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siRNA介导BMP7基因沉默对人肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响
目的:采用RNA干扰技术(RNA interference, RNAi)抑制骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP7)的表达,观察BMP7基因沉默对人肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响.方法:设计并化学合成针对BMP7的3对小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),使用TransLipid@HL Transfection Reagent瞬时转染人肝癌HepG2细胞,并设正常对照组、Negative-siRNA组及BMP7-siRNA-1、BMP7-siRNA-2、BMP7-siRNA-3转染组.运用半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)和Western blot法分别从mRNA和蛋白水平检测HepG2细胞中BMP7的表达变化,选取沉默效果明显的siRNA片段进行后续实验.采用MTT比色法及Transwell迁移实验分别检测转染后细胞增殖及迁移的变化,Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase3)表达情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期变化.结果:RT-PCR和Westem blot结果显示,BMP7-siRNA-3转染组BMP7抑制效果明显(P＜0.01),选取BMP7-siRNA-3转染组进行后续实验.MTT比色法显示,转染后48,72 h细胞生长增殖均受到抑制(P＜0.01).Transwell迁移实验显示,转染24 h后,BMP7-siRNA-3转染组HepG2细胞穿膜数均明显低于正常组和Negative-siRNA组(P＜0.01).Westem blot检测发现BMP7-siRNA-3组比对照组的细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase3表达增加(P＜0.01),Bcl-2表达差异无统计学意义.流式细胞仪检测发现转染后48 h,BMP7-siRNA-3组HepG2细胞被阻滞在G2期(P＜0.01).结论:siRNA介导BMP7基因沉默对人肝癌HepG2细胞的增殖与迁移具有抑制作用,对细胞凋亡有促进作用,并可阻滞细胞在G2期.
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超临界提取的桑叶液对与乳腺肿瘤细胞混合培养体系中内皮细胞的影响
目的 研究桑叶液对与乳腺癌肿瘤细胞(MDA-MB-231)共培养的人脐静脉内皮细胞(HU-VEC-2C)增殖、迁移、凋亡及其分子表达的影响.方法 用Transwell建立与肿瘤细胞共培养HU-VEC-2C模型,实验分为单独培养HUVEC-2C组,细胞共培养组和添加高、中、低剂量桑叶液实验组,利用CCK-8细胞活性检测试剂盒检测与肿瘤共培养的HUVEC-2C的增殖情况;用24孔tran-swell迁移小板培养观察HUVEC-2C与肿瘤共培养的情况下,HUVEC-2C的迁移情况,实验组分为共培养组和高剂量组;通过流式细胞仪检测与肿瘤细胞共培养的HUVEC-2C凋亡状况;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测共培养体系中血管内皮生长因子(VEGF)分泌影响,实验分为共培养组和高、中、低剂量实验组.结果 桑叶液对HUVEC-2C的增殖具有抑制作用,并随着桑叶液浓度的增加而抑制能力增强,在桑叶液浓度为0.1、0.05、0.025g/mL时,与共培养组相比较均具有统计学意义(P＜0.05),当桑叶液浓度为0.1g/mL时,其对HUVEC-2C增殖抑制率较为明显;通过观察Tran-swell小室,并与共培养组相比较,添加了桑叶液的HUVEC-2C的迁移受到了一定的制约;流式细胞仪(FCM)检测到桑叶液能够促进HUVEC-2C凋亡;且能够抑制共培养体系中的VEGF的表达.结论 桑叶能够抑制与肿瘤细胞共培养的HUVEC-2C的增殖、迁移以及促进HUVEC-2C的凋亡,达到抑制肿瘤血管生成的目的,其机制可能与抑制VEGF的表达有关.
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miR-26a在动脉粥样硬化发生中的作用
目的 MicroRNAs通过调节血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化、增殖、迁移来影响动脉粥样硬化斑块形成,本文探讨miR-26a在动脉粥样硬化发生过程中的作用.方法 采用终浓度为50 mg/L的氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导VSMCs构建动脉粥样硬化模型;采用real-time PCR检测VSMCs中miR-26a表达;运用western blot检测平滑肌α-肌动蛋白(SM α-actin)和平滑肌肌球蛋白重链(MYH11)蛋白表达;流式细胞仪、BrdU和transwell迁移实验检测VSMCs凋亡、增殖和迁移能力变化.结果 oxLDL诱导VSMCs中miR-26a表达显著升高(3.22±0.21 vs 1.03±0.03,t=10.56,P＜0.001),anti-miR-26a转染VSMCs能显著减少oxLDL诱导的miR-26a表达(P＜0.05).功能学实验发现oxLDL显著下调VSMCs分化标志物SM α-actin和MYH11蛋白表达、抑制细胞凋亡、促进细胞增殖和迁移(P＜0.05),而anti-miR-26a能够逆转oxLDL对VSMCs的作用(P＜0.05).结论 oxLDL处理的VSMCs中miR-26a异常升高,miR-26a促进VSMCs增殖和迁移并抑制细胞凋亡和分化,提示miR-26a在动脉粥样硬化过程中可能发挥关键作用.
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胰腺癌组织高表达血小板反应蛋白2的预后意义及其对癌细胞增殖和迁移的影响
目的:探索血小板反应蛋白2 (thrombospondin2,THBS2)表达对胰腺癌患者的预后意义及对胰腺癌ASPC-1细胞增殖和迁移的影响,并探讨可能的分子机制.方法:利用数据库分析THBS2在胰腺癌组织中的表达情况及其对患者整体生存率的影响.Wb实验检测THBS2在胰腺癌ASPC-1细胞中的表达,RNA干扰技术敲低ASPC-1细胞中THBS2的表达后,采用MTT实验以及Transwell实验检测敲低THBS2对于细胞增殖和迁移能力的影响;Wb技术检测对ASPC-1细胞中MMP、E-钙黏蛋白、AKT以及PI3K蛋白表达的影响.结果:THBS2在胰腺癌组织中的表达显著高于正常胰腺组织中的表达(P＜0.01),且THBS2的高表达会导致胰腺癌患者整体生存率的下降.THBS2在ASPC-1细胞中表达上调,干扰THBS2的表达后ASPC-1细胞的增殖(P＜0.01)和迁移能力(P＜0.01)均显著下降,细胞内AKT以及PI3K的表达显著下调(P＜0.01).结论:THBS2在胰腺癌组织和细胞中高表达,且与患者的预后情况呈负相关,其机制可能是通过调控AKT/PI3K信号通路而调节ASPC-1细胞的增殖和迁移.
关键词： 胰腺癌 ASPC-1细胞 血小板反应蛋白2 增殖和迁移 AKT/PI3K信号通路 -
滑膜素对乳腺癌细胞迁移和增殖的影响
目的:探讨滑膜素(synoviolin)在乳腺癌组织中的表达情况及其对乳腺癌细胞MCF-7增殖和迁移能力的影响.方法:通过Western blot、免疫组织化学染色及免疫组织芯片技术检测乳腺癌组织中滑膜素的表达水平;在乳腺癌细胞MCF-7中利用腺病毒过表达滑膜素,并以划痕实验、Transwell迁移实验、CCK-8细胞增殖试剂盒等检测其对于乳腺癌细胞MCF-7迁移和增殖能力的影响.结果:滑膜素在乳腺癌组织中的表达水平明显低于相应癌旁组织;过表达滑膜素能抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移能力;过表达滑膜素能抑制乳腺癌细胞MCF-7发生上皮-间质转化.结论:滑膜素在乳腺癌组织中低表达,可能与抑制乳腺癌细胞的迁移和增殖能力密切相关.
关键词： 滑膜素 乳腺癌细胞MCF-7 增殖和迁移 上皮-间质转化 -
RGS4表达上调对人恶性黑素瘤细胞的M14增殖和迁移的影响
目的:明确体外RGS4基因表达上调对恶性黑素瘤M14细胞中增殖及迁移的影响.方法:体外培养M14细胞,分为对照组(转染pcDNA3.1空质粒)和实验组(转染pcDNA3.1-RGS4质粒).RT-PCR和Western blot检测转染后RGS4 mRNA和RGS4蛋白水平的表达,CCK-8和克隆形成实验检测RGS4上调对恶性黑素瘤M14细胞增殖的影响,划痕实验检测RGS4高表达对M14细胞迁移的影响.结果:实验组细胞中RGS4 mRNA表达量是对照组的3.25×103倍(P<0.05),蛋白表达量是对照组的6.73倍(P<0.05).实验组M14细胞OD值为1.33±0.07,低于对照组的1.61±0.11(P<0.05),实验组M14细胞克隆数为34±5.53,低于对照组的56±7.68(P<0.05).实验组M14细胞迁移能力低于对照组.结论:RGS4高表达能够抑制体外恶性黑素瘤细胞的增殖和迁移,RGS4在恶性黑素瘤的发生、发展中可能发挥重要作用.
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美洲大蠊提取物对人肝癌HepG2细胞的作用机制研究
目的 探讨美洲大蠊提取物体外对肝癌(HCC)HepG2细胞增殖、迁移能力,以及细胞中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响.方法 噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;划痕实验检测美洲大蠊提取物对HCC细胞迁移能力的影响;免疫细胞染色法、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测美洲大蠊提取物对细胞中VEGF蛋白表达的影响.结果MTT和划痕实验结果表明,美洲大蠊多肽、CⅡ-3和脱脂膏能抑制人HCC HepG2细胞的增殖和迁移,且呈时间、剂量依赖关系;免疫细胞化学染色法和ELISA法结果显示,美洲大蠊多肽、CⅡ-3及脱脂膏能下调人HCC HepG2细胞中VEGF蛋白的表达.结论美洲大蠊多肽、CⅡ-3及脱脂膏能抑制人HCC HepG2细胞增殖和迁移,同时能降低HepG2细胞中VEGF蛋白的表达,且美洲大蠊多肽的作用优于CⅡ-3和脱脂膏.
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PTEN 对乳腺癌细胞 MDA －MB －231增殖和迁移的影响
目的：探讨PTEN对乳腺癌细胞MDA－MB－231增殖和迁移能力的影响。方法体外培养乳腺癌细胞株MDA－MB－231，质粒转染技术建立过表达PTEN的稳定细胞株MDA－MB－231／PTEN作为MDA－MB－231／PTEN组，空载体细胞株MDA－MB－231／pcDNA3．1作为阴性对照组，以未转染细胞为正常对照组，RT－PCR检测各组细胞PTEN的表达水平，MTT法检测各组MDA－MB－231细胞的增殖能力，Transwell小室迁移实验检测各组MDA－MB－231细胞的迁移能力。结果 PTEN在MDA－MB－231／PTEN细胞中表达量明显高于阴性对照组和正常对照组。而阴性对照组和正常对照组PTEN表达量差异无统计学意义。转染PTEN基因可显著抑制乳腺癌细胞MDA－MB－231的增殖和迁移能力。结论 PTEN对乳腺癌细胞的体外增殖和迁移能力有抑制作用。
关键词： PTEN 乳腺癌 增殖和迁移 MDA-MB-231
