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UW液用于大鼠离断肢体灌注保存的实验研究
目的：探讨用 UW液灌注离体断肢以延长其活性的效果。方法：选择雄性健康成年 Wistar大鼠20只,体重300~400 g,手术离断双下肢。实验分两部分。实验一：随机选择10只大鼠,再随机分为灌注组(4℃下采用 UW液自股动脉灌注离断肢体直至灌出液清亮为止)和对照组(不予灌注直接冰箱保存),每组5只。两组均置于4℃冰箱内低温保存24 h,肢体离断后每间隔6 h取离断肢体肌肉组织行病理学观察。实验二：另10只大鼠随机分为连续灌注组(4℃下以12 ml/h的速度持续灌注 UW液24 h)和间断灌注组(4℃下于肢体离断后4、8、12、16、20和24 h以12 ml/h的速度分别灌注 UW液20 min),每组5只。离断肢体在4℃冰箱内保存灌注24 h,收集离断后4、8、12、16、20和24 h 的灌注流出液,检测碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸转氨酶(ALT)、葡萄糖(GLU)含量,同时在离体12 h、24 h取肌肉组织标本,行 HE 染色观察组织结构变化,透射电镜观察其细胞超微结构的变化。结果：实验一：在各相同时间点,灌注组较对照组肌纤维水肿程度轻,断裂少,细胞较少发生横纹溶解。实验二：连续灌注组与间断灌注组比较,肌纤维均轻度水肿,细胞出现横纹溶解,线粒体肿胀,发生破裂及空泡化现象,两组病理及超微结构改变程度相似,各时间点两组之间 ALP、ALT、GLU 差异无显著性(P>0.05)。结论：使用 UW液对离断肢体进行灌注后低温保存效果更好。UW液24 h 间断灌注与24 h 连续灌注两种方法对离断肢体的保护效果相当。
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SX-1液对肝脏保存效果的实验研究
目的 应用改良后的Kamada二袖套法大鼠原位肝移植模型,检验SX-1液、HC-A液和UW液对肝脏保存的效果.方法 在无菌条件下配制肝脏保存液.建立大鼠原位肝移植模型.使用SX-1液、UW液和HC-A液保存大鼠肝脏2、8、24 h后行大鼠原位肝移植,于移植后6 h比较各项肝脏功能.结果 对于ALT、AST,SX-1液组(2、8、24 h)与UW液组同步升高,分析无统计学意义(P＞0.05),与HC-A液组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).对于LDH,SX-1液组(2 h、8 h、24 h)与HC-A液组同步升高,差异无统计学意义(P＞0.05),与UW液组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).对于分泌胆汁的肝脏个数,各组别与分泌胆汁的肝脏个数无差别(P＞0.05).本组内各时间点分泌胆汁个数有差别(P＜0.05).随肝脏保存时间增长,分泌胆汁的肝脏个数减少.结论 经大鼠原位肝移植模型证实,SX-1液在肝脏酶学方面与UW液作用相当,超过HC-A液水平.肝移植后6 h肝脏分泌胆汁的个数方面,SX-1液与HC-A液、UW液间无明显差别.
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尼可地尔改善心脏停搏液对心脏的保护作用
目的观察在HTK液和UW液中加入尼可地尔(Nicorandil)对心肌保存液保存效果的影响.方法实验分为4组:UW液(U)组;HTK液(H)组;UW液组+Nicorandil(U+N)组;HTK液+Nicorandil(H+N)组;每组8只大白鼠.麻醉和抗凝后,快速取下鼠心并悬挂在Langendorff灌注模型上灌注,测定血流动力学基础值.分别用四组保存液灌停离体鼠心并低温(4℃)浸泡保存6h.复温、复灌后再次测定血流动力学值,留取标本分别测定心肌水含量、心肌酶漏出量、心肌细胞ATP和CP含量和心肌细胞超微结构变化.结果心肌血流动力学恢复率:H+N组＞U+N组＞H组＞U组.心肌水含量:4组间差异无显著意义.灌脉流出液中心肌酶漏出量:H+N组＜H组＜U+N组＜U组.心肌中ATP和CP含量:H+N组＞U+N组＞H组＞U组.心肌细胞超微结构变化:H+N组心肌损害轻,H组轻于U+N组,U组心肌损害严重.结论HTK液和UW液都是比较合适的心肌保存液,HTK液对心肌的保护作用优于UW液,钾离子通道开放剂Nicorandil能够善器官保存液HTK液和UW液对心肌的保存效果.
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离体鼠心低温器官保存液保存后超微结构的分析
目的 评价阜外改良心肌保存液(fuwai modified solution,FWM),HTK液(histidine-tryptophan-ketoglurate solution)和UW液(university of wisconsin solution)对离体鼠心的保存效果.方法 20只雄性Wistar大鼠随机分为四组(Control组、FWM组、HTK组和UW组),每组5只.Control组切取鼠心后立即移至Langendorff装置灌注1h,其它三组分别用不同的保存液4℃下保存6 h,然后将离体鼠心移至Langendorff装置复灌1 h,测定复灌1h后的心肌含水量变化,并用透射电镜观察复灌1 h后心肌超微结构的改变.结果 UW组心肌含水量高于Control、FWM和HTK组,而Control,FWM和HTK三组相比无显著统计学差异(P＞0.05).电镜结果显示,Control组和FWM组心肌超微结构基本正常,HTK组出现心肌超微结构改变,而UW组心肌超微结构改变严重.结论 FWM液的心肌保存效果优于HTK和UW液.
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异体脸面复合组织移植供体保存的研究
目的 探讨异体脸面部复合组织移植供体的有效保存方法,以减轻组织缺血缺氧损伤.方法 取狗的脸面部复合组织瓣,分别用4℃生理盐水和UW液灌注、保存,用MTT法检测复合组织瓣取下即刻、保存12、24、48 h的各组织的活力,计算其与未保存组织相比的活力百分比,并进行病理学观察.结果 各种组织用UW液保存48 h后活力仍为未保存组织的75%以上.保存后24、48 h活力百分比与生理盐水组比较差异有统计学意义(P＜0.05).病理切片示保存24、48 h,生理盐水组皮肤、黏膜组织真皮层纤维排列疏松,轻度水肿,皮肤毛囊周围可见组织玻璃化,毛囊内可见细胞水肿,肌束间间隙扩大,腺体有部分腺泡细胞界限模糊,其他组织未见明显变化;UW液组各组织未见明显组织学变化.结论 UW液可以考虑用于临床异体脸面部复合组织瓣保存的保存液.
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长时间供心保护的原位心脏移植
目的总结3例供心离体保护时间较长的原位心脏移植过程和近期生存观察情况.方法2005年3～8月,先后对3例患有终末期扩张性心肌病患者(心功能均为Ⅳ级)行心脏移植手术;3例供体心脏离体保存时间分别为542、367、485 min.移植手术方式采用双腔静脉吻合法.供心的保护过程:主动脉根部灌注心脏停搏液,快速取下心脏后再灌注冷UW液,并放置于UW液中低温保存.结果3例移植手术均获成功,目前患者心功能在I～Ⅱ级,生活质量好.结论合适的供体、快捷的心脏获取方法和心肌保存方法,在离体心脏保存时间较长时,合适的受体,并选用双腔静脉吻合技术,可收到良好手术效果.
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pH 值对原代大鼠肝细胞冻存效果的影响
目的 研究不同pH值的条件下原代大鼠肝细胞冻存的效果.方法 将大鼠肝细胞保存在含有20％ FSB和12％DMSO的UW液和RPMI 1640液中,并把两种保存液的pH值调节成7.1、7.4、7.7.于冻存7、14、28天后进行复苏,使用存活率、MTT、LDH漏出浓度3项指标进行对比分析.结果 7天时,pH值7.4组的各项指标明显优于其他两组,14天和28天时,pH值7.7组与pH值7.4组均明显优于pH值7.1组.结论 pH值7.4和pH值7.7的保存效果优于pH值7.1,且随着时间的延长,差距有扩大的趋势,说明中性或略偏碱性环境更利于肝细胞的长期保存.
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UW心肌保存液组成探讨
UW液是80年代末由美国威斯康星大学(University of Wisconsin)研制的.UW液初的成分是蜜三糖及乳糖醛酸,通过不断实践及研究,加入新成分,形成了现在以羟乙基淀粉为基础的灌注保存液.这种液体目前已广泛应用于北美地区的心脏移植手术中.现就UW液组成成分在心肌保存中的作用探讨如下.
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Celsior液、HTK液和UW液对心脏保存效果的实验研究
目的应用Langendorff灌注模型低温灌注离体鼠心6h,检验器官保存液Celsior液、HTK液和UW液对心脏保存的效果.方法实验分为3组,每组8只Wistar大白鼠.麻醉并抗凝后,快速取下鼠心并悬挂在Langendorff灌注模型上灌注,测定血流动力学基础值.分别用三种器官保存液灌注离体鼠心,在4℃下低温浸泡保存6h.重新复温、复灌,再次测定血流动力学值和冠状动脉流量,留取标本分别测定心肌水含量、心肌酶漏出量、心肌细胞ATP和CP含量和观察心肌细胞超微结构变化.结果①血流动力学恢复率,Celsior液和HTK液组均优于UW液组.②心肌酶漏出量,Celsior液和HTK液组明显低于UW液组.③ATP和CP含量,Celsior液和HTK液组高于UW液组.④超微结构变化,Celsior液组和HTK液组心肌损害轻,UW液组心肌损害较重.结论Celsior液、HTK液和UW液对心脏保护的效果均较好,均为较合适的心肌保存液.Celsior液和HTK液对心脏保存的效果无显著差异,但均优于UW液.
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自制PV液与大鼠肝脏低温保存:与UW液的对比
背景:目前许多学者对UW液成分进行改进,其目的主要在于进一步探索器官保存的原理,提高保存的技术和延长保存的时限;简化UW液的成分,以进一步满足临床运输、储存和使用的方便;寻找合适的替代品,降低UW液的成本以满足市场需要.目的:观察自制PV液对大鼠肝脏低温保存的效果,并与UW液进行对比.方法:将90只Wistar大鼠按随机数字表法分成3组,即UW液组、PV液组和生理盐水组,制作大鼠肝脏非循环离体灌注模型,分别使用相应灌洗保存液.每组再根据不同的保存时间分为保存0,6,12,18,24 h 5个亚组,每个亚组6只大鼠.测定保存不同时间后肝脏谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶活性变化,以及灌注流出液中氧自由基代谢产物丙二醛浓度与超氧化物歧化酶活性;观察胆汁分泌量及镜下肝脏形态学变化.结果与结论:PV液组与UW液组比较,灌注流出液中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶活性相近,差异无显著性意义(P>0.05).保存6 h后,PV液组肿瘤坏死因子α质量浓度显著高于UW液组(P<0.05):保存12 h后,UW液组丙二醛浓度显著高于PV液组(P<0.05);保存18 h后,PV液组胆汁分泌量低于UW液组(P<0.05);两组光镜、电镜下组织形态改变相似.提示PV液与UW液对Wistar大鼠肝脏功能均具有保护作用,两者短时间保存效果相似,在抗氧化及清除氧自由基方面,PV液略优于UW液.
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自制KYL器官保存液对恒河猴肝脏的保存作用
背景：目前肝脏移植是治疗终末期肝病的佳方法，UW 液是公认的肝脏保存液，但是其价格昂贵，并且细胞外液高K+状态，与人的生理不符，常会导致患者瞬时高钾血症，引起心跳停止，因此研发新的器官保存液已经刻不容缓。目的：观察自制KYL液对恒河猴肝脏缺血再灌注后的保存效果。方法：实验选受体猴和供体猴各8只，每组分别包括KYL液组和UW液组各4例供体肝脏灌注并冷保存4 h，行同种异体原位肝移植。分别于移植后30 min、6 h，记录胆汁分泌量，采血检测谷草转氨酶、谷丙转氨酶、一氧化氮、内皮素1、肿瘤坏死因子α浓度，切取肝组织行光学显微镜检测。结果与结论：两组移植后均有胆汁分泌，随时间延长胆汁分泌量增加(P <0.05)。移植后30 min、6 h，KYL液组血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶浓度均低于UW液组(P<0.05)，两组血清一氧化氮、内皮素1、肿瘤坏死因子α浓度差异无显著性意义(P >0.05)。光学显微镜下肝组织形态学观察显示，UW液组较KYL液组肝细胞水肿明显。结果证实，KYL液在预防缺血再灌注损伤效果与UW液总体相当，部分效果略优于UW液。
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改良UW液延长低温保存皮片活力的研究
目的 探讨表皮生长因子(EGF)联合改良的UW液对低温保存皮片活力的影响,并探索佳皮肤保存液.方法 在4℃条件下,将新鲜小猪中厚皮片分别置于UW液以及UW液与3种浓度的EGF和3种浓度地塞米松(DEX)组合所得保存液中保存,于第7d,10d,14d采用氢化碘硝基四唑蓝(INT)法测定皮片活力,并进行皮片病理学和保存液细菌学检查.结果 UW液中加入0.020μg/ml的 EGF和0.048mg/ml的DEX时,14d后皮片活力可高达70%以上,且皮肤组织结构保存好.此外,各实验组保存液中均未见菌落.结论 4℃储皮条件下,EGF联合改良的UW 液可显著提高皮片活力,有效延长皮片保存时间.
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零下非结冰UW液、Celsior液和HTK液保存C3A细胞的效果比较
目的 比较UW液、Celsior液和HTK液零下非结冰(-0.8℃)保存生物人工肝用C3A细胞的效果.方法 制备好的C3A细胞悬液分以下3组:UW液保存组(UW液组);Celsior液保存组(CS液组);HTK液保存组(HTK液组).各组细胞于-0.8℃低温保存72 h后,分别测定细胞存活率及死亡率(流式细胞术)、LDH释放、尿素合成功能及白蛋白分泌功能.结果 UW液及Celsior液比HTK液显著提高了零下非结冰保存72 h的C3A细胞的存活率[(84.34±4.25)%,(83.53±3.73)% vs (75.65±3.01)%,P<0.001]和细胞内ATP含量[(5.54±1.44)μg/106 个细胞,(5.51±1.31)μg/106个细胞 vs (2.75±1.03)μg/106 个细胞,P<0.001];抑制了LDH释放(P<0.001);更好地维持了细胞尿素合成功能[(0.63±0.10)mmol/L,(0.62±0.06)mmol/L vs (0.39±0.04)mmol/L,P<0.001]和白蛋白分泌功能[(1.99±0.38)g/L,(1.96±0.24)g/L vs (1.50±0.18)g/L,P<0.05].UW液与Celsior液零下非结冰保存C3A细胞的效果无差异.结论 同HTK液相比,使用UW液或者Celsior液零下非结冰(-0.8℃)保存C3A细胞可以明显地提高复温后细胞存活率和细胞内ATP含量,降低低温损伤引起的LDH释放,有效地保护肝细胞尿素合成功能和白蛋白分泌功能.UW液同Celsior液零下非结冰保存C3A细胞的效果无差异,保存时间不宜超过72 h.
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HTK液和UW液心肌保存效果的实验研究
目的：在离体鼠心Langendorff灌注模型上，检验并比较HTK液和UW液在低温(0~4℃)心肌保存中的心肌保护作用。方法：实验分为2组，HTK组和UW组，每组8只wistar大白鼠。快速取下鼠心并悬挂在Langendorff灌注模型上灌注和测定血流动力学基础值。灌注并低温保存离体鼠心4h。4h后重新复温复灌，再次测定血流动力学值，留取标本测定心肌水含量、灌脉流出液心肌酶漏出量、心肌中ATP和CP含量和观察心肌细胞超微结构变化。结果：心肌血流动力学恢复率HTK组优于UW组。心肌水含量两组间差异无显著意义。灌脉流出液心肌酶漏出量HTK组明显低于UW组。心肌中ATP和CP含量HTK组高于UW组。心肌细胞超微结构变化HTK组轻于UW组。结论：HTK液和UW液都是比较合适的心肌保存液，对心肌的保存效果HTK液优于UW液。
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NICORANDIL改善心肌保存液保存效果的实验研究
目的：在离体鼠心Langendorff灌注模型上，检验心肌保存液中加入ATP-K离子通道开放剂Nicorandil对心肌保存液保存效果的影响。方法：实验分为4组，UW液组、HTK液组、UW液组+Nicorandil组和HTK液+Nicorandil组，每组8只Wistar雄性大白鼠。麻醉和抗凝后，快速取下鼠心并悬挂在Laupeudorff灌注模型上灌注，37℃下测定血流动力学基础值。分别用四种保存液灌停离体鼠心并低温(4℃)保存4小时。重新复温复灌，再次测定血流动力学值，留取标本分别测定心肌水含量、心肌酶漏出量、ATP和CP含量和心肌细胞超微结构变化。结果：心肌血流动力学恢复率，HTK液组高于UW液组；UW液+Nicorandil组高于UW液组；HTK液+Nicorandil组高于HTK液组；HTK液+ Nicorandil组高于UW液+Nicorandil组。心肌水含量4组间差异无显著意义。灌脉流出液心肌酶漏出量，HTK液组低于UW液组；HTK液+Nicorandil组低于HTK液组；UW液+Nicorandil略低于UW液组。心肌中ATP和CP含量，HTK组高于UW组；HTK液+Nicorandil组高于UW液+Nicorandil组。心肌细胞超微结构变化，HTK液+Nicorandil组心肌损害轻，HTK组轻于UW液+Nicorandil组，UW液组心肌损害严重。结论：HTK液和UW液都是比较合适的心肌保存液，Nicorandil能够善心肌保存液的保存效果。
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13例原位心脏移植术中长时间心肌缺血的心肌保护和术后近期效果
目的:总结分析13例原位心脏移植手术中心肌缺血时间大于240min的心肌保护技术和术后近期疗效.方法2000年5月～2004年9月连续为79例患者进行原位心脏移植术,其中13例心肌缺血时间大于240min.本组术前心功能均为Ⅳ级.手术按标准法行原位心脏移植手术2例,行双腔静脉吻合法移植手术¨例.心肌缺血时间在240～383min,平均(31 2±42)min.供心的保护方法包括在主动脉阻断时经主动脉根部灌注晶体停搏液,在取下心脏后,再次灌注UW液,并置于UW液中保存.结果:本组无手术死亡.术后均获完整随访,随访时间1个月～3年,平均8.2个月,术后无死亡,所有病人心功能均恢复至Ⅰ～Ⅱ级.结论:我们所采取的心脏获取和心肌保护方法,加之合适的供体、受体选择,双腔静脉吻合技术,以及加强术中、术后监测和处理,长时间心肌缺血的病人可获得满意的早期疗效.
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原代乳猪肝细胞低温保存的初步探索
目的探索4℃低温保存肝细胞的方法.方法两步法分离新生乳猪肝细胞,将肝细胞分别以3种不同低温保存液(RPMl-1640培养液;加有聚乙二醇(PEG)的RPMl-1640培养液;UW液)4℃保存24h、48h及72h.复苏后接种培养,作存活率、贴壁率及细胞活性等检测,并观察其形态结构变化.结果不同低温保存液保存不同时间的猪肝细胞的活力、生物学功能及形态学表现均有所不同,其中单用RPM1-1640培养液组效果差,PEG组和UW组结果相似,均保持70%以上存活率达48h,活力与药物代谢功能无明显差别,镜下见复苏肝细胞浆内含丰富颗粒,可见较多双核细胞,线粒体无减少,粗面内质网数下降,滑面内质网增多.结论猪肝细胞在4℃可保存48h,加入PEG的RPM1-1640培养液可更好地保持肝细胞活性.
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器官保存的研究进展
器官保存伴随损伤有缺血和低温导致的损伤,以及再灌注时产生的再灌注损伤.该作者对器官保存的基本 方法、发展史、现状及器官保存研究中存在的问题进行综述.
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心脏移植供心的心肌保护研究
目的总结4例心脏移植的供心保护经验.方法缩短热缺血时间,切除供心时先以冷晶停跳液500ml灌注,使供心迅速停搏,心包内放入冰屑使供心降温,切除供心后,再灌注0～4℃UW保存液1 000 ml(6～8分钟灌注完),用浸泡法低温保存供心,4例供心热缺血时间分别为3、4、6、6分钟,冷缺血时间分别为220、415、215、226分钟.结果升主动脉开放后,3例自动复跳,1例电击除颤后复跳,围手术期供心功能良好,术后患者康复顺利,现心功能均为Ⅰ级.结论用此方法可使供心得到良好的心肌保护.
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左旋泊尼汀对离体大鼠心脏保存效果的影响
将25只成年雄性Wistar大鼠(体重350～400g)随机分为A组(对照组)及B、C、D、E组,每组5只,经麻醉和抗凝后,快速取下心脏.A组心脏悬挂在Langendorff灌注模型上K-H液恒压灌注,37℃下测定血流动力学指标;B、C、D、E组分别经主动脉灌注4℃HTK液、UW液、HTK液+左旋泊尼汀、UW液+左旋泊尼汀心肌保存液,置于4℃相应的心肌保存液中保存6h;重新复温复灌,再次测定血流动力学指标,留取标本分别测定心肌含水量、心肌酶漏出量、ATP含量变化.结果D组及E组平均左室发展压(LVDP)与B、C组比较显著升高,磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)漏出量明显减少,心肌ATP含量明显增多.认为HTK液和UW液中加入左旋泊尼汀能改善离体鼠心脏的低温保存效果.
