hTRT反义基因对胃癌细胞端粒酶及凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨人端粒酶蛋白催化活性亚单位(human telomerasereversetranscriptase,hTRT)反义基因治疗对胃癌细胞端粒酶及凋亡相关基因表达的影响.方法:采用基因重组的方法,构建hTRT正、反义真核表达载体,并用脂质体导入SGC-7901胃癌细胞株,检测转染细胞增殖能力、细胞周期、端粒酶活性、端粒酶亚单位及bd-2,c-myc基因表达的变化.结果:成功构建hTRT正、反义真核表达载体,并导入胃癌细胞,筛选出稳定表达正、反义hTRT的阳性克隆7901-S,7901-AS1和7901-AS2.反义细胞增生能力明显减弱,凋亡细胞和G0/G1期细胞增多,增生指数下降,端粒酶活性下降,端粒酶亚单位hTRT的表达减少,而TP1,hTR无明显变化,进一步研究发现bd-2和c-myc基因的表达在转录和翻译水平均明显下调.结论:hTRT和c-myc,bcl-2基因的调节作用是相互的,反义hTRT基因可以通过下调胃癌细胞hTRT、c-myc、bcl-2基因的表达,一方面降低端粒酶活性,另一方面一定程度增加凋亡细胞的比率,从而抑制细胞的生长.

AIM To investigate the effect of recombinant human tumor necrosis factor (rbTNF) on telomerase activityin hepatoma cell line HepG2 and HepG1-6.METHODS TRAP-ELISA method was used to determine the telomerase activity in HepG2 and HepG1-6cells which were treated by different concentrations of rhTNF. In addition, the TERTLuc (800) plasmid wastransiently transfected, which was inserted 800 bp of the human telomerase reverse transcriptase (hTERT)promoter, into HepG2 cells by Lipofect. Different concentrations of rhTNF were added into the culturemedia 2 hours later, and the activity of the hTERT promoter was detected 48 hours after transfection.RESULTS The telomerase activity of HepG2 was suppressed by rhTNF in a dose-dependent manner. Theresults also revealed that the activity of hTERT promoter was inhibited linearly with rhTNF at the dose of 10- 1000 IU/mL.CONCLUSION Inhibition of the hTERT promoter expression by rhTNF may contribute to its anti-tumoractivity.

《解放军药学学报》投稿须知

表示化学位移量值的ppm亦废弃，如3.8ppm应写作δ=3.8；压力，压强的单位符号为Pa，但在医学、生物学专业表示血压的mmHg仍可延用，需用kPa加注；[放射性]活度的量单位用贝克[勒尔]Bq(原放射性强度量名称和量单位居里Ci及放射计数率cpm、dpm、cps、dps均废止，换算关系：1Ci=3.7×1010 Bq,1dpm=16.67mBq,1Bq=1衰变差次/s),照射剂量单位库[仑]每千克C/kg(伦琴每秒R/s已废除)，吸收剂量单位Gy/s[戈(瑞)每秒](拉德每秒rad/s已废除)。　　(15)　表、图和照片　凡文字能表述清楚者，不必再用表、图。凡表示事物发展态势、走向、趋势的数据组，用表格形式表示不明确者，应作图。但图、表、照片均应有自明性，正文中则不必再重述表、图中的数据。图、表应设题，表题在表上，图题在图下。表、图均排序，只有一个时，仍以“表1”、“图1”表示。表格两端开口，不用纵线和斜线。表内数据位次对齐，尾数不齐补“0”。同项同组数据精确度应一致。未作实验者，数据项内以“…”填充，实验结果为“0”者，应如实填写，不用“-”表示。仪器描绘紫外、红外、色谱、质谱图和生理、药理，心、脑电图等图稿，请附原图；坐标曲线图、直方图、圆饼图等图稿，如系计算机绘制，附白纸打印图和软盘；其它图稿用绘图墨水在优质薄白纸上绘制，设计应合理，美观，绘制应准确细腻。图题、图注文字、数字、字母等用6号黑体激光打字贴附。无激光打印机者，用铅笔在相应位置书写，由本刊制作。黑白照片对比度合适，组织、细胞的光学显微镜或电子显微镜照片分辨率适当，亦可用彩色片。照片标出尺寸或放大倍数，背面用铅笔注明文题、作者姓名，用“”注明照片方位。图和照片尺寸规格：单栏排版60mm×80mm，双栏排版80mm×170mm。　　（16）　讨论　重点应放在该文的新发现，新结论和新观点及其客观性评价上。可对结论进行有条件、有预见、有把握地分析和推论，阐明实验实质性意义。可说明该文现有条件下某些难以或未控制之处及其对本实验可能有意义的影响，提出本实验今后准备或尚需进一步深入研究的设想。讨论不是实验结果的重复和文献罗列，也应避免与本实验根据不足的不成熟推论。　　（17）　参考文献　限作者参阅过近年公开发表的原始文献。引用要恰当，在内容或作者后，按文中出现的先后顺序加右上角标序。正文中引用作者姓名时应写全名。文献作者只列前3名，其后加等(中文)、他(日文)、идр(俄文)或et al(西文，斜体)。外籍作者姓名，名前姓后，用缩写，不加缩略号。作者名间用“，”隔开；不用“和”或“and”。 文献均列出文题。西文刊名用缩写名，名下划横线(——)以示排斜体。　　每条文献题名或书名后加文献类型标识码：专著[M]，论文集[C]，报纸文章[N]，期刊文章[J]，学位论文[D]，报告[R]，标准[S]，专利[P]；格式如下：[期刊]作者.文题[文献类别标识码].刊名，年，卷(期)：起页例：徐晓红，章子贵，吴馥梅.神经生长因子改善衰老记忆障碍及突触机制的影响[J].药学学报，2000，35(10)：729Aldous KW,Marean AJ,Dehart MJ, et al.Effects of tamoxifen on telomerase activity in breast carcinnoma cell lines[J].Cancer,1999,(85):1523[著作]作者.书名[文献类别标识码].版次.出版地：出版者，出版年.起止页例：陈奇.中药药理研究方法学[M].第1版.北京：人民卫生出版社，1994.239～240[专著中折出的文献]作者.文题(篇)名.见(In)：专著编者.书名[文献类别标识码].版次.出版地：出版者，出版年.起止页例：王本祥.鹿茸抑制单胺氧化酶成分的研究.见周金黄.中药免疫药理学[M].第1版，北京：人民军医出版社，1994；290～298[专利文献]专利申请者.专利题名[文献类别标识码].专利国别，专利号.出版日期例：姜锡洲.一种温热外敷药剂的制备方法[S].中国专利，881056073.1989-07-265　其它体裁文稿撰写要求　凡与研究论文格式相同或相近内容部分，可参照研究论文要求的相应部分撰写，其它部分请参照本刊同类文稿格式。（撰文并编辑　刘贺之）

Objectives. In order to identify the relationship between telomerase and the biological effect of radiation injury,and investigate the role of human telomerase catalytic subunit gene (hEST2) reverse transcriptase(RT) segment in the expression of telomerase activity. Methods. Tumor HeLa cells, KB cells and A431 cells were employed to measure the change in telomerase activity after 60Co ray irradiation at RNA level and protein level. Quantitative PCR and Northern blotting were used to determine the expression of hEST2 RT segment that encodes seven motifs of the human telomeres, a PCR based telomeric repeat amplification protocol (TRAP)was used to assay telomerase activity after exposure to radiation. Results. Both of telomerase activity and the expression hEST2 RT segment were decreased with increasing dosage of radiation. In addition, testing the expression of motifs domain is similar to the measurement of telomerase activity. Conclusion. The detection of the hEST2 RT segment by Northern blotting and quantitative PCR are new methods for testing telomerase activity. Furthermore, radiation can cause a dose dependent decrease in telomerase activity. The effect of radiation on telomerase is one possible reason for the death of cancer cells after irradiation.