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高表达染色质重构分子SNF5影响子宫内膜癌增殖
目的：本研究拟通过体外细胞分子生物学实验，观察SNF5分子对子宫内膜细胞癌增殖的影响，并进一步探究其发生机制。方法 Western blot法检测不同子宫内膜癌细胞株SNF5蛋白表达水平；采用质粒转染技术，转染低表达SNF5的细胞株；CCK8实验比较低表达SNF5细胞与转染SNF5后以及高表达SNF5细胞间增殖能力的差异；利用细胞克隆形成实验，进一步探究SNF5分子对子宫内膜细胞癌增殖影响的机制。本研究不同组别间采用方差分析和t检验分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。结果随着子宫内膜癌细胞恶性程度的逐渐增高，SNF5的表达水平也呈上升趋势。其中，人子宫内膜癌细胞 RL-952的 SNF5的表达含量高（2.82±0.1），JEC 细胞次之（1.85±0.16），HHUA细胞低（0.31±0.02）。为进一步探究SNF5分子影响子宫内膜癌细胞生物行为的具体机制，CCK8实验显示：HHUA-SNF5细胞的增殖能力明显高于HHUA细胞（3.8±0.5）倍，且恰好与高表达SNF5分子且高度恶性的RL-952细胞持平。为进一步探究SNF5影响细胞增殖的机制，克隆形成实验显示：HHUA-SNF5细胞的克隆形成能力明显高于 HHUA 细胞（5.0±0.3）倍；实时定量PCR显示：三个与增殖相关分子的转录因子的表达水平均明显上调，Sox2上调（2.4±0.7）倍（P＜0.001），Nanog上调（1.5±0.4）倍（P＜0.001），Oct4上调（1.9±0.2）倍（P＜0.001）。结论 SNF5可通过促进子宫内膜癌中增殖相关分子（Sox2、Nanog 和 Oct4）的表达，以促进细胞自我更新，进而促进细胞增殖。
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肝癌HepG2和Hep3B细胞系SNF5表达及定位
目的 染色质重塑因子SNF5在肝细胞肝癌中的生物学功能仍有待深入研究,本研究检测SNF5在HepG2和Hep3B肝癌细胞系中的表达及亚细胞定位,并构建Flag-SNF5真核表达质粒.方法 提取HepG2和Hep3B两种肝癌细胞系的总蛋白,蛋白质印迹法检测SNF5内源性表达;应用共聚焦激光扫描显微镜观察Hep3B细胞SNF5蛋白定位;提取HepG2总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增SNF5全长编码序列,亚克隆至含有Flag标签的真核表达载体中;将构建的重组质粒测序并转染到Hep3B细胞中,提取细胞蛋白进行蛋白质印迹检测,验证其表达情况;使用免疫沉淀的方法纯化Flag-SNF5融合蛋白.结果 在HepG2及Hep3B两种肝癌细胞系中,均检测到了SNF5蛋白的内源性表达.在Hep3B细胞中,SNF5主要定位于细胞核.将SNF5蛋白全长编码区成功克隆到pcDNA3-Flag载体中.重组质粒转染入Hep3B细胞后,检测到融合蛋白Flag-SNF5的表达,相对分子质量约为39×103,并对Flag-SNF5融合蛋白进行了纯化.结论 SNF5蛋白在HepG2及Hep3B两种肝癌细胞系中均有表达,且在Hep3B细胞中主要定位于细胞核.成功地构建了Flag-SNF5的真核表达质粒,验证了重组质粒的表达,并纯化了该融合蛋白.
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染色体重塑分子SNF5血清差异性表达用于早期诊断乳腺癌的初步研究
目的 探究染色体重塑分子SNF5血清差异性表达用于早期诊断乳腺癌的可行性.方法 选择2010年8月-2015年8月间于宁波大学医学院附属鄞州人民医院病理检查证实的196例乳腺癌患者(0期23例、Ⅰ期46例、Ⅱ期29例、Ⅲ期67例、Ⅳ期31例,平均年龄36.3岁)为研究对象,并选择同期在该院健康体检的64名志愿者(平均年龄37.9岁)为对照组.采用实时定量PCR检测2组外周血血清中SNF5的表达水平.采用统计学软件对2组SNF5水平进行统计学分析,并采用ROC曲线分析SNF5诊断乳腺癌的价值,进而探究染色体重塑分子SNF5血清差异性表达用于早期诊断乳腺癌的可行性.结果 乳腺癌患者外周血血清中SNF5水平显著性高于对照组(P＜0.05),0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者SNF5水平分别是对照组的13、15、15、16、23倍(均P＜0.05).ROC曲线结果显示,SNF5诊断乳腺癌的敏感度与特异度分别为82％和93％,曲线下面积为0.8734(95％ CI:0.923～ 0.944).结论 染色体重塑分子SNF5在乳腺癌患者中的表达明显升高,其可作为早期诊断乳腺癌肿瘤的生物标志物,具有敏感度、特异度高的优点.
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PIH1D1对染色质重塑复合物SNF5亚基降解的影响
目的 探讨PIH1D1对其结合蛋白SNF5的稳定性的影响.方法 通过蛋白合成抑制剂环己酰亚胺(CHX)和蛋白酶体抑制剂MG132抑制作用找到SNF5的降解路径,而后转染PIH1D1真核表达质粒,探讨其对SNF5稳定性的影响.结果 得到CHX和MG132的佳作用浓度;SNF5通过蛋白酶体依赖的途径降解;PIH1D1抑制SNF5的降解,从而稳定SNF5.结论 PIH1D1可能通过阻断蛋白酶体依赖途径,抑制SWI/SNF染色质重塑复合物SNF5亚基的降解,从而起到稳定SNF5的作用.
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多发性骨髓瘤细胞中SWI/SNF核心亚单位SNF5调控的基因表达谱分析
目的 研究染色质重塑复合物SWI/SNF核心亚单位SNF5对骨髓瘤细胞系基因表达谱的调控作用.方法 在KM3细胞中构建四环素诱导的表达SNF5 siRNA的稳定细胞系,通过四环素诱导敲低SNF5,检测SNF5敲低前后的基因表达谱,对差异表达基因进行生物信息学分析,并对部分基因进行验证.结果 SNF5敲低抑制KM3细胞生长,基因表达谱分析发现545个表达差异基因,其中214个上调,331个下调.结论 SNF5是多发性骨髓瘤细胞生长所需的,它通过影响与细胞生长及凋亡相关基因的表达来发挥作用.
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神经鞘瘤相关遗传学机制的新研究进展
背景 神经鞘瘤发病与INI1、NF2抑癌基因突变失活有关,已被众多实验结果证实,但在部分神经鞘瘤病例中未发现INI1、NF2基因突变位点.近来LZTR1基因在神经鞘瘤中的作用,特别是在神经鞘瘤病中的致病作用,已成研究的热门领域.目的 通过对自1995年以来神经鞘瘤发病的相关遗传学机制实验研究的探索,总结INI1、NF2、LZTR1抑癌基因在神经鞘瘤及其亚型中的作用机制.方法 以“神经鞘瘤、神经雪旺细胞瘤、神经鞘瘤病、Schwannoma、neurinoma、neurinomatosis、SNF5、INI1、SNARCB1、BAF47、NF2、LZTR1”为检索词,应用计算机检索1995年至2015年PUBMED、CNKI、SCIENCE DIRECT数据库上的相关文献,排除重复性研究,保留61篇作进一步分析.结果和结论 神经鞘瘤发病与INI1、NF2、LZTR1突变失活有关;INI1基因突变可能是引起种系遗传的关键因素,特别是在家族性神经鞘瘤病中;NF2基因突变在神经鞘瘤的发生中起到了很大的促进作用,尤其是在散发性神经鞘瘤中的作用尤为明显;LZTR1基因在非INI1、NF2基因突变的神经鞘瘤中起到了关键作用,可能是家族性神经鞘瘤病发病的关键节点.
