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TAGLN真核表达载体pcDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-TAG-LN-mut及稳定转染细胞株的构建
目的:构建携tagln基因的真核表达载体,建立稳定转染该质粒的人结肠癌细胞株RKO并鉴定.方法:通过Gateway克隆技术,使用pOTB7-TAGLN-mut与pDONR221进行BP重组反应,产生入门克隆,再与pcDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST空载体进行LR重组反应,生成目的质粒pcDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-TAGLN-mut.通过测序验证目的质粒的插入序列.将携带tagln的真核表达载体和对照质粒稳定转染至人结肠癌细胞株RKO.通过实时荧光定量PCR和免疫印迹检测tagln的mRNA和蛋白表达水平.通过细胞侵袭实验了解transgelin在结肠癌细胞RKO中的作用.结果:携带tagln的真核表达载体测序分析显示插入序列及位点正确；实时荧光定量PCR及免疫印迹结果显示,稳定转染重组目的质粒的细胞株(RKO-TAGLN细胞)中tagln的表达水平与转染对照质粒的细胞株(RKO-CTRL细胞)及野生型RKO细胞相比明显上调,差异具有统计学意义(mRNA相对表达水平分别为45.58±12.79、1.32±0.43和1,P＜0.01；蛋白质灰度定量值为1.69±0.04、0.29±0.05和0.29±0.04,P＜0.01).细胞侵袭实验提示,RKO-TAGLN细胞较RKO-CTRL细胞的侵袭能力提高(161.76％±61.18％,P＜0.01).结论:成功构建携tagln基因的真核表达载体并建立过表达transgelin的稳定细胞株和对照细胞株,为研究transgelin在结肠癌中的作用奠定基础.
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靶向干扰骨架蛋白Transgelin抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长
目的 探讨靶向干扰骨架蛋白Transgelin对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响.方法 设计并体外合成靶向Transgelin的短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,将其转染人胰腺癌细胞BxPC3,采用RT-PCR、Western印迹法检测转染前后Transgelin表达的变化.成功造模胰腺癌裸鼠24只,按皮下注入细胞不同均分为3组:实验组(接种BxPC3/shRNA)、阴性对照组(接种空质粒转染细胞BxPC3/Neo)和空白对照组(接种未转染细胞BxPC3).每周测量肿瘤大小,术后第28天处死所有裸鼠,计算瘤体体积,治疗前、后裸鼠体重的变化以及抑瘤率.免疫组织化学法检测移植瘤组织切片中Transgelin和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达.结果 实验组、阴性对照组和空白对照组在各时间段的肿瘤体积增长差异有统计学意义(均P ＜0.05).实验组在第21,28天肿瘤体积显著小于阴性对照组和空白对照组(均P＜ 0.05).实验组第28天瘤重为(0.74±0.21)g,阴性对照组为(1.42±0.28)g,空白组为(1.59±0.24)g.实验组瘤重与阴性、空白对照组相比差异均有统计学意义(均P ＜0.05),抑瘤率达53.5％.实验组PCNA指数显著低于阴性对照组和空白对照组(均P＜0.05).结论 靶向封闭Transgelin基因能明显抑制胰腺癌细胞BxPC3在裸鼠体内的增殖及肿瘤生长.
关键词： 胰腺肿瘤 RNA 小分子干扰 Transgelin -
子宫肌瘤组织Transgelin基因表达及其临床意义的研究
目的:检测Transgelin基因mRNA及蛋白在子宫肌瘤中的表达,探讨Transgelin基因与子宫肌瘤发生、发展的关系.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法,检测30例子宫肌瘤组织、30例子宫肌瘤包膜外2 cm子宫肌层组织和10例正常子宫肌层组织中Transgelin基因mRNA及蛋白的表达.结果:Transgelin基因mRNA在子宫肌瘤组织中阳性表达率及相对含量分别为23.3%和50.57±20.16,均低于子宫肌瘤包膜外2 cm子宫肌层组织的100.0%和84.62±6.12以及正常子宫肌层组织的100.0%和85.99±6.99,P<0.001.子宫肌瘤包膜外2 cm子宫肌层组织和正常子宫肌层组织中Transgelin基因mRNA的相对含量差异无统计学意义,P0.05.Transgelin蛋白在子宫肌瘤组织中阳性表达率及相对含量分别为16.7%和23.46±16.54,均低于子宫肌瘤包膜外2 cm子宫肌层组织的100.0%和61.08±8.73以及正常子宫肌层组织的100.0%和67.19±7.62,P<0.001.子宫肌瘤包膜外2 cm子宫肌层组织和正常子宫肌层组织中Transgelin蛋白的相对含量差异无统计学意义,P0.05.结论:Transgelin基因可能是子宫肌瘤发生过程中的抑制因素,与子宫肌瘤的发生、发展可能有关.
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Transgelin研究新进展
胶转蛋白(TAGLN)是一种未知功能的22kDa蛋白质,被命名为SM22[1].该蛋白质曾在多种样本中被鉴别出,并在鼠p27、WS3-10、胶转蛋白和SM22的一些不同命名下对其进行了研究[2].物种间的基因和蛋白质序列高度保留,且在果蝇[3]和秀丽隐杆线虫[4]中鉴别出同源性.胶转蛋白是肌动结合蛋白钙调蛋白家族中的一种,存在于细胞骨架器官中[2].现将Transgelin研究综述表述如下.
关键词： Transgelin SM22 TGF-β MMP-9 cancer -
负载肝癌细胞裂解物的树突状细胞Transgelin表达水平与其功能的关系
目的 探讨负载肝癌细胞裂解物的树突状细胞(DC)Transgelin表达与其表型和功能的关系.方法 正常人来源的DC分成3组,分别为负载高转移潜能肝癌细胞MHCC97H、低转移潜能肝癌细胞MHCC97L的裂解物组和无负载DC(对照)组.用共聚焦显微镜和扫描电子显微镜观察DC形态;流式细胞仪检测DC表型,混合淋巴细胞反应及其上清液中白细胞介素(IL)-12含量测定以反映DC功能;Western blot测定DC中Transgelin的表达.结果 3组DC的形态未有明显不同,负载低转移潜能肝细胞癌组DC的CD80、CD83、CD86、混合淋巴细胞反应和IL-12含量明显高于对照组(P<0.01);负载高转移潜能肝细胞癌组DC的CD80、CD86、Transgelin表达明显高于对照组(P<0.05);负载高转移潜能肝细胞癌组DC的CD80、CD83、CD86和IL-12含量明显低于低转移组(P<0.05),而Transgelin表达则高于低转移组.结论 负载肝细胞癌裂解物的DC中Transgelin表达与其表型和功能有关.
关键词： 癌 肝细胞 树突细胞 Transgelin -
Transgelin在肺部疾病的作用研究进展
钙调蛋白家族的转凝蛋白(Transgelin,TAGLN)是一种重要的细胞骨架相关蛋白,近年来的研究发现,它在肺部疾病的许多生理病理过程如细胞迁移、增殖、分化及凋亡中均发挥重要作用.本文对Transgelin的基因结构调控、蛋白表达和功能以及其在多种肺部疾病中的作用进行综述,为深入探讨Transgelin在肺部疾病中的重要作用及相关机制奠定基础.
关键词： Transgelin 肺癌 肺动脉高压 哮喘 肺纤维化
