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  • miR-144-3p靶向调控ABCG2信号通路对胃癌细胞侵袭和迁移的影响

    作者:吕弢;俞兴旺;胡静;周东辉

    目的 研究miR-144-3p靶向调控ATP结合转运蛋白G家族成员2(ATP-binding transporter Gfamily member 2,ABCG2)对胃癌(gastric cancer,GC)HGC-27细胞侵袭和迁移能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法 通过qRT-PCR检测人GCHGC-27细胞株和人胃黏膜上皮GES-1细胞株中miR-144-3p和ABCG2的表达情况;通过靶基因预测软件预测miR-144-3p和ABCG2靶向结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向结合关系;通过qRT-PCR检测miR-144-3pmimic或miR-144-3p inhibitor转染GC细胞后miR-144-3p及ABCG2的表达水平;通过明胶酶谱实验检测对转染ABCG2 siRNA的GC细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)活性的影响;通过Transwell侵袭和迁移实验检测转染miR-144-3p mimic、miR-144-3p inhibitor、ABCG2siRNA对GC细胞侵袭和迁移能力的影响,结果 与正常细胞组人胃黏膜上皮GES-1细胞株相比,GC细胞组人GCHGC-27细胞株中miR-144-3p的表达量明显降低,ABCG2的表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);靶基因预测miR-144-3p和ABCG23'UTR存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实了miR-144-3p和ABCG2靶向结合关系;与对照组相比,转染miR-144-3p mimic组GC细胞中miR-144-3p的表达明显升高,ABCG2的表达明显降低,细胞侵袭和迁移能力显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),转染miR-144-3p inhibitor则表现出相反的作用;明胶酶谱实验检测结果表明ABCG2 siRNA转染可显著抑制GC细胞中MMP-2和MMP-9蛋白活性,抑制GC细胞侵袭和迁移能力,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 MiR-144-3p能够抑制GC细胞侵袭和迁移能力,其作用机制与靶向调控ABCG2-MMP-2/9信号通路有关,

  • 卵巢癌中miR-144-3p和SGK3的表达水平及临床意义

    作者:孙婷;王伟;何向蕾

    目的 检测卵巢癌中microRNA-144-3p(miR-144-3p)与血清和糖皮质诱导蛋白激酶(SGK3)的表达水平,并探究其临床意义.方法 收集2010年3月~ 2012年7月于笔者医院经手术切除的64例上皮性卵巢癌组织、12例卵巢良性肿瘤组织和12例正常卵巢组织.实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测卵巢癌组织miR-144-3p水平;蛋白质印迹(Western blot)法技术检测卵巢癌组织SGK3水平;分析卵巢癌组织miR-144-3p、SGK3表达与患者临床病理特征及预后的关系.结果 (1)卵巢癌组织miR-144-3p表达水平显著低于正常卵巢组织、卵巢良性组织(P<0.05).(2)卵巢癌组织SGK3蛋白表达水平显著高于正常卵巢组织、卵巢良性组织(P<0.05).(3)卵巢癌组织中miR-144-3p表达水平与SGK3蛋白表达水平显著呈负相关(P<0.05).(4)卵巢癌组织miR-144-3 p、SGK3表达水平与患者的肿瘤直径、病理分期、淋巴结转移情况、分化程度有关(P<0.05),与患者的年龄、有无腹腔积液、组织学类型无关(P>0.05).(5)全部患者的中位生存期为40个月,术后1、3、5年的累积生存率分别为76.56%、53.13%、25.00%.miR-144-3p低表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为67.57%、37.84%、10.81%;miR-144-3p高表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为88.89%、74.07%、44.44%;两者生存率的差异有统计学意义(P=0.001).(6)SGK3高表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为68.29%、39.02%、9.76%;SGK3低表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为91.30%、78.26%、52.17%;两者生存率的差异有统计学意义(P=0.000).结论 miR-144-3p、SGK3表达异常与上皮性卵巢癌的发生、发展有关,可能成为上皮性卵巢癌临床治疗及预后的新靶点.

  • LncRNA HCG11通过调控miR-144-3p/ZEB1分子轴影响直肠癌的发生及转移

    作者:熊伟;张洪涛;杨之斌;余昆;张旋

    目的:探究lncRNA HCG11通过调控miR-144-3p上调锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-1 (zine fingerE box binding homeobox 1,ZEB1)基因的表达促进结直肠癌(colorectal cancer,CRC)发生及转移的分子机制.方法:收集2013年1月至2018年1月云南省肿瘤医院结直肠外科手术切除的78例CRC组织标本及其癌旁组织标本,采用qPCR检测HCG11在CRC癌组织及细胞系中表达情况,以构建的HCG11敲降载体、miR-144-3p模拟物及抑制剂转染CRC细胞株SW480及SW620,CCK-8法及克隆形成实验检测细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭情况.通过Wb及免疫荧光实验检测ZEB1及上皮间质特异蛋白(E-cadherin、Vimentin、α-catenin、Sox2、Nestin、Oct4及Nanog)的表达,通过双荧光素酶报告基因检测HCG11、miR-144-3p及ZEB1的靶向调控关系.建立小鼠移植瘤模型验证敲降HCG11后对小鼠移植瘤生长的抑制作用.结果:HCG11在CRC癌组织的表达显著高于癌旁组织(P<0.01),其在多种CRC细胞系中表达水平明显高于正常肠上皮细胞(均P<0.05);HCG11的表达与CRC患者肿瘤转移、临床分期及预后密切相关(P<0.05或P<0.01).敲降HCG11后显著抑制CRC细胞的增殖、迁移、侵袭、上皮间质转化及干细胞转化(均P<0.05).敲降HCG11显著上调miR-144-3p的表达水平(P<0.05),过表达miR-144-3p可显著抑制ZEB1基因的表达(P<0.05)及明显降低双荧光素酶活性(P<0.05).结论:HCG11通过调控miR-144-3p上调ZEB1的表达,从而促进CRC的发生及转移,HCG11可作为CRC诊断及治疗的靶点.

  • 乳腺癌组织中miR-144-3p和SGK3的表达水平及临床意义

    作者:许发功;杨立

    目的 探讨miR-144-3p和血清和糖皮质激素调节蛋白激酶3(SGK3)在乳腺癌组织中的表达水平及其临床意义.方法 收集2016年7月至2017年6月青海省中医院122例乳腺癌组织标本(乳腺癌组)及120例乳腺癌旁组织标本(正常组).实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测miR-144-3p mRNA、SGK3 mRNA表达,免疫组化法测定SGK3蛋白表达,根据检测结果分为miR-144-3p高表达组、低表达组,SGK3阳性组、阴性组,分析miR-144-3p mRNA、SGK3蛋白表达与乳腺癌患者临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier法对乳腺癌患者生存情况进行分析;Pearson相关性分析miR-144-3p mRNA与SGK3蛋白相关性.结果 乳腺癌组织中miR-144-3p mRNA表达量显著低于正常组(P<0.05),SGK3mRNA表达量显著高于正常组(P<0.05).与正常组相比,乳腺癌组SGK3蛋白阳性表达显著增强(P<0.01).临床病理参数显示,miR-144-3p mRNA表达水平与肿瘤大小、核分级、淋巴结转移、TNM分期、Ki67、P53蛋白表达水平相关,SGK3 mRNA与核分级、Ki67、P53蛋白表达水平相关(P<0.05).Kaplan-Meier曲线显示,miR-144-3p mRNA高表达组无进展生存期(PFS)、总生存期(OS) (21.23%、39.47%)均高于低表达组(19.68%、17.48%),SGK3阴性表达组PFS、OS(23.27%、41.64%)均高于低表达组(9.79%、17.68%),差异均有统计学意义(P<0.05).Pearson相关性分析显示,miR-144-3p mRNA与SGK3蛋白呈显著负相关(r=-0.597,P=0.030).结论 miR-144-3p在乳腺癌组织中低表达,SGK3高表达,两者呈负相关关系,miR-144-3p及SGK3的表达水平均与患者预后相关,可作为乳腺癌患者临床评定指标.

  • miR-144-3p在大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的表达及其靶向调控作用

    作者:陆进;张浩轩;俞鹏;龚义凤;龚喜旺;范强强;杨月

    目的 探讨在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中,miR-144-3p表达的生理功能和作用机制,并预测其靶基因,为成骨细胞分化的深入研究提供实验依据.方法 采用大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),并在体外诱导间充质干细的成骨分化,通过qRT-PCR检测成骨分化标志基因(Runx2,OCN)以及miR-144-3p的表达;通过向BMSCs株转染miR-144-3p mimic以及miR-144-3p inhibitor,检测miR-144-3p表达对BMSCs分化的影响,并通过Western blot以及qRT-PCR检测miR-144-3p靶蛋白在RNA水平以及蛋白水平的表达变化.结果 在体外诱导BMSCs成骨分化过程中,成骨分化标志基因(Runx2,OCN)的表达量逐渐升髙,而miR-144-3p的表达量则逐渐降低,到诱导成骨第21天表达水平低;检测各组ALP活性发现,相比于对照组miR-144-3p mimics转染组ALP活性显著降低(P<0.05),miR-144-3p inhibitor转染组ALP活性显著升高(P<0.05);运用多种靶基因预测数据库TargetScan、microRNA.org和miRanda对miR-144-3p进行靶基因的预测分析发现,smad4可能是miR-144-3p的靶基因;qRT-PCR结果表明,smad4在各组中的表达水平差异无统计学意义(P>0.05);Western blot结果显示,smad4在miR-144-3p mimics转染组表达显著下降,在miR-144-3p inhibitor转染组则显著升高,相比于对照组差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-144-3p参与调控大鼠BMSCs成骨分化,其抑制成骨分化的功能是通过降低smad4转录后的表达水平来实现.

  • MiR-144-3p抑制NFE2L2的表达降低宫颈癌细胞的增殖和迁移

    作者:王志景;马丽丽;王慧;程珂;何全中;孙力

    目的 研究miR-144-3P对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响,并初步探讨其作用机制.方法 通过瞬时转染miR-144-3p mimics(mimics组)、inhibitors (inhibitors组)和阴性对照(NC组)到宫颈癌Hela细胞中,以未干预Hela细胞为正常对照,CCK-8检测细胞增殖活性,Transwell检测细胞迁移能力,实时定量PCR和Western Blot检测细胞中NFE2L2的表达水平.结果 CCK-8结果显示,转染48 h后mimics组、inhibitors组和NC组的增殖率分别为(83.3±2.0)%、(113.1±0.8)%和(100.2±0.2)%,差异有统计学意义(P<0.05);transwell小室的细胞数目分别为(78.3±3.5)、(109.3±4.2)和(96.0±4.0)个,差异有统计学意义(P<0.05);实时定量PCR结果显示mimics组、inhibitors组和NC组NFE2L2的表达量分别为0.40±0.01、1.94±0.04和1.00±0.03,差异有统计学意义(P<0.05);Western Blot显示各组NFE2L2的表达量差异有统计学意义(P<0.05).结论 体外实验证实miR-144-3p能够抑制宫颈癌细胞的增殖和浸润,可能和抑制NFE2L2的表达有关.

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