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癌相关成纤维细胞通过TGF-βRⅡ/smad7调控前列腺癌细胞株PC-3增殖
目的 研究癌相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs )通过TGF-β/Smads 信号通路对前列腺癌细胞株PC3、LNCaP增殖能力的影响及通路关键蛋白TGF-βRⅡ、Smad2、Smad7在其中的作用.方法 原代培养源于人前列腺癌基质的CAFs.Western blot检测CAFs、PC3和LNCaP 细胞TGF-β受体II型(TGF-βRⅡ)表达.用CAFs原代培养液制备条件培养液 CAFs-CM,用TGF-βRⅡ抑制剂(LY2109761)处理CAFs后制备出另一条件培养液CAFs-LY-CM,分别观察PC3和LNCaP在常规培养基、CAFs-CM、CAFs-LY-CM条件培养液中的增殖能力及差异性,以及活性形式磷酸化的Smad2(P-Smad2)、Smad7表达水平的变化.结果 CAFs、PC3细胞阳性表达TGF-βRⅡ,LNCaP 细胞呈弱阳性表达.和常规培养基相比,浓度为0.75g/L CAFs-CM的条件培养基可显著提升PC3[分别为(6.36±0.65)和(2.94±0.19),P<0.05]和LNCaP细胞[分别为(5.06±0.38)和(2.86±0.39),P<0.05]的增殖能力.CAFs-CM上调PC3细胞Smad7蛋白表达水平,对LNCaP细胞P-Smad2蛋白表达几无影响.采用10-6mol/L LY2109761处理CAFs后,CAFs-LY-CM可显著抑制PC3细胞增殖[分别为(4.09±0.36)和(6.36±0.65),P<0.05],并呈剂量依赖性,但对LNCaP细胞增殖无显著抑制作用.结论 CAFs通过TGF-βRⅡ/Smad7关键蛋白调控PC3增殖,是PCa潜在的治疗新靶点.CAFs通过TGF-β信号通路调控LNCaP细胞增殖的作用不显著,存在其他的分子机制.
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肠癌患者组织中MIC-1及TGF-βRⅡ的表达及其与食欲减退的相关性研究
目的 探讨肠癌患者组织中MIC-1、TGF-βRⅡ的表达及其与患者食欲减退的相关性.方法 采用免疫组化法测定3个月前后34例晚期肠癌患者组织中MIC-1、TGF-βRⅡ的表达,并进行食欲评分、体重指数计算以及相关性分析.结果 研究前34例患者MIC-1及TGF-βRⅡ的表达分别为6.00±1.09和7.44±0.95,3个月后有6例患者死亡,MIC-1表达升高为8.66±1.25,而TGF-βRⅡ表达下降至5.04±0.78,前后比较差异均有显著意义(P<0.01).MIC-1与食欲评分及体重指数呈负相关;TGF-βRⅡ与食欲评分及体重指数呈正相关(P<0.01).结论 随着肠癌病情的进展,组织内MIC-1表达升高,而TGF-βRⅡ表达下降,两者与食欲减退和体重下降密切相关,是导致晚期肠癌患者食欲减退和体重下降的原因之一.
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补肾活血方对卵巢早衰小鼠颗粒细胞TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3表达的影响
目的 探索补肾活血方(紫石英、补骨脂、菟丝子等)对免疫性卵巢早衰(POF)小鼠卵泡壁颗粒细胞转化生长因子(TGF)-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3蛋白表达的影响.方法 Balb/c雌性小鼠皮下多点注射小鼠透明带3建立免疫性POF模型,POF小鼠分成模型组,阳性组(戊酸雌二醇)和补肾活血方低、中、高剂量组.干预30 d后,卵巢组织作苏木精-伊红(HE)染色,免疫组化法与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测卵泡壁颗粒细胞和卵巢组织TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3的蛋白表达.结果 与模型组相比,补肾活血方各剂量组、阳性组卵巢成熟卵泡数目明显增多,闭锁卵泡数目减少.卵泡壁颗粒细胞和卵巢组织TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3蛋白表达在补肾活血方各剂量组、阳性组中明显高于在模型组中(P＜0.05).结论 补肾活血方能通过上调颗粒细胞TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3的蛋白表达改善卵巢功能.
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巢式实时荧光定量PCR检测RA患者外周血单个核细胞TGF-βR Ⅱ mRNA
目的 建立检测人外周血单个核细胞(PBMc)中转化生长因子βⅡ型受体(TCF-β RⅡ)mRNA实时荧光定量PCR方法,并探讨其在RA中的临床意义.方法 跨内含子设计外引物,并根据扩增片段,设计一对内引物,采用巢式实时荧光定量PCR(nestecl-reall-time-PcR)方法.首次扩增采用减少引物、酶浓度、及循环次数的方法保持扩增片段的高度特异性,再进行第二次PCR扩增作实时荧光定量检测,同时以β-actin作内参,二者比值作为TGF-βRⅡ表达水平指标.结果 Ct值和模板起始浓度对数值之间具有良好的线性关系(r2=0.999);检测低浓度可达101拷贝.RA患者组和健康对照组的TGF-βRⅡ与β-actin的比值分别为0.45±0.11和0.37±0.10,两者有显著差异(P<0.01);RA治疗前、后两者比值分别为0.46±0.11和0.40±0.11,治疗后下降13.0%.结论 巢式实时灾光定量PCR检测PBMC中TCF-βRⅡmRNA的方法简便,特异,重复性好,可信度高,其表达水平对RA具有一定的诊断价值,并可作为评价该病治疗效果的一种方法.
关键词： TGF-βRⅡ 类风湿关节炎 巢式实时荧光定量PCR 基因表达 -
TGF-βRⅡ基因在乳腺癌中的表达及临床意义
目的 检测TGF-β R Ⅱ基因在乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中的表达水平,并探讨其在乳腺癌中的临床意义.方法 选取初治乳腺癌患者病理标本65例,分别运用RT-PCR和Western blot检测TGF-β RⅡ的mRNA及蛋白在乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中的表达,统计分析乳腺癌组织中TGF-p RⅡ的表达与患者临床病理特征的关系.结果 乳腺癌组织中TGF-β RⅡ的mRNA表达水平低于癌旁正常乳腺组织(0.4352±0.1623 vs 0.5218±0.1236,P＜0.05),同时其编码的TGF-βRⅡ蛋白表达水平也低于癌旁正常乳腺组织(0.2165 vs 0.3725,P＜0.05).TGF-p R Ⅱ蛋白表达情况与原发肿瘤大小、临床分期有关,肿瘤越小、临床分期越早的患者中TGF-βR Ⅱ蛋白高表达的比例越高(均P＜0.05),而与患者年龄、淋巴结转移、组织学类型及分级等无关(均P＞0.05).结论 TGF-β R Ⅱ基因在乳腺癌组织中呈低表达,且与肿瘤大小、临床分期有关,检测TGF-β RⅡ的表达对评估乳腺癌生物学行为及预后具有较重要的临床意义.
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胃癌组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25蛋白的表达及其临床意义
目的 检测TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3及CDC25蛋白在胃癌组织中的表达并探讨它们在胃癌组织中的发生、发展的意义.方法 利用免疫组织化学SP法检测110例胃癌、21例高级别上皮内瘤变、17例低级别上皮内瘤变、54例肠上皮化生、28例慢性萎缩性胃炎和57例正常胃黏膜组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25蛋白的表达.结果 TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25在胃癌组织中的表达均高于正常胃黏膜组织.TGF-β1在胃癌组织中的表达高于上皮内瘤变、肠上皮化生和慢性萎缩性胃炎组织;Smad2/3在胃癌组织中的表达高于慢性萎缩性胃炎组织;CDC25在胃癌组织中的表达高于低级别上皮内瘤变组织,且在胃癌淋巴结转移组中的表达高于未转移组.TGF-β1与TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25呈正相关,Smad2/3与CDC25也呈正相关.结论 TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25的表达是引起胃癌发生、发展的重要因素,可作为胃癌早期诊断的辅助指标.
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大肠癌组织中转化生长因子βⅡ型受体基因突变 RNA和蛋白表达的研究
目的 研究散发性大肠癌中TGF-βRⅡ在基因、RNA转录和蛋白表达水平上的改变 ，以及与临 床病理参数之间的关系，探讨TGF-βRⅡ基因突变在大肠癌发生、发展中的作用。方法 冷 冻切片，应用免疫组织化学方法检测40例正常粘膜、癌组织和10例癌旁组织TGF-βRⅡ蛋白 的表达。应用微解剖技术，分离提取30例正常和癌组织基因组DNA、PCR扩增，DNA测序，检 测TGF-βRⅡ基因第1～7外显子的突变。应用微解剖技术，分离提取5例有TGF-βRⅡ基因 突变的癌组织RNA，RT-PCR扩增，2%琼脂糖凝胶电泳观察TGF-βRⅡ基因RNA的表达情况。结果 TGF-βRⅡ蛋白在正常粘膜、癌组织和癌旁组织中的表达率为85.0% 、10.0%、100%。癌组 织中TGF-βRⅡ蛋白表达水平与Dukes分期、淋巴结转移呈负相关。30例癌组织中共检出10 例 （33.3%）12处TGF-βRⅡ基因突变，其中9例TGF-βRⅡ蛋白失表达。随机抽取的5例有TGF - βRⅡ基因突变的病例中均未观察到RNA的表达。在正常和癌组织中，均见有第5外显子539密 码子处的变化（GCT→GTT）。结论 散发性大肠癌组织中存在着较高频率 的TGF-βRⅡ基因 突变，以第6和第7外显子的点突变为主，但在第3外显子的突变则以缺失为主。大肠癌组织 中TGF-βRⅡ基因突变，可能引起RNA失转录，进而导致TGF-βRⅡ蛋白失表达。大肠癌组 织 中有较高的TGF-βRⅡ蛋白失表达率，TGF-βRⅡ蛋白表达水平与Dukes分期、淋巴结转移 呈 负相关。在一定程度上TGF-βRⅡ蛋白可以作为一个潜在的大肠癌临床诊断和预后的分子指 标。TGF-βRⅡ基因第5外显子539密码子处出现GCT→GTT的改变，提示可能是中国人的单核 苷酸多态性。
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胃癌组织TGF-βRⅡ、Smad4、Smad7的表达及其与临床病理特征和生存的关系
背景与目的:目前研究认为,TGF-β/Smads信号通路在恶性肿瘤的发生发展过程中起到重要的作用,并可能与胃癌等恶性肿瘤的生物学行为密切相关.本研究通过探讨TGF-βR Ⅱ、Smad4和Smad7在胃癌组织的表达及其意义,分析它们与临床病理特征及患者生存之间的关系.方法:应用组织芯片技术和免疫组化SABC法检测200例胃癌组织及56例癌旁组织TGF-βBR Ⅱ、Smad4和Smad7蛋白的表达.结果:胃癌组织中TGF-βR Ⅱ、Smad4和Smad7的阳性率分别为25.5%、67.0%和47.0%.TGF-βRⅡ表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移、分化程度和Lauren分型密切相关(分别X2=6.214,X2=11.308,X2=14.633和X2=8.216,均P<0.05);Smad4表达与胃癌分化程度及Lauren分型密切相关(分别X2=16.162和X2=13.100.均P<0.05);Smad7表达与胃癌分化程度及Lauren分型密切相关(分别X2=4.710和X2=5.297,均P<0.05);Smad4与TGF-βRⅡ表达呈正相关(r=0.191,P=0.007);Smad4表达与患者生存密切相关(X2=4.090,P=0.043).结论:胃癌组织中广泛存在TGFβ-Smad信号通路相关分子TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7表达异常.胃癌中Smad4蛋白阳性患者其预后优于阴性者.
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TGF-βRⅡsiRNA对AngⅡ诱导GMC增殖的影响
目的 通过干扰TGF-βRⅡ的表达,探讨TGF-βRⅡ对AngⅡ诱导GMC增殖的作用及对TGF-β1与psmad3表达的影响.方法 GMC转入荧光对照siRNA,6 h于荧光显微镜观察沉默效率.分别转入阴性对照siRNA与TGF-βRⅡsiRNA,24 h Western blot检测TGF-βRⅡ的表达.实验分为:空白对照组(Con组),AngⅡ组、siRNA阴性对照组(NC组)、TGF-βRⅡsiRNA干扰组(沉默组).除Con组外,AngⅡ刺激各组24 h,Western blot检验TGF-β1与psmad3的蛋白水平.CCK8试剂盒检测GMC增殖变化.结果 (1)转染TGF-βRⅡsiRNA后检测TGF-βRⅡ的蛋白水平表达明显降低,与对照组相比表达差异有统计学意义(P<0.05);(2)AngⅡ能刺激TGF-β1的表达,转染TGF-βRⅡsiRNA后,TGF-β1蛋白表达下降(P<0.05);(3)AngⅡ能促进smad3的磷酸化,转染TGF-βRⅡsiRNA后psmad3蛋白表达下降(P<0.05);(4)AngⅡ促进GMC增殖,转染TGF-βRⅡsiRNA后减轻AngⅡ的增殖作用(P<0.05).结论 AngⅡ刺激细胞增殖与TGF-β1表达及smad3的磷酸化有关,且依赖TGF-βRⅡ的表达.
