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卡托普利预处理对急性心肌损伤大鼠心肌营养素1和肿瘤坏死因子α表达的影响
心肌营养素1(CT-1)可促进未成熟心肌细胞的存活和增殖,具有心肌保护作用.卡托普利(Cap)则可通过缺血预适应减轻心肌损伤.本实验通过给大鼠腹腔注射异丙基肾上腺素(Iso),建立急性心肌损伤的动物模型,探讨血管紧张素转换酶抑制剂的心肌保护作用是否与CT-1和TNF-α的表达有关,从而为临床上如何干预CT-1的表达提供理论依据,并为某些心血管疾病的治疗开辟新的途径.
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未成熟心肌细胞体外培养概要及其应用进展
未成熟心肌细胞的培养是以新生动物和胚胎的心肌组织作为实验材料,采用酶消化法在体外培养建立的一种实验模型,该模型建立的关键在于如何提高心肌细胞的存活率、搏动率和纯化率,在电生理、中药、心血管疾病研究领域已显示其重要意义.通过检索国内外相关文献,对未成熟心肌细胞的培养方法进行着重阐述,并结合心肌细胞的形态生理学、鉴定方法、培养过程中的影响因素和应用等方面进行综合分析.
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HOE642对减轻缺氧／复氧致未成熟兔心肌细胞内钙超载的作用
目的：观察Na+/H+交换抑制剂HOE642（Cariporide）对缺氧／再复氧前后未成熟兔心肌细胞内游离钙离子浓度(［Ca2+］i）的影响，探讨HOE642对未成熟心肌保护机制。方法：6枚新西兰幼兔心脏，用酶解法分离成单个未成熟兔心肌细胞悬液，每份细胞悬液均随机分为基础组、对照组和实验组，基础组未经缺氧直接测量细胞内Ca2+及心肌酶含量（CK、LDH），而后两组均经受缺氧60 min，再复氧30 min后测量，其中实验组于缺氧时加入HOE642（1 μmol／L）。用Flou-3／AM标记，激光扫描共聚焦显微镜测定单个未成熟免心肌细胞内游离钙浓度。另测定三组心肌细胞悬液中心肌酶含量（CK、LDH）。结果：缺氧／再复氧后对照组未成熟兔心肌细胞内［Ca2+］i（2814±236/1375±102）及心肌酶漏出量明显高于缺氧前基础值(P＜0.01);再复氧后HOE642处理组心肌细胞内［Ca2+］i较缺氧前基础值增加不显著（1446±128/1375±102,P>0.05);而较未用药对照组明显减少（1446±128／2814±236，P<0.01）。而HOE642处理组细胞悬液心肌酶漏出量较基础值有所增加，但其相差不显著，而较对照组有心肌酶漏出量明显减少，两者相差非常显著（P＜0．01）。说明HOE642对缺氧／再复氧后未成熟兔心肌细胞内游离钙超载具有明显的抑制作用。结论：HOE642对未成熟心肌的保护机制可能是抑制心肌细胞内游离钙超载引起的心肌缺血／再灌注损伤。
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二氮嗪介导的延迟预处理对未成熟心肌的保护机制研究
目的 研究二氮嗪(DZX)介导的延迟预处理对缺血缺氧环境中未成熟心肌的保护作用机制.方法 分离培养新生鼠心肌细胞随机分为:①缺氧组;②DZX组:细胞缺氧培养前24 h放入含100μmol/L的DZX的培养液15min;③DZX+PDTC组:细胞缺氧培养前24 h放人含100μmol/LDZX和500/μmol/L二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的培养液15 min;④对照组.前3组细胞在缺氧模型中培养16 h,对照组一直有氧培养.采用 Hoechst 染色、Annexin V/PI 流式检测凋亡细胞.Western Blot 检测心肌细胞Bax和Bcl-2的表达.结果 ① 流式检测示DZX组较缺氧组细胞凋亡明显降低(P<0.01),Hoechst染色心肌凋亡细胞也减少;② 与DZX组比较,加入PDTC后,流式检测显示细胞凋亡显著增多(P<0.01),Hoechst染色心肌细胞凋亡增多,Western blot 检测显示 Bcl-2表达减少,Bax表达增加.结论 线粒体钾通道开放剂二氮嗪介导的延迟预处理对心肌有明显的保护作用;位于下游的NF-кB通过调控促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的的表达在未成熟心肌的延迟预处理中起着关键作用.
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热休克蛋白70对未成熟心肌细胞功能的影响
目的探讨热休克蛋白70(HSP70)对未成熟心肌细胞功能的影响.方法健康新生长耳大白兔随机分为2组.对照组(C):腹腔注射生理盐水0.4 ml,注射后24 h取离体心脏,常规建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注15 min转为工作心15 min后停灌45 min,恢复灌注15 min改为工作心30 min.实验组(E):腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素, 24 h后取离体心脏,方法同对照组.测定心肌细胞中HSP70含量及相关生化指标并作统计学处理比较.结果 HSP70含量E组明显高于C组;E组ATP含量、SOD活性方面均优于C组(P＜0.01),MDA含量、CK、LDH漏出率方面均低于C组(P＜0.01),心肌线粒体Ca2+-ATPase活性、m均优于C组(P＜0.01),心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+含量低于C组(P＜0.01).结论 HSP70对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能具有明显的保护作用.
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金属硫蛋白对缺血/再灌注未成熟心肌细胞功能的影响
目的探讨诱导金属硫蛋白(MT)在未成熟心肌中的表达对缺血/再灌注未成熟心肌细胞功能的影响.方法采用Langendorff离体灌注模型,大白兔分为4组:对照组(C,n=9),腹腔注射蒸馏水0.3ml,按注射后时间12、24、和48 h取离体心脏,灌注KH液15 min转为工作心15 min,全心停灌45min,恢复灌注15 min改为工作心30 min;E12h组(n=6)、E24h组(n=6)、E48h组(n=6)各组分别按腹腔注射3.6%ZnSO4(1.5 ml/kg)后12、24和48 h取离体心脏,常规建立Langendorff灌注模型.方法同C组.以心肌细胞中MT含量、CK和LDH漏出率、ATP含量、心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+-ATPase活性及其Ca2+含量、心肌线粒体合成ATP能力[ATP]m作为观察指标.结果腹腔注射ZnSO4后12 h MT开始表达,24h达高峰,48 h仍在高表达水平.MT含量在E24h、E48h组与C、E12h组比较明显增高;E24h、E485h组ATP含量优于C组和E12h组(P＜0.05),CK、LDH漏出率均低于C组和E12h组(P＜0.05),心肌线粒体Ca2+-ATPase活性、[ATP]m均优于C组和E12h组(P＜0.01),心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+含量低于C组和E12h组(P＜0.01).结论腹腔注射ZnSO4可诱导心肌MT长时间表达,MT可减轻未成熟心肌细胞缺血/再灌注损伤.
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二氮嗪预处理在培养的未成熟鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的保护作用
目的研究线粒体ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪预处理对培养的未成熟心肌细胞的保护作用.方法传代培养的未成熟S-D大鼠心肌细胞,随机分为对照组、缺氧/复氧组(缺氧3 h、复氧3 h)、二氮嗪(30μmlo/L)组、格列本脲(10 μmol/L)组、超氧化物歧化酶(SOD,3×105U/L)/过氧化氢酶(CAT,4.5×105U/L)组、N-2乙酰丙酰基甘氨酸(MPG,100μmol/L)组.实验结束时全自动生化仪检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、台盼蓝染色法计算细胞死亡率、硫代巴比妥酸法测定细胞内丙二醛(MDA)含量、铈化学染色法观察细胞线粒体结构.结果二氮嗪预处理后细胞死亡率、细胞内MDA含量、培养液中LDH活性较缺氧/复氧组降低(P《0.01),铈-氧自由基(Ce-ROS)形成减少;格列本脲、SOD/CAT和MPG可以阻断此保护作用.结论二氮嗪预处理对未成熟心肌有保护作用,这种保护作用与氧自由基有关.
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未成熟心肌保护的研究进展
随着先天性心脏病外科手术的发展,手术患者日趋低龄化,使得未成熟心肌保护的研究日益显得重要.与未成熟心肌生理、功能相适应的,有别于成熟心肌的保护措施的寻求仍是小儿心脏外科关注的焦点.未成熟心肌保护的实验研究比较多,与临床之间仍有很大的差距.1.成熟心肌与未成熟心肌的差别尽管人的心肌从未成熟到成熟转化的年龄界限尚未确定[1],但成熟与未成熟心肌之间的差别是很明确、很重要的.在结构上,未成熟心肌细胞小,缺乏横管,肌原纤维、线粒体少,肌浆网稀疏,含水量高,糖原颗粒丰富.在功能上,未成熟心肌收缩力较弱,耗能少,顺应性差,心肌功能储备少.在代谢方面,未成熟心肌糖原分解和无氧酵解的能力强,主要能量来源于葡萄糖或糖原的有氧分解和无氧酵解,成熟心肌主要依靠游离脂肪酸的β氧化供能.在对缺氧的耐受方面,未成熟心肌对缺氧的耐受较成熟心肌高,对酸中毒的耐受力大.
