉴定得到的这些差异表达的蛋白质涉及细胞的增殖、细胞凋亡的信号转导调节、正常细胞的恶性转化及发育调控以及肿瘤的发生、发展和耐药性形成.
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小鼠白细胞免疫球蛋白样受体2干扰RNA对树突状细胞表面CD11c、CD80和CD86的影响及意义
目的：探讨小鼠树突状细胞（DC）表面白细胞免疫球蛋白样受体2（LILRB2）改变对DC的CD11c、CD80和CD86表型的影响及意义。方法应用20 ng/ml重组小鼠粒细胞集落刺激因子（rGM-CSF）＋20 ng/ml IL-4刺激小鼠骨髓细胞生长，隔日进行细胞换液，第5天实验组转染LILRB2受体干扰RNA，空白对照组转染空质粒，对照组单纯换液。培养过程中观察细胞形态学变化，并于转染72 h后，光镜下观察DC形态，用流式细胞仪测定细胞表面CD11c、CD80和CD86分子表达。结果光镜下对照组与实验组均可见 DC 细胞形态，流式细胞仪测定实验组 CD11c （0.662±0.174）（n=12）与空白对照组 CD11c（0.675±0.237）和对照组（0.688±0.076）分子表达无明显差异（P＞0.05）。实验组 DC 细胞表面 CD80（0.626±0.060）较空白对照组 CD80（0.406±0.163）（n=12）和对照组CD80（0.409±0.100）表达均增加（P＜0.05）。实验组DC细胞表面CD86（0.730±0.102）较空白对照组CD86（0.497±0.278）和对照组CD86（0.368±0.073）表达均增加（P＜0.05）。结论应用LILRB2受体干扰RNA不影响DC细胞表面CD11c分子表达，而增加细胞表面CD80和CD86分子表达。细胞表面CD80和CD86分子作为免疫反应的重要协同刺激分子在抗原提呈细胞表面表达升高，则激活T细胞免疫反应的能力增强。
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新靶点细胞周期蛋白E干扰RNA对人脑胶质瘤细胞增殖及侵袭的影响
目的 探讨新靶点细胞周期蛋白E干扰RNA对人脑胶质瘤细胞的增殖及侵袭转移能力的影响.方法 构建4个新靶点的Cyclin E干扰RNA的真核表达载体作为实验组(1至4组),同时设立U251人脑胶质瘤细胞为对照组(U251组).对实验组用双酶切和碱基序列测定的方法鉴定载体构建成功与否,转染载体到胶质瘤U251细胞株,通过RT-PCR的结果检测转染后Cyclin E mRNA表达量.对实验组及U251组用MTT法检测细胞增殖能力的变化,用Transwell小室法检测侵袭能力的变化. 结果 分别构建了4个新靶点的Cyclin E干扰RNA真核表达载体,Cyclin E mRNA表达明显受到抑制(P均＜0.05),其中实验1组细胞与U251组相比增殖及侵袭能力减弱(P均＜0.05).结论 新靶点Cyclin E干扰RNA使Cyclin E表达下调,从而导致人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭能力减弱.
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促红细胞生成素受体干扰RNA慢病毒表达载体的构建及干扰细胞的筛选
目的 构建人促红细胞生成素受体(EPOR)干扰RNA慢病毒(LV)表达载体,并筛选出EPOR能稳定干扰人脑胶质细胞瘤U251细胞的佳感染复数(MOI). 方法 构建人EPOR干扰RNA慢病毒表达载体,即LV-EPOR,收集病毒,检测病毒滴度后感染人脑胶质细胞瘤U251细胞(LV-EPOR-U251细胞),根据MOI值的不同分为MOI100、MOI10、MOI1组,选出荧光表达量高的一组,经RT-PCR检测mRNA表达,计算干扰效率.结果 将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功.经RT-PCR检测结果证实,MOI100组的LV-EPOR-U251细胞荧光表达量高,其干扰效率为72％.结论 成功构建LV-EPOR,LV-EPOR-U251细胞稳定干扰的MOI值为100.
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喉鳞癌组织OPN表达及shRNA沉默对Hep-2细胞侵袭转移影响的研究
目的:探讨人喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中OPN表达,分析其临床病理学意义,及OPN下调后对喉癌细胞株Hep-2生长和侵袭的生物学行为影响.方法:免疫组织化学SP法检测44例喉鳞状细胞癌及癌旁组织手术切除标本OPN的表达,结合喉癌患者的临床病理学特征进行分析.OPN的RNA干扰慢病毒载体(LV-shOPN)转染Hep-2细胞,蛋白质印迹法检测OPN的表达；MTT法检测Hep-2细胞增殖；Transwell侵袭实验检测Hep-2细胞的侵袭力.结果:44例喉癌和癌旁组织相对正常组织中OPN表达阳性率为75.0％(33例)和13.6％(6例),差异有统计学意义,P=0.000；OPN的表达与颈部淋巴结转移、临床分期、病理组织学分级有关,与性别、年龄、原发部位无相关性；体外构建的LV-shOPN能有效抑制Hep-2细胞中OPN蛋白的表达(P=0.117),抑制Hep 2细胞的增殖(P=0.026)和侵袭力(P=0.135).结论:OPN可能参与了喉癌的发生转移；LV-shOPN判断预后的重要生物学 标志；LV-shOPN能够有效抑制Hep-s细胞的生长和侵袭力,可望为喉癌治疗提供一定的理论基础.
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干扰CIP2A表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡影响研究
目的:探讨干扰蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:应用siRNA干扰卵巢癌细胞A2780和SKOV3的CIP2A表达后,检测细胞增殖、凋亡和相关基因表达水平.MTT和集落形成试验检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞周期和凋亡水平;实时定量PCR和蛋白质印迹法检测CIP2A、Cyclin D1、c-myc、p-Rb、Bcl-2和p-AKT等细胞周期相关蛋白的表达水平.结果:siR-NA敲减A2780和SKOV3细胞的CIP2A表达,敲减效率A2780为81％,SKOV3为78％.干扰后细胞增殖受抑,集落形成数量降低,A2780细胞,对照组为349±19,CIP2A siRNA为207±12,P=0.001;SKOV3细胞,对照组为288±16,CIP2AsiRNA为106±8,P=0.001.干扰后细胞周期受阻碍,G1期细胞比例增加,A2780细胞,对照为45.5±2.8,CIP2A siRNA为55.8±3.1,P=0.045;SKOV3细胞,对照为55.2±2.3,CIP2A siRNA为65.6±3.2,P=0.041.干扰后S期细胞比例下降,A2780细胞,对照为38.6±1.9,CIP2A siRNA为31.3±2.1,P=0.044;SKOV3细胞,对照为29.5±1.7,CIP2A siRNA为22.3±1.5,P=0.041.干扰CIP2A表达可促进紫杉醇诱导的细胞凋亡,CIP2A siRNA凋亡率,A2780细胞为23.63％,SKOV3细胞为20.69％;对照组凋亡率A2780细胞为14.25％,SKOV3细胞为12.75％.蛋白质印迹法结果显示,干扰CIP2A表达可下调Cyclin D1、c-myc、p-Rb、Bcl-2和p-AKT的表达.结论:CIP2A对卵巢癌细胞增殖和凋亡起重要作用,可能成为卵巢癌治疗的新靶点.
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同源盒基因转录反义 RNA调控乳腺癌细胞增殖和转移研究
目的：探讨同源盒基因转录反义RNA（ HOTAIR）调控乳腺癌细胞MDA－MB－231转移的分子机制。方法以人乳腺癌细胞MDA－MB－231为研究材料，用小RNA干扰技术下调乳腺癌细胞HOTAIR表达，实时荧光定量聚合酶链反应检测HOTAIR下调水平。用细胞计数法检测HOTAI下调前后细胞增值能力变化，划痕实验（ Wound Healing模型）检测下调HOTAIR前后乳腺癌细胞迁移能力变化。结果小干扰RNA下调HOTAIR表达后，乳腺癌MDA－MB－231细胞增殖能力显著降低（ P ＜0.05）；小干扰 RNA 下调 HOTAIR 表达后， si －HOTAIR乳腺癌细胞的迁移能力显著下降。结论长链非编码RNA HOTAIR可促进乳腺癌MDA－MB－231细胞增殖迁移，可作为乳腺癌药物研制的潜在靶点。
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异核苷掺入和肽缀合修饰的寡核苷酸
人工合成的寡核苷酸,包括反义寡核苷酸、干扰RNA等,显示了优异的临床潜在应用价值但要实现合成的寡核苷酸的广泛临床应用,必须要克服一些障碍性问题,如该类结构的不稳定性、非特异性作用及难以跨膜吸收等.本文综述了张礼和院士课题组在异核苷掺入及肽缀合寡核苷酸方面的研究成果.
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Survivin siRNA对卵巢癌细胞侵袭的影响
目的:探讨survivin靶向小分子干扰RNA(siRNA)对卵巢癌细胞侵袭的影响.方法:在survivin基因的编码区内根据干涉位点的设计原则,体外转录合成survivin siRNA,转染人卵巢上皮性癌细胞株SKOV3细胞,用Western blot方法鉴定干涉位点对survivin基因蛋白的干扰效果;细胞侵袭实验(transwell)检测细胞体外侵袭能力的变化.结果:survivin siRNA能有效抑制survivin蛋白的表达,siRNA组survivin蛋白的相对表达水平分别与空白对照组、非特异性组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).特异性干涉组细胞的侵袭能力明显低于非特异性干涉组及空白对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.001).结论:特异性的survivin siRNA能有效降低卵巢癌细胞survivin的表达,抑制细胞侵袭能力,这为卵巢癌的基因治疗提供了一种新策略.
关键词： 干扰RNA 卵巢癌 SKOV3细胞 Survivin基因 转移 -
人巨细胞病毒即刻早期基因功能研究
目的 探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在体外增殖过程中即刻早期(immediately early,IE)基因的作用.方法 设计并化学合成3条靶向IE基因外显子序列的siRNA,应用阳离子脂质体法将干扰序列转染入人胚肺成纤维(human embryonic lung fibroblast,HELF)细胞,用HCMV感染已转染入siRNA的细胞,同时设置正常对照组、阴性对照组、阳性对照组和转染试剂对照组.采用流式细胞术检测转染效果,荧光定量PCR和琼脂糖凝胶电泳方法检测分析导入的siRNA对IE基因和GAPDH阳性对照基因的抑制效果以及早期(E)基因和晚期(L)基因的表达情况.结果 siRNA成功导入HELF细胞内,6孔板内5μl脂质体可导入的佳siRNA量约为100pmol,阳性对照组GAPDH表达量较其他对照组有明显的下降(P＜0.05),抑制率为70.8％;干扰组中3条siRNA对IE基因的表达均有抑制作用.IE基因表达下调后,E基因和L基因的表达较对照组也有明显下降(P＜0.05).结论 在体外,靶向IE基因的siRNA能有效抑制IE基因的表达从而影响E基因和L基因的表达,表明IE基因的有效表达是E基因和L基因表达的基础.
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新靶点CyclinE干扰RNA对人脑胶质瘤侵袭能力的影响
目的：构建人CyclinE新靶点的干扰RNA真核表达载体，观察CyclinE表达受抑制后的人脑胶质瘤细胞的侵袭能力的变化。方法构建4个新靶点CyclinE干扰RNA的真核表达载体后，用双酶切和碱基序列测定，转染载体到胶质瘤U251细胞株，将其分为U251组、PNC-U251组、PCyclinE-1-U251组、PCyclinE-2-U251组、PCy-clinE-3-U251组、PCyclinE-4-U251组。通过RT-PCR的结果检测各组CyclinE mRNA的表达量，将干扰效果好的一组用Transwell小室法检测侵袭能力的变化。结果成功构建了新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体即PCyclinE-1、PCyclinE-2、PCyclinE-3、PCyclinE-4，而且CyclinE mRNA表达受到抑制，其中PCyclinE-1-U251组的穿膜细胞数为(45.4±2.7)个，U251组和PNC-U251组的穿膜细胞数分别为(75.2±2.9)个和(74.4±3.5)个，U251组和PNC-U251组的穿膜细胞数比较，差异无统计学意义(t =1.23，P=0.31)，PCyclinE-1-U251组和U251组的穿膜细胞数比较，差异有统计学意义(t =15.00，P=0.00)，PCyclinE-1-U251组和PNC-U251组的穿膜细胞数比较，差异有统计学意义(t =13.81，P=0.00)。结论本实验构建了新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体，PCyclinE-1-U251细胞侵袭能力减弱。
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抗凋亡蛋白Bcl-xL在巨核细胞分化和成熟过程中的作用
目的 研究抗凋亡蛋白Bcl-xL在巨核细胞分化和成熟过程中的作用.方法 采用PDBu诱导K562细胞向巨核细胞分化,RNA干扰阻断Bcl-xL在K562细胞向巨核细胞诱导分化中的表达,RT-PCR和流式细胞仪技术检测其改变.采用免疫磁珠从正常骨髓中富集CD34+细胞,在无血清培养下用TPO诱导其向巨核细胞分化,免疫组织化学和流式细胞仪技术观察分化过程中Bcl-xL的表达改变.结果 PDBu诱导K562细胞向巨核细胞分化24 h后,CD61+细胞百分比迅速增加,并且在72 h内维持较高的阳性率;用siBcl-xL干扰后72 h内,CD61+细胞百分比只有轻度增加,同时RT-PCR检测显示24 h后Bcl-xL mRNA表达显著减少,流式细胞检测显示Bcl-xL蛋白的表达也相应降低.正常骨髓中CD34+细胞经TPO诱导后,在培养5～20 d间Bcl-xL蛋白表达阴性的巨核细胞随着培养时间延长逐渐增多,免疫组织化学检测显示未成熟的巨核细胞Bcl-xL蛋白表达呈强阳性,而在成熟的巨核细胞中表达为阴性.结论 抗凋亡蛋白Bcl-xL在巨核细胞分化过程中发挥重要作用,而在巨核细胞发育晚期Bcl-xL蛋白的表达下调可能是巨核细胞成熟的关键,并与成熟巨核细胞的特殊凋亡发生密切相关.
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稳定转染CDK2干扰RNA真核表达载体的人脑胶质细胞瘤SHG44细胞系的建立
目的:构建CDK2的干扰RNA真核表达载体,并且稳定转染人脑胶质细胞瘤SHG44细胞来抑制CDK2的表达,为人脑胶质细胞瘤的研究提供有价值的资料.方法:1.根据siRNA设计原则和GeneBank数据库中CDK2的cDNA序列,构建CDK2干扰RNA真核表达载体PGenesil - 1- CDK2,并测序鉴定.2.利用脂质体法转染CDK2的干扰RNA真核表达栽体,G418筛选阳性转染细胞克隆,制备稳定转染干扰RNA真核表达栽体的SHG44细胞系,用倒置荧光显微镜观察荧光蛋白表达量.结果:1.成功构建了CDK2干扰RNA真核表达载体.经鉴定证实,构建的siRNAs序列与基因库中序列完全相同,并且未发现有突变、缺失、插入等异常存在.2.获得稳定转染CDK2干扰RNA真核表达栽体的SHG44细胞系,命名为pGenesil-1 - CDK2一SHG44.结论:成功的建立稳定转染CDK2干扰RNA的SHG44细胞系.
关键词： 干扰RNA CDK2:胶质细胞瘤 -
新靶点CDK2干扰RNA对人脑胶质瘤增殖影响
目的 构建4个新靶点的人细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)干扰RNA真核表达载体,转染人脑胶质瘤细胞后,检测出干扰效果好的载体及细胞增殖能力的变化.方法 构建4个新靶点CDK2干扰RNA真核表达载体并用双酶切和测序鉴定；分别转染上述4个载体到人脑胶质瘤细胞株SHG44；通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)比较转染后CDK2 mRNA的表达量,选出干扰效果好的一个,检测细胞增殖能力的变化.结果 成功构建4个新靶点的CDK2干扰RNA真核表达载体PCDK2-1、PCDK2-2、PCDK2-3、PCDK2-4；CDK2 mRNA表达和细胞增殖明显受到抑制,PCDK2-1的干扰效果为56％；PCDK2-1-SHG44细胞与对照组相比增殖能力减弱.结论 成功构建并筛选出效果好的新靶点CDK2干扰RNA真核表达载体,并使SHG44细胞的增殖水平降低.
关键词： 干扰RNA 新靶点 细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2) 胶质瘤 增殖 -
热休克蛋白70(HSP70)对HBV复制及抗原分泌的影响
目的 了解慢性乙型肝炎患者(CHB)血清中热休克蛋白70(HSP70)与HBV-DNA的关系,并探讨HSP70能否影响乙型肝炎病毒(HBV)的复制与抗原分泌.方法 选择安徽医科大学第二附属医院住院和门诊CHB患者60例为研究对象,并以30例健康体检人群为对照者,采用酶联免疫技术(ELISA)分析CHB患者和对照者血清HSP70表达水平,运用荧光定量PCR技术分析CHB患者血清HBV-DNA复制水平;以RNA干扰(RNAi)技术抑制HepG2.2.15细胞中HSP70基因的表达,同时分析细胞培养上清中HBV DNA以及相关抗原的表达情况.结果 CHB患者血清中HSP70的表达水平明显高于其在健康对照者血清中的表达水平(P＜0.05),且与HBV-DNA拷贝数呈正相关性(r=0.540,P＜0.05);其中HBeAg阳性的CHB患者血清中HSP70的表达水平也显著高于HBeAg阴性CHB患者血清中的表达水平(P＜0.05).以RNAi技术特异性降低HSP70在HepG2.2.15细胞中的表达,HepG2.2.15细胞培养上清中HBV-DNA和相关抗原的分泌量明显降低(P＜0.05).结论 HSP70蛋白很可能在HBV的生命周期中发挥重要作用,从而影响HBV的复制和乙型肝炎的进展.
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Nogo受体基因干扰RNA表达载体的构建
目的 构建Nogo受体基因干扰RNA表达载体,为促进中枢神经轴突的再生、探索临床治疗脊髓损伤新途径奠定基础.方法 CeneBank中NgR的序列,应用www.invitrogen.com网站的设计软件设计、合成NgR miRNA的相应Oligo DNA,与BLOCK-iT Poll miR RNAi Expression Vector相连接,转化感受态Eco.li TOP10.结果 限制性内切酶BamH I和Xho工酶切、测序鉴定重组载体BLOCK-iT Poll miR RNAi/NgR,显示NgR miRNA相应的Oligo正确克隆入BLOCK-iT Poll miR RNAi Expression Vector.结论 成功构建Nogo受体基因干扰RNA表达载体.
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线粒体加工肽酶干扰RNA真核表达载体的构建
目的 利用干扰RNA技术构建线粒体加工肽酶(mitochondfiM processing peptidases,MPPs)干扰RNA真核表达载体,探讨MPPs在神经细胞中的作用,为帕金森病的研究提供有价值的资料.方法 (1)根据Gen-Bank提供的大鼠MPPsα亚基(peptidase mitochondrial processing alpha,Pmpca)序列,设计并合成4对MPPs干扰RNA单链寡核苷酸:MPPs-SR-1113,MPPs-SR-1425,MPPs-SR-561,MPPs-SR-903.(2)使互补的单链寡核苷酸模板退火,再转化为能表达其小发卡结构RNA的DNA序列.(3)使~(PGPU6/GFP/Neo)载体的线性化.(4)shRNA与载体的连接.(5)酶切鉴定并测序鉴定结果.结果 (1)酶切结果表明,所有质粒均为阳性重组载体.(2)经鉴定证实,构建的siRNAs序列与基因库中序列完全相同,并且未发现有突变、缺失、插入等异常存在.结论 利用干扰RNA技术可成功构建MPPs干扰RNA真核表达载体.
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RNA干扰技术在体外抑制人巨细胞病毒基因表达的应用
目的 探讨RNA干扰技术在体外抑制人巨细胞病毒(HCMV)基因表达时siRNA转染和病毒感染的先后顺序对抑制效果的影响.方法 设计并化学合成靶向即刻早期(IE)基因的siRNA.应用阳离子脂质体法将siRNA导人人胚肺成纤维(HELF)细胞,并分为先转染siRNA后感染HCMV、先感染HCMV后转染siRNA以及同时转染siRNA和感染HCMV3组,同时设置正常对照组、阴性对照组、阳性对照组和转染试剂对照组.采用荧光定量PCR和琼脂糖凝胶电泳方法分别检测分析各组转染的siRNA对IE基因和阳性对照基因GAPDH的抑制效果.结果 阳性对照组GAPDH基因mRNA表达量较阴性对照组和转染试剂对照组有明显下降,siRNA抑制率为70.4％,差异有统计学意义(P＜0.05).先转染siRNA后感染HCMV组、先感染HCMV后转染siRNA组、同时转染siRNA和感染HCMV组以及阳性、阴性、转染试剂对照组的IE基因mRNA表达量比较,差异有统计学意义(F=146.93,P=o.ooo).其中先转染siRNA后感染HCMV组以及同时转染siRNA和感染HCMV组对IE基因mRNA表达的抑制效果均好于先感染HCMV后转染siRNA组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在体外,siRNA能有效抑制靶基因的表达,且先转染siRNA再感染病毒的抑制效果相对更好,提示siRNA对HCMV感染具有一定的预防作用.
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siRNA干扰NF-κB家族成员表达抑制人肝癌HepG2细胞表达NKG2DLs
目的:探讨舒尼替尼诱导人肝癌HepG2细胞表达的自然杀伤细胞2族成员D配体(natural killer group 2 member D ligands,NKG2DLs)与核因子kappa B (nuclear factor B kappa,NF-κB)信号通路之间的相互作用.方法:常规体外培养HepG2细胞,利用实时荧光定量PCR检测1μmol/L舒尼替尼处理HepG2细胞24 h前后NF-κB基因家族成员mRNA的表达情况,利用计算机辅助设计并合成NF-κB1、NF-κB2和RelB siRNA引物,通过脂质体法将目的基因siRNA转染于HepG2细胞,荧光显微镜观察转染情况,实时荧光定量PCR检测干扰效率,Western blotting检测siRNA转染前后HeG2细胞内NF-κB1、NF-κB2和RelB蛋白表达,流式细胞术检测siRNA前后HepG2细胞NKG2DLs表达率.结果:实时荧光定量PCR结果显示,舒尼替尼处理HepG2细胞后,NF-κB1、NF-κB2和ReIB mRNA表达水平升高,主要以NF-κB2 mRNA和RelB mRNA升高为主.荧光显微镜观测siRNA转染后HepG2细胞红色荧光表达率约为60％,干扰效率达95％以上.siRNA转染后HepG2细胞内NF-κB1、NF-κB2和Re1B蛋白表达水平明显下降,siRNA转染+药物组NKG2DLs表达率明显低于药物处理组(P＜0.05).结论:首次揭示了舒尼替尼通过NF-κB旁路途径诱导肿瘤细胞表达NKG2DLs.
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Cyclin D1调控肺癌细胞的浸润和转移
Cyclin D1作为细胞周期的一个调控因子,许多肿瘤细胞都过表达Cyclin D1基因,比如肺癌、乳腺癌、甲状腺癌等.但是Cyclin D1在肿瘤细胞浸润和转移中的作用报道较少.本研究旨在研究Cyclin D1对肺癌细胞浸润、转移的调控作用.以肺腺癌细胞A549(高表达Cyclin D1)和肺鳞癌细胞SK-MES-1(低表达Cyclin D1)为研究对象.取裸鼠尾静脉注射A549或SKMES-1细胞,4周后处死,从肺脏中分离出肿瘤细胞再接种另外的裸鼠,如此经过2次循环接种构建裸鼠高转移动物模型.向A549细胞转染Cyclin D1的干扰RNA抑制Cyclin D1的表达,同时向SK-MES-1细胞转染Cyclin D1的表达载体促进Cyclin D1的表达,随后通过细胞迁移实验观察基因处理后A549和SK-MES-1细胞的转移能力变化.用Western blot检测亲本细胞、不同转移层次裸鼠的癌组织中Cyclin D1和WNT/TCF信号通路相关蛋白因子的表达.结果显示,随着转移次数增加,从动物癌组织中分离出的癌细胞转移能力显著增强,Cyclin D1表达也明显升高；在A549细胞中,干扰Cyclin D1的表达可使细胞迁移能力变弱；在SK-MES-1细胞中,过表达CyclinD1可使细胞迁移能力增强.高转移肺癌动物模型肿瘤组织中β-catenin、LEF、TCF蛋白表达高于低转移肿瘤组织,而二者的上述蛋白表达均高于亲本肺癌细胞.以上结果提示,Cyclin D1的表达与肺癌的浸润和转移密切相关,推测WNT/TCF信号通路能够促进Cyclin D1的表达.
