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正常人结肠上皮细胞体外培养和鉴定
目的:探讨正常人肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)的分离、体外培养方法,为研究IEC以及与IEC相关疾病建立合适的细胞模型.方法:正常结肠黏膜取自外科手术的大肠恶性肿瘤患者距肿瘤10 cm的结肠组织,联合运用Ⅰ型胶原酶和嗜热菌蛋白酶消化分离IEC,接种于含多种促IEC生长的营养成分的DMEM培养液内,根据IEC和成纤维细胞贴壁时间的差异并运用胶原酶来纯化IEC,通过观察IEC生长状态、形态特征、超微结构及检测上皮细胞膜抗原对IEC进行鉴定.结果:联合运用Ⅰ型胶原酶和嗜热菌蛋白酶消化1 h可分离出健全绒毛隐窝单位,2 wk左右细胞可铺满整个玻片.免疫细胞化学检测该细胞为阳性细胞,纯度高.结论:联合运用Ⅰ型胶原酶和嗜热菌蛋白酶,可分离培养出高纯度未凋亡的ICE.
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大鼠骨髓间充质干细胞原代培养换液频度与细胞增生的关系
目的:探索成体大鼠的骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离、体外培养方法,观察采用不同的换液频度与细胞增生和生长的关系,为其应用提供实验依据.方法:从大鼠股骨获取骨髓,采用梯度离心的方法进行分离,在含10 mL/L胎牛血清的DMEM中常规培养,以MTT法检测不同的时间换液时细胞的生长曲线,并用碱性磷酸酶(AKP)检测的方法对分离的细胞进行鉴定.结果:采用梯度离心方法分离的骨髓间质干细胞的纯度较高,细胞活性佳,AKP染色为强阴性.首次换液后,每天更换培养液比每隔3-4 d换液一次更有利于MSCs的增生,原代长满培养瓶底比每隔2-3 d换液一次平均提前2 d.结论采用梯度离心的方法分离可获得纯度较高的骨髓间质干细胞,是简单易行的分离方法,每天更换培养液比每隔3-4 d换液一次更有利于MSCs的增生和形成形态均一的细胞集落.
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凝血酶致脑微血管内皮细胞凋亡作用
脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cell,BMVEC)在脑疾病发生、发展中占重要地位[1].近年来,BMVEC的体外培养方法已获成功[2].凝血酶是一种血清丝氨酸蛋白酶,除参与凝血外,它还促进BMVEC收缩并增加其通透性[3],并与肺动脉内皮细胞及神经元凋亡相关[4～6].本实验用体外原代培养的大鼠BMVEC研究凝血酶的作用,并用其受体拮抗剂水蛭素探讨致病机制.
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睾丸未成熟生精细胞体外培养的研究进展
一、前言1920年首次报道用血浆培养睾丸组织研究体外精子发生以来,随着对睾丸组织结构、各种细胞的功能和精子体内发生过程的逐步认识以及体外培养技术的发展,睾丸未成熟生精细胞的体外培养方法和技术有了很大改进.现对睾丸未成熟生精细胞体外培养的研究进展及在辅助生殖方面的应用综述如下.
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大鼠膀胱移行上皮细胞的原代培养研究
为建立膀胱移行上皮细胞的体外培养方法,我们对Wistar大鼠膀胱粘膜上皮细胞的原代培养方法进行研究.
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《内耳科学》书讯
《内耳科学》耗时5年由丁大连、蒋涛等撰写，近80万字和300多幅图片，共29个章，以内耳研究为中心，融会贯通了众多基础学科和应用学科知识，包括解剖学、组织胚胎学、生理学、病理学、生物化学、组织化学、神经生物学，细胞遗传学、生物物理学，物理学、心理学、药理学、毒理学，以及分子生物学等。除了介绍内耳基础解刨生理和形态学研究方法外，该书还专门介绍内耳组织体外培养方法、内耳胚胎发育、前庭生理及其研究方法、中枢听觉生理、内耳分子生物学研究方法、氨基糖苷类抗生素耳毒性研究、顺铂耳毒性和卡铂耳毒性研究、奥沙利铂耳毒性研究、、袢利尿剂引起的听觉损害、海仁酸及其耳毒性、百草枯的耳毒性作用和二甲亚砜的内耳损害等，是目前国内耳科学领域比较全面的专著之一。《内耳科学》因其翔实的研究资料和丰富的成果，令人耳目一新，美国著名耳科学家美国布法罗大学听觉耳聋研究中心主任沙尔维教授对该书评价“内耳细胞死亡的生物学基础研究取得了很大进展。本书介绍了许多与研究细胞凋亡或者细胞坏死的生物学基础有关的实用研究方法，并为解释老年性耳聋、噪音性耳聋、以及药物性耳聋所发生的内耳细胞死亡机制提供了重要的见解。”
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人外泌汗腺的分离培养和鉴定
我们探讨了人皮肤汗腺细胞的分离及体外培养方法,观察总结了汗腺细胞体外培养的生长特征,以获得稳定生长的正常皮肤汗腺细胞,为体外研究汗腺奠定基础.
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Flt3L与Tpo、SCF组合对脐血干/祖细胞的体外短期调控作用
我们对不同细胞因子组合在无血清无基质条件下对脐血干/祖细胞的调控作用进行了研究，旨在探讨一种体外培养方法，使脐血干/祖细胞在短时间内有效扩增，避免长期体外暴露引起的污染，避免异源血清带来的免疫反应和血源传播性疾病［1］，经济、省时，更适合临床应用。
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大鼠皮质神经细胞原代培养及缺氧缺糖性损害对其损伤的研究
急性缺血缺氧性脑损伤的发病率、致残率和病死率都很高,严重危害人类健康,因此,对其发病机制的研究和有效治疗方案的探索一直是研究的热点.但在体实验往往受到体液、呼吸、循环等复杂因素的影响,很难解释某单一因素的影响作用及强度.因此探索体外培养方法,建立缺氧缺糖损伤模型,对研究脑神经细胞的缺血缺氧性损害是十分必要的,是神经科学研究中一项不可缺少的手段.
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酶消化组织块盖玻片培养法原代培养人牙周膜细胞
人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDL)是牙周组织中重要的细胞成分,其可产生胶原纤维,能合成胶原并释放到胞外基质,对牙体组织有着重要作用.基于牙周膜细胞的重要角色, 广大学者对HPDL 的研究数不胜数,而体外培养是研究HPDL 体外模型的一种主要方法,传统的细胞体外培养方法有酶消化法和组织块法.
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子宫腺肌病在位内膜细胞原代培养及鉴定
子宫腺肌病是妇科常见病,主要表现痛经、不孕、经量增多、经期延长.其发病机制复杂,主要有基底层内膜扩散学说、苗勒管残余化生学说[1].通过子宫腺肌病在位内膜细胞体外培养系统,观察子宫腺肌病在位内膜对激素、各类药物、细胞因子的作用,有助于研究腺肌病发病机制,从而更好地预防、治疗本病.本研究旨在建立一套腺肌病在位细胞体外培养方法,以进一步对腺肌病发病机制进行研究.
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子宫腺肌病在位内膜细胞原代培养及鉴定
子宫腺肌病是妇科常见病,主要表现痛经、不孕、经量增多、经期延长.其发病机制复杂,主要有基底层内膜扩散学说、苗勒管残余化生学说[1].通过子宫腺肌病在位内膜细胞体外培养系统,观察子宫腺肌病在位内膜对激素、各类药物、细胞因子的作用,有助于研究腺肌病发病机制,从而更好地预防、治疗本病.本研究旨在建立一套腺肌病在位细胞体外培养方法,以进一步对腺肌病发病机制进行研究.
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新生大鼠少突胶质前体细胞的培养
体外培养少突胶质细胞已证明其细胞学特征与在体的发育相近[1～3],而且改变了以前对少突胶质细胞突起较少的错误认识.少突胶质细胞的形态、功能、发育以及与神经元的相互联系逐渐被神经科学工作者所重视,而其前体细胞的增殖和纯化是进一步研究的基础.少突胶质前体细胞的连续发育过程报道也较少.本室在既往研究的基础上对少突胶质前体细胞的体外培养方法进行改良,然后对少突胶质细胞系部分发育阶段进行了形态学观察,以期为深入了解少突胶质细胞系的细胞生物学特性及探索发育神经生物学的规律提供帮助.
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人表皮干细胞体外培养及分化特性的研究
目的探索人表皮干细胞(KSC)的筛选和体外培养方法,了解表皮干细胞在体外快速扩增的条件及其分化特性,为研究创伤愈合和组织工程提供良好的细胞模型;
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人博卡病毒在上海地区儿童下呼吸道感染的流行病学
2005年9月首次报道了在呼吸道感染儿童的鼻咽分泌物标本中检测到人博卡病毒( human bocavirus,HBoV),根据基因序列和结构特征HBoV被归属于细小病毒科[1].随后很多国家和地区都证实了HBoV在世界范围内流行.由于目前缺乏动物感染模型和病毒体外培养方法,HBoV的致病性不能通过经典的Koch理论来证实,但多数临床研究结果支持HBoV确实与儿童呼吸道感染有关.大部分病例对照研究报道,HBoV在呼吸道感染儿童标本中检出率明显高于无症状对照儿童[2-8],一些HBoV呼吸道感染的儿童同时存在血清抗体转化及病毒血症[7,9-11].
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改良兔晶状体上皮细胞体外培养
晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)是晶状体生长、分化、代谢、合成、转运活跃的部位.实验证明,LECs凋亡是各种白内障共同的细胞学基础.成功进行体外培养LECs对观察细胞分化、研究白内障和后囊混浊的形成机制以及筛选防治后囊混浊的药物均有十分重要的价值.我院于2005年3月～7月采用改良的兔LECs的体外培养方法获得成功,现将结果报道如下.
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用原代培养方法建立炎症性牙龈和牙周膜组织细胞有限细胞系
体外培养方法、培养条件、病例标本来源的特殊性、细胞种类及实验技巧等均影响各自原代细胞培养的成功率,同时也是限制了很多研究的原因之一.虽然已有报道尝试通过克隆杂交、基因转染技术建成体外无限细胞系,但不可避免地含有部分肿瘤样细胞的特性,其结果的参考价值受到影响.临床健康者来源的牙龈和牙周膜成纤维细胞培养方法已有介绍且成功率较高[1～4],但炎性病变时牙龈和牙周组织的表现和反应至今未见专门报道.作者结合有关炎症牙周组织成纤维细胞体外培养实验报道[5～7],将培养牙周炎症组织原代成纤维细胞的方法介绍如下.
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SD大鼠体外神经元培养的探讨
目的 在不同时间加入阿糖胞苷,并分别采用两种不同培养基对神经元进行体外培养,通过观察新生SD大鼠神经元细胞的生长情况和神经元纯度,建立更合理的神经元体外培养方法. 方法 采用出生24h以内的SD大鼠脑组织,采用传统的神经元体外培养方法,于不同时间加入阿糖胞苷,之后每48h半量换培养基一次,于10天后观察神经元细胞的生长情况.结果表明采用neurolbasal培养基,并与接种细胞后24h加入阿糖胞苷,可以获得更高纯度,更高活性的大脑皮质神经元.
