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骨髓间充质干细胞对大鼠痛风肾的修复作用
目的 探讨经鼠尾静脉移植的骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对大鼠痛风肾的影响,具体为延缓上皮到间叶组织转化(EMT)、促进肾脏细胞分化和生长,以及抗氧化应激等方面的作用.并进一步研究其相应的机制.方法 幼年雄性Wistar大鼠随机分为正常组和造模组,造模组采用腺嘌呤200 mg/(kg?d)灌胃4周制作痛风肾大鼠模型,造模成功24 h后,造模组再次被随机分为3组,分别为磷酸盐缓冲液模型组和BM-MSCs治疗组,BM-MSCs治疗组经鼠尾静脉移植入骨髓间充质干细胞(BM-MSCs是经密度梯度离心法结合贴壁筛选法在体外分离培养而成),同时磷酸盐缓冲液(PBS)模型组经鼠尾静脉注入相同量的PBS.注射6周后,收集大鼠的血液和尿液标本用来测定血肌酐、尿素氮和24 h尿蛋白含量;对大鼠肾石蜡标本切片进行H-E染色、糖原染色和马松染色,观察并半定量评分评价各组肾病理情况;免疫组织化学法测定大鼠肾石蜡标本切片中的转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平,Western-Blot法测定肾组织中P38蛋白、P-P38蛋白、硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)的表达情况.数据经过正态性及方差齐性检验后,正常组和造模组两两比较采用LSD-t检验,3组之间比较采用单因素差分析.P<0.05表示差异有统计学意义.结果 经腺嘌呤诱导制作的痛风肾大鼠相比正常组大鼠出现明显的肾功能降低,大量蛋白尿以及肾间质和肾小管尿酸结晶沉积,肾间质纤维化、炎症细胞浸润、肾小管上皮细胞坏死、肾小球硬化等,提示痛风肾模型制造成功,并出现了慢性肾功能衰竭;BM-MSCs治疗组较PBS模型组而言,血肌酐水平降低[(88.90±7.89)μmol/L vs.(117.40±6.13)μmol/L],尿素氮降低[(7.85±0.88)mmol/L vs.(10.97±1.03)mmol/L],24 h尿蛋白减少[(27.72±4.90)mgvs.(54.66±6.72)mg],TGF-β1表达减少[(11.00±2.28)个vs.(20.67±1.63)个],P-P38/P38比值降低[(0.31±0.09)μmol/L vs.(0.50±0.13)μmol/L],TrxR1/β-actin表达增加[(0.80±0.19)μmol/L vs.(0.41±0.23)μmol/L].差异有统计学意义.结论 BM-MSCs改善腺嘌呤诱导的痛风肾/慢性肾功能衰竭大鼠的肾功能,这可能与增加TrxR1的表达增加有关,TrxR1可以促进转分化、肾脏细胞生长并且具有抗氧化应激作用;同时与降低TGF-β1水平减轻EMT有关,此过程可能是通过抑制肿瘤坏死因子(TNF)-α/P-P38信号通路实现的.
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硫氧还蛋白还原酶1在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况分析
目的 探讨硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TrxR1)在乳腺癌及癌旁组织中的表达情况.方法 选择2014年1月至2017年6月本院收治的62例乳腺癌患者的乳腺癌及癌旁组织标本,测定不同组织学分类、年龄(<45岁和≥45岁)、TNM分期、肿瘤大直径(<1cm和≥1cm)、有无淋巴结转移患者的乳腺癌和癌旁组织中TrxR1的表达情况.结果 在62例乳腺癌患者中,乳腺癌的TrxR1阳性率为80.6％(50/62),而癌旁组织为11.3％(7/62),二者比较差异有显著性(χ2=6.79,P<0.01).不同组织学分类的乳腺癌组织标本TrxR1阳性率差异无显著性(χ2=1.23,P>0.05).<45岁和≥45岁患者的乳腺癌组织标本TrxR1阳性率分别为85.7％、85.2％;TNM分期ⅠA、ⅠB、ⅡA、ⅡB、ⅢA期患者的乳腺癌组织标本TrxR1阳性率分别为77.8％、83.3％、86.7％、87.5％、100％;肿瘤大直径<1cm和≥1cm患者的乳腺癌组织标本TrxR1阳性率分别为87.5％、83.3％;有淋巴结转移和无淋巴结转移患者的乳腺癌组织标本TrxR1阳性率分别为85.0％、86.4％.在不同年龄、TNM分期、肿瘤大直径及有无淋巴结转移患者的乳腺癌组织标本TrxR1阳性率差异均无显著性(P>0.05).结论 TrxR1在乳腺癌组织中的阳性率高于癌旁组织,但其在乳腺癌组织中的表达与组织学分类、年龄、TNM分期、肿瘤大直径及有无淋巴结转移无关.
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硫氧还蛋白还原酶1在燃煤污染型砷中毒病区砷暴露人群和大鼠血液和肝脏中的表达
目的 观察硫氧还蛋白还原酶(TrxR)1在燃煤污染型砷中毒病区砷暴露人群和大鼠血液和肝脏中的表达,探讨其在燃煤污染型砷中毒肝损伤中的作用.方法 ①人群研究:选择贵州省燃煤污染型砷中毒病区133例砷暴露者作为观察对象,依据临床检查和诊断结果分为病区非病人组(25例)、无明显肝病组(38例)、轻度(43例)和中重度肝病组(27例);以非砷污染村34名健康居民为对照组.采集上述观察对象的外周血,采用实时荧光定量PCR法检测TrxR1 mRNA表达,并用可见分光光度法检测TrxR酶活力.②动物实验:将30只体质量为80 ～ 100 g的Wiser大鼠,采用随机数字表法按体质量分为对照组、饮水型砷中毒组和低、中、高砷粮食污染组,共5组,每组6只.对照组常规喂养,饮水型砷中毒组饮用含10 mg/kg三氧化二砷(As2O3)的水溶液,低、中、高砷粮食污染组喂饲用病区高砷煤烘烤的玉米粉所配制的饲料(含砷量分别为25、50、100 mg/kg),均喂养3个月.采用实时荧光定量PCR法检测其外周血和肝组织中TrxR1 mRNA表达,免疫组织化学法检测肝组织TrxR1蛋白表达,可见分光光度法检测血清和肝组织中TrxR酶活力.结果 ①人群研究结果:病区非病人组、无明显肝病组、轻度和中重度肝病组外周血TrxR1 mRNA表达[中位数(四分位数)]分别为1.599 8(1.128 9～2.156 8)、1.469 3(1.146 1～1.976 3)、1.203 6(0.463 1～1.816 2)和0.912 3(0.631 8～1.535 0),轻度和中重度肝病组均低于对照组[1.649 7(1.161 1～2.380 2),P均＜0.05];血清TrxR酶活力分别为(3.12±0.76)、(2.81±0.84)、(2.52±0.73)、(2.42±0.76)kU/L,轻度和中重度肝病组均低于对照组[(3.02±0.70)kU/L,P均＜0.05].②动物实验结果:大鼠饮水型砷中毒组和低、中、高砷粮食污染组外周血TrxR1 mRNA表达分别为1.05±0.14、1.18±0.18、1.04±0.10、0.97±0.13,除低砷粮食污染组外,其余各染砷组均低于对照组(1.23±0.15,P均＜0.05);肝组织TrxR1 mRNA表达分别为0.78±0.10、0.83±0.10、0.79±0.09、0.77±0.11,除低砷粮食污染组外,其余各染砷组均低于对照组(0.94±0.12,P均＜0.05);肝组织TrxR1蛋白表达量分别为310.33±38.81、312.50±23.36、305.67±20.57、298.17±23.52,各染砷组均低于对照组(348.50±32.35,P均＜0.05);血清TrxR酶活力分别为(4.22±0.73)、(4.86±0.63)、(4.04±0.57)、(3.73±0.64)kU/L,各染砷组均低于对照组[(9.52±1.08)kU/L,P均＜0.05];肝组织TrxR酶活力分别为(14.82±1.67)、(18.76±2.76)、(14.90±2.17)、(11.55±1.74)U/mg,均低于对照组[(23.71±3.05)U/mg,P均＜0.05].结论 砷通过下调TrxR1转录表达和蛋白表达,降低其酶活力,加重燃煤污染型砷中毒肝损伤的发生发展.
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乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白上调硫氧还蛋白还原酶1基因的表达
目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原主蛋白(SHBs)对硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)启动子转录的激活作用.方法 以我室构建的SHBs基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定TXNRD1的启动子区域(TXNRD1p),聚合酶链反应(PCR)扩增TXNRD1p,克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-TXNRD1p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与pcDNA3.1(-)-SHBs共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性.结果 pCAT3-TXNRD1p与pcDNA3.1(-)-SHBs瞬时共转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3-TXNRD1p的7.4倍,是pCAT3-TXNRD1p与pcDNA3.1(-)-empty共转染的2.5倍.结论 我室克隆的TXNRD1启动子有顺式激活下游基因的活性;HBV的SHBs蛋白可以上调TXNRD1的启动子活性.
关键词： 乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白 硫氧还蛋白还原酶1 启动子 -
基于反向分子对接技术的异鼠李素靶标的预测
目的:利用反向分子对接技术对异鼠李素的潜在靶标进行预测.方法:采用idTarget软件对蛋白质数据库中异鼠李素的潜在靶标进行筛选,利用PyRx 0.8软件中的autodock vina模块对筛选的结果进行分子对接验证.结果:异鼠李素与硫氧还蛋白还原酶1、凝血酶、二氢叶酸还原酶、核受体ROR-α等4种靶蛋白的结合较好,其结合能(△Gpred)分别为-11.7、-10.34、-10.11、-10.07kcal/mol;分子对接验证结果显示,异鼠李素与4种靶蛋白核心氨基酸具有静电作用力、氢键、范德华力等相互作用.结论:硫氧还蛋白还原酶1、凝血酶、二氢叶酸还原酶、核受体ROR-α可能是异鼠李素的潜在靶标.
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硫氧还蛋白还原酶1及其相关信号通路研究进展
硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TrxR1)是维持机体稳态重要屏障的抗氧化系统成员.近年来,TrxR1相关信号通路的研究逐步受到关注.因此,本文将从硫氧还蛋白系统着手,对TrxR1及其相关信号通路的研究进展进行阐述,以期为TrxR1在疾病中的作用机制阐明提供新思路.
