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酵母双杂交技术筛选人白细胞cDNA文库中HCV NS4B结合蛋白
目的 筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白4B(HCV NS4B)在人白细胞Cdna文库中的相互作用蛋白.方法 应用酵母双杂交技术筛选人白细胞文库中与HCV NS4B相互作用的蛋白,对筛选结果中目的蛋白的编码基因进行克隆,并构建其酵母表达载体,在酵母细胞中进行回交验证.结果 共筛选出人白细胞Cdna文库中与能够与HCV NS4B相互作用的蛋白5种(溶菌酶前体、推测的人翻译起始因子、人选择素P配体、人HC7371基因和TNF-alpha转换酶)以及一个未知功能基因.对新基因成功克隆,在酵母细胞中回交验证了HCV NS4B与该基因的相互作用.结论 在人白细胞Cdna文库中存在一些能够与HCV NS4B相互作用的蛋白,它们均与细胞的生长和代谢状态有着密切的关系,其具体作用机制尚有待进一步研究.
关键词： 丙型肝炎病毒非结构蛋白4B 酵母双杂交 未知功能基因 -
丙型肝炎病毒非结构蛋白4B对肝癌细胞增殖的影响
目的 探讨丙型肝炎病毒非结构蛋白4B(HCV-NS4B)对肝癌细胞增殖及增殖细胞核抗原(PCNA)和周期素D1(cyclinD1)蛋白表达的影响.方法 采用构建好的HCV-NS4B表达载体,以脂质体转染法转染HepG2细胞.RT-PCR、琼脂糖凝胶电泳证实HCV-NS4B在HepG2细胞稳定表达.MTT法绘制生长曲线,观察NS4B对肝细胞生长的影响；流式细胞仪检测细胞周期的情况；免疫细胞化学法检测PCNA和cyclinD1的表达.结果 转染后,生长曲线显示NS4B可促进肝细胞生长；细胞周期检测显示转染NS4B的HepG2细胞进入S期和G2/M期增多(P＜0.05),处于G0/G1期细胞降低(P＜0.05).PCNA和cyclinD1的表达均较空白载体组升高(P＜0.05).结论 HCV-NS4B可干扰肝癌细胞周期,促进肝癌细胞增殖,其作用与上调PCNA、cyclinD1表达有关.
关键词： 丙型肝炎病毒非结构蛋白4B 肝肿瘤 增殖细胞核抗原 周期素蛋白D1 -
丙型肝炎病毒NS4B对肝细胞周期及PCNA表达的影响
目的 研究丙型肝炎病毒非结构蛋白4B对肝细胞细胞周期及PCNA表达的影响,探讨HCV-NS4B在肝细胞增殖机制中的可能作用.方法 利用脂质体介导将空白载体PCXN2组及重组质粒PCXN2-NS4B转染入LO2肝细胞,G418筛选.RT-PCR鉴定质粒成功转染入肝细胞内.MTT法绘制生长曲线,观察NS4B对肝细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞周期的情况;免疫组化方法观察PCNA的表达情况.结果 NS4B转染入LO2有表达,生长曲线示HCV-NS4B可促进肝细胞生长;细胞周期检测示转染PCXN2-NS4B组S期、G2/M期较PCXN2组增加,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);转染PCXN2-NS4B组PCNA表达率较PCXN2组高,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HCV-NS4B可能通过调节PCNA的表达,促进DNA合成,促进肝细胞增殖.
关键词： 丙型肝炎病毒非结构蛋白4B 细胞周期 增殖细胞核抗原
