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胰升血糖素样肽-1对肝切除后肝细胞胞浆游离钙的影响
近来的研究发现,胰升血糖素样肽-1(glucagon like peptide-1,GLP-1)在胰腺外组织中具有拟胰岛素作用[1],而并不引起细胞内cAMP增加,因此,GLP-1可能是通过与腺苷酸环化酶活化无关的特异性受体结合发挥其作用.钙离子是细胞内重要的第二信使,对维持细胞的各种代谢过程极为重要.但GLP-1是否像胰岛素一样诱导肝细胞钙离子内流[2],目前还不清楚,故本实验对此进行了初步探讨.
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运动性肥大心肌活细胞胞浆游离Ca2+动态变化的激光共聚焦研究以及局部IGF-Ⅰ和AngⅡ的变化
目的:研究运动与心脏重塑过程中心肌胞浆游离Ca2+([Ca2+]c)动态变化的生物学机制.方法:采用激光扫描共聚焦显微技术(LSCM)对STDIn Ca2+荧光试剂负载的运动肥大心肌活细胞[Ca2+]c动态变化进行研究,采用放射免疫测定运动小鼠心肌局部IGF-Ⅰ和AngⅡ含量.结果:运动肥大心肌[Ca2+]c变化表现为基值稳态和峰值显著升高,达峰时间延长(P＜0.001).心肌局部IGF-Ⅰ和AngⅡ显著升高(P＜0.001).结论:运动性心肌肥大与[Ca2+]c变化、机械信号、IGF-Ⅰ和AngⅡ关系密切,机械信号、IGF-Ⅰ和AngⅡ可能是引起[Ca2+]c显著升高,增强心肌收缩能力的胞外刺激因素.
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丹参酮ⅡA对鼠肝星状细胞活化Ca2+效应的抑制作用
目的 研究丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA)药物血清是否具有抑制肝星状细胞(HSCs)胞浆游离钙([Ca2+]i)增高的作用.方法 健康SD大鼠32只,按随机数字表随机分为4组:肝纤维化模型丹参酮ⅡA组(8只) 给予用精制橄榄油配制的 40%CCl4 溶液,9 周后腹腔注射丹参酮ⅡA(15 mg/kg)15 d;肝纤维化模型对照组(8只)给予用精制橄榄油配制的40%CCl4 溶液,9周后灌服生理盐水15 d;正常大鼠丹参酮ⅡA组(8只)仅给予等量精制橄榄油9周,然后腹腔注射丹参酮ⅡA(15 mg/kg)15 d;正常对照组(8只)仅给予等量精制橄榄油,9周后灌服生理盐水15 d.结束后,经下腔静脉取血并分离血清.采用盲法,用上述 10%血清培养 HSCs24 h并负载好 Fluo23PAM后使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测 HSCs[Ca2+]i.结果 ①经正常大鼠丹参酮ⅡA组及肝纤维化模型丹参酮ⅡA组的血清预处理的 HSCs,其[Ca2+]i荧光强度相对值均明显低于肝纤维化模型对照组(P<0.05);且二者与正常对照组相比也均差异有统计学意义(P<0.05).②经正常大鼠丹参酮ⅡA组及肝纤维化模型丹参酮ⅡA组血清预处理 HSCs后加入 AngⅡ,HSCs[Ca2+]i荧光强度变化百分数显著低于肝纤维化模型对照组(P<0.01).结论 丹参酮ⅡA能抑制肝星状细胞活化[Ca2+]i的升高,可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一.
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肝纤维化患者“益肝康”药物血清对HSCs胞浆游离钙的影响
目的 探讨经用慢性乙型肝炎患者制备的“益肝康”药物血清对血管紧张素Ⅱ介导的HSCs胞浆游离钙变化的影响.方法 采用体外HSCs株培养技术.患者血清分为A组:服用“益肝康”前；B组:服用“益肝康”后.药物血清的制备:15例观察对象服药前采静脉血5ml,然后给予“益肝康”150 ml,2次/d,疗程7d时作为观察终点.服用“益肝康”前后,均于晨起外周静脉取血.采用盲法,用上述10％药物血清培养HSCs24 h,再将经药物血清预处理的HSCs及对照组细胞负载Fluo-3/AM后使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测Ca2+i.结果 经“益肝康”药物血清预处理HSCs后均可明显减低细胞Ca2+i,荧光强度相对值与经服药前患者血清预处理HSCs组结果相比,Ca2+i下降达52.37％,两者相比有显著性差异（P＜0.01）.给予Ang-Ⅱ(1.1×10-7mol/L)刺激HSCs,经“益肝康”药物血清预处理的HSCs,细胞Ca2+i荧光强度变化百分数明显减低,同经服药前患者血清预处理HSCs组结果相比,下降达90.50％,两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 来自慢性乙型肝炎患者的”益肝康“药物血清具有抑制HSCs胞浆内游离钙水平升高的作用.
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水蛭对Ang-Ⅱ刺激鼠肝星状细胞活化Ca2+效应的抑制作用
目的研究水蛭药物血清是否具有抑制肝星状细胞(HSCs)胞浆游离钙([Ca2+]i)增高的作用.方法将32只健康SD大鼠按随机数字表随机分为4组:肝纤维化模型水蛭组(8只):皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCl4溶液9周,然后灌服水蛭6 d;肝纤维化模型对照组(8只):皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCl4溶液9周,然后灌服0.9%氯化钠溶液6 d ;正常大鼠水蛭组(8只):仅皮下注射等量的精制橄榄油9周,然后灌服水蛭6 d ;正常对照组(8只):仅皮下注射等量的精制橄榄油9周,然后灌服0.9%氯化钠溶液6 d.结束后,经下腔静脉取血并分离血清.采用盲法用上述10%血清培养HSCs 24 h并负载好Fluo-3/AM后使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测HSCs[Ca2+]i.结果 (1)经正常大鼠水蛭组及肝纤维化模型水蛭组大鼠血清预处理的HSCs,其[Ca2+]i荧光强度相对值均明显低于肝纤维化模型对照组(P＜0.05);且两者与正常对照组间差别也均有显著性意义(P＜0.05).(2)经正常大鼠水蛭组及肝纤维化模型水蛭组大鼠血清预处理HSCs后加入Ang-Ⅱ(1.1×10-7mol/L),HSCs [Ca2+]i 荧光强度变化百分数显著低于肝纤维化模型对照组(P＜0.01).结论水蛭能抑制肝星状细胞活化[Ca2+]i的升高,此可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一.
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益肝康药物血清对大鼠肝星状细胞胞浆游离钙效应的抑制作用
目的研究益肝康药物血清是否具有抑制肝星状细胞(HSCs)胞浆游离钙([Ca2+]i)增高的作用.方法将32只健康雄性SD大鼠按随机数字表分为4组:肝纤维化模型益肝康组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCL4溶液9周,然后灌服益肝康6 d;肝纤维化模型对照组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCL4溶液9周,然后灌服0.9%氯化钠溶液6 d ;正常大鼠益肝康组(8只)皮下注射等量精制橄榄油9周,然后灌服益肝康6 d ;正常对照组(8只)皮下注射等量精制橄榄油9周,然后灌服0.9%氯化钠溶液6 d.结束后经下腔静脉取血并分离血清.用盲法,采用上述10%血清培养HSCs 24 h并负载好Fluo-3/AM后,使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测HSCs [Ca2+]i.结果 (1)经正常大鼠益肝康组及肝纤维化模型益肝康组大鼠血清预处理的HSCs,其[Ca2+]i荧光强度相对值均明显低于肝纤维化模型对照组(P＜0.05);且两者与正常对照组间差别均有显著性意义(P＜0.05).结论益肝康能抑制肝星状细胞[Ca2+]i的升高,这可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一.
关键词： 肝纤维化 肝星状细胞 益肝康 激光扫描共聚焦显微镜 胞浆游离钙 -
佝偻病患儿中性粒细胞胞浆游离钙水平变化对白细胞功能影响的探讨
本文检测了佝偻病患儿的中性粒细胞(PMN)吞噬率、杀菌率及其胞浆游离钙水平,旨在探讨白细胞功能低下是否与元素钙有关,现将结果报道如下.
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亚低温对大鼠缺血再灌注海马区线粒体钙及胞浆游离钙的影响
目的 探讨亚低温对脑缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用机制,为临床脑缺血患者亚低温治疗提供理论依据.方法 采用改良线栓法建立局灶性大鼠大脑中动脉I/R模型,将健康Wistar大鼠随机分为假手术组、常温(36.0℃～37.0℃)缺血组、亚低温(32.0℃～33.0℃)缺血组,其中后两组又根据观察时间点不同分为缺血2 h再灌注2、4、6 h三个亚组,观察各时间点大鼠缺血侧脑海马区线粒体钙含量([MCa])及胞浆游离钙含量([Ca2+]i)的变化.结果 与假手术组比较,常温缺血组和亚低温缺血组各观察时间点缺血侧脑海马区[MCa]显著降低,而[Ca2+]i明显增高(P＜0.05);与常温组比较,亚低温缺血组大鼠缺血侧海马区[MCa]显著增高,[Ca2+]i明显降低(P＜0.05).结论 亚低温能有效抑制I/R损伤后海马区神经元细胞的钙超载,恢复线粒体能量代谢,从而稳定线粒体贮钙功能.
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硫酸舒喘灵在先兆早产和晚期流产中的应用
早产或晚期流产是妇产科常见病,在先兆期间的治疗主要是选择直接抑制子宫收缩或防止细胞浆游离钙增加的药物,拟β-肾上腺素受体兴奋剂-硫酸舒喘灵即有此种作用.1991～1998年本院用硫酸舒喘灵治疗先兆早产或晚期流产108例,取得了较好的效果,现报道如下.
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东莨菪碱对缺血性脑损伤的实验研究
为了探讨东莨菪碱在脑缺血和再灌流损伤中的保护作用,应用沙鼠建立脑缺血模型.缺血前15分钟腹腔注射药物,分别阻断双侧颈总动脉.于阻断颈动脉50分钟、再灌流10分钟、再灌流60分钟及120分钟,检测神经细胞胞浆游离钙的变化以及应用东莨菪碱后的影响.结果表明:(1)胞浆游离钙在脑缺血50分钟后大幅度升高,再灌流时再度升高,然后缓慢下降.(2)东莨菪碱可减缓胞浆游离钙升高,提示对脑缺血和再灌流损伤有治疗意义.
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阿魏酸对视网膜神经细胞内游离钙浓度变化的影响
目的研究阿魏酸(FA)对视网膜神经细胞内游离钙([Ca2+]i)水平变化的影响.方法以胚胎7个月人视网膜,新生小牛视网膜和生后4个月小鼠视网膜为研究对象,检测FA作用后[Ca2+]i水平变化.结果500μg/mL FA作用下,胚胎人组[Ca2+]i荧光强度(基值为57.08±3.97)在10 s内降至38.41±4.92,维持在38.41±4.92～43.45±3.29;新生小牛组[Ca2+]i(基值为69.48±3.87)在20 s内降至52.86±3.69,维持在49.75±3.82～54.39±4.04;成年小鼠组[Ca2+]i(基值为71.54±3.73)在20 s内降至54.91±3.57,维持在53.81±3.49～58.14±3.49,且发现胚胎人组[Ca2+]i基值和受光照射后变化明显异于新生期小牛组和成年小鼠组.结论FA能有效降低视网膜神经细胞内游离钙水平,对于促进增殖和保护细胞具有重要作用.
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应用Frua-2测定人腹腔巨噬细胞胞浆游离钙浓度
为了解子宫内膜异位症患者腹腔巨噬细胞活性变化,建立了应用Frua-2测定人腹腔巨噬细胞胞浆游离钙浓度([Ca2+]i)的方法.结果显示,正常盆腔患者腹腔巨噬细胞[Ca2+]i为(100.32±5.69) nmol/L,而子宫内膜异位症患者腹腔巨噬细胞较正常盆腔者显著升高.表明子宫内膜异位症患者腹腔巨噬细胞活性增强与其[Ca2+]i增高有关.
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胰升血糖素样肽-1对肝切除后肝细胞胞浆游离钙影响的实验研究
目的 探讨胰升血糖素样肽-1(GLP-1)对肝切除后肝细胞胞浆游离钙的影响.方法 将大鼠随机分2组,A组不切肝,B组切肝65 %.于术后第1,3,5天收集血标本5mL测定血糖、GLP-1、胰岛素(In)和胰升血糖素(G1).同时用酶法分离制备肝细胞悬液.以Fura-2/AM荧光指示剂,用荧光分光光度仪检测肝切除后肝细胞的荧光强度及GLP-1对荧光强度的影响.结果 B组肝切除术后血糖明显增高(P<0.05),血浆GLP-1也明显高于A组(P<0.001),尤以术后第1天更显著; In则明显下降(P<0.001),而G1手术后升高,但差异无显著性(P>0.05),术后In/GL值明显下降(P<0.05).所测正常肝细胞[Ca2+]I为(707.46±122.59) nmol/L,肝切除术后第1,3,5天肝细胞[Ca2+]I较正常肝细胞略降低(P>0.05);加入GLP-1后肝细胞[Ca2+]I略有升高(P>0.05).结论 大鼠肝切除术后存在明显胰岛素抵抗,主要系因胰岛素水平明显下降,致In/G1值也明显降低的结果;GLP-1的拟胰岛素作用并非通过增加肝细胞[Ca2+]in而实现的.
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尼氟灭酸对糖尿病人血小板胞浆游离钙及聚集功能的影响
[目的]探讨糖尿病人血小板胞浆游离钙([Ca2+]i)、血小板聚集率变化及氯通道阻断剂尼氟灭酸对其的影响.[方法]用Fura-2荧光测钙技术检测血小板[Ca2+]i,血小板聚集仪检测血小板聚集率,观察氯通道阻断剂尼氟灭酸、钙通道阻断剂硝苯地平及两者联合对糖尿病人的血小板[Ca2+]i、血小板聚集率的作用.[结果]①糖尿病人血小板聚集率为(74.9±13.7)%,高于正常人(P＜0.05);糖尿病人的静息血小板[Ca2+]i值、钙释放、钙内流分别为(124.5±38.1)nmol/L、(497.1±95.1)nmol/L、(354.3±75.0)nmol/L,均高于正常人(P均＜0.05);②尼氟灭酸及硝苯地平抑制血小板钙内流呈浓度依赖性,半数抑制浓度(IC50)的尼氟灭酸(50 μmol/L)对糖尿病人血小板钙内流的抑制率为(54.7±14.5)%,对血小板聚集率的抑制率为(32.3±21.4)%;IC50的硝苯地平(7.5 μmol/L)对糖尿病人血小板钙内流的抑制率为(17.9±11.9)%,对血小板聚集率的抑制率为(32.3±20.4)%;③尼氟灭酸联合硝苯地平对糖尿病人血小板钙有抑制作用,联合作用时尼氟灭酸对钙内流抑制率为(51.9±12.8)%;硝苯地平对钙内流抑制率为(12.4±8.5)%(P均＜0.05),两者间不存在交互效应.[结论]糖尿病人血小板聚集率、静息血小板[Ca2+]i及钙运动均高于正常人,血小板呈高反应状态.尼氟灭酸可抑制糖尿病人血小板聚集和钙内流,可能与血小板膜存在对尼氟灭酸敏感的氯通道有关.尼氟灭酸与硝苯地平联合对糖尿病患者的血小板钙运动无协同及遏制作用.
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丹参对AngⅡ刺激鼠HSCs活化Ca2+效应抑制作用的随机对照试验
目的研究丹参药物血清是否具有抑制肝星状细胞(HSCs)胞浆游离钙([Ca2+]i)增高的作用.方法健康SD大鼠32只,按随机数字表随机分为4组:肝纤维化模型丹参组(8只)给予用精制橄榄油配制的40%CCl4溶液9周后灌服丹参6 d;肝纤维化模型对照组(8只)给予用精制橄榄油配制的40%CCl4溶液9周后灌服生理盐水6 d;正常大鼠丹参组(8只)仅给予等量精制橄榄油9周,然后灌服丹参6 d;正常对照组(8只)仅给予等量精制橄榄油9周后灌服生理盐水6 d.结束后,经下腔静脉取血并分离血清.采用盲法,用上述10%血清培养HSCs24 h并负载好Fluo-3/AM后使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测HSCs[Ca2+]i.结果①经正常大鼠丹参组及肝纤维化模型丹参组的血清预处理的HSCs,其[Ca2+]i荧光强度相对值均明显低于肝纤维化模型对照组(P＜0.05);且二者与正常对照组相比也均有显著性差异(P＜0.05).②经正常大鼠丹参组及肝纤维化模型丹参组血清预处理HSCs后加入AngⅡ(1.1×10-7mol/L),HSCs[Ca2+]i荧光强度变化百分数显著低于肝纤维化模型对照组(P＜0.01).结论丹参能抑制肝星状细胞活化[Ca2+]i的升高,可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一.
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应用Fura-2/AM荧光双波长法研究抑肽酶对血小板活化的保护作用
目的探讨抑肽酶对血小板活化的保护机制.方法用钙荧光指示剂Fura-2/AM负载人洗涤血小板,用荧光双波长分光光度计比值法测定静息血小板胞浆游离钙浓度([Ca2+]i)及凝血酶、抑肽酶对[Ca2+]i的影响.结果在生理胞外Ca2+浓度时,正常人血小板[Ca2+]i静息水平为(151.840±28.719)nmol/L,凝血酶可引起血小板[Ca2+]i的明显增加(P＜0.01),抑肽酶呈剂量依赖性地抑制由凝血酶引起的[Ca2+]i的增加(P＜0.01).结论抑肽酶的保护血小板机制与其抑制血小板内[Ca2+]i动员等信息传递过程有关.
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心肌细胞核钙信号的研究
采用激光扫描共聚焦显微镜、荧光分光光度计和荧光显微镜,观察培养的大鼠心肌细胞和离体细胞核的Ca2+信号变化.结果:培养的心肌细胞内Ca2+荧光分布不均匀,即核的荧光强度显著高于胞浆;β-受体激动剂异丙肾上腺素(10-6mol/L)使核钙浓度[(Ca2+)n]增加程度显著大于胞浆钙浓度[(Ca2+)c],β-受体阻滞剂心得安(10-3mol/L)浓度显著降低细胞核/胞浆游离钙梯度;P物质(10-6mol/L)作用下,[(Ca2+)n]增加2.17倍,而[(Ca2+)c]仅增加91.45%(P<0.05),[(Ca2+)n]/[(Ca2+)c]大幅度上升.心肌细胞经钙泵抑制剂thapsigargin和EGTA刺激后,可见核膜腔存在钙库.正常心肌细胞存在小幅度的钙震荡,分别加入去甲肾上腺素(10-5mol/L)、AngⅡ(10-6mol/L)和ATP(3×10-3mol/L),均使心肌细胞胞浆Ca2+和核Ca2+震荡幅度明显升高(P<0.01),NO-供体硝普钠(10-5mol/L)和KCI(20mmol/L)使钙的周期性震荡消失.IP3和Ryanodine分别使核Ca2+短暂升高1.68倍和1.93倍(P<0.001),而Thapsigargin预处理心肌细胞核,均能显著的阻断IP3和Ryanodine的致核Ca2+升高作用(P<0.05),荧光染色观察可见IP3受体染色主要位于核内膜,而钙泵和ryanodine受体染色主要位于核外膜.结论:心肌细胞核是细胞内的钙库之一,心肌细胞核也存在Ca2+震荡,并受多种因素影响.心肌细胞核膜上存在Ca2+-ATPase、RyR和IP3受体等核Ca2+摄取和释放系统.核Ca2+释放的前提条件是首先存在核Ca2+摄取.
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丹参对肝星状细胞胞浆游离钙的影响
目的研究丹参药物血清对肝星状细胞(HSCs)胞浆游离钙([Ca2+]i)的影响.方法制备肝纤维化模型鼠.造模毕,药物组以每天20 ml/kg剂量分2次灌服丹参,对照组灌以等量生理盐水.连续给药6 d后经下腔静脉取血并分离血清.采用盲法,用上述10%药物血清培养HSCs 24 h,再将经药物血清预处理的细胞及对照组细胞负载Fluo-3/AM后使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测[Ca2+]i.结果①正常丹参药物血清及肝纤维化药物血清预处理后均可明显减低活化的HSCs的[Ca2+]i,其荧光强度相对值与病理模型对照组的差异有统计学意义(P＜0.05);且两者与正常对照组的差异也有统计学意义(P＜0.05).②正常丹参药物血清预处理后加入血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ),[Ca2+]i荧光强度变化百分数显著低于病理模型对照组(P＜0.05);肝纤维化药物血清组荧光强度变化百分数也显著低于病理模型对照组(P＜0.05).结论丹参能抑制肝星状细胞[Ca2+]i的升高,可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一.
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法舒地尔对肝星状细胞黏附、迁移及胞浆游离钙的影响及机制研究
目的 观察法舒地尔(fasudil)通过Rho/Rho激酶(ROCK)信号转导通路对肝星状细胞(HSC)黏附、迁移以及胞浆游离钙([Ca2+]i)的影响.方法 将培养的HSC分为5组:对照组;fasudil 12.5 μmol/L组;fasudil 25 μmol/L组;fasudil 50 μmol/L 组;fasudil 100 μmol/L 组.采用甲苯胺兰染色法测定细胞黏附率,Boyden Chamber小室测定HSC跨膜迁移数量,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检验细胞[Ca2+]i,Western印迹检测HSC磷酸化肌球蛋白轻链[phosphorylated myosin light chain, p-MLC(Thr18/Ser19)]和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 Fasudil对HSC的黏附、迁移均具有抑制作用,随着浓度增加,抑制作用加强;fasudil与HSC共同培养后,HSC内[Ca2+]i无明显变化;fasudil抑制HSC的α-SMA表达,并且对Rho/ROCK信号转导通路关键信号分子p-MLC(Thr18/Ser19)的蛋白表达有抑制作用.结论 Fasudil通过抑制Rho/ROCK信号通路对细胞骨架的调节作用抑制HSC的黏附、迁移.
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子宫内膜异位症患者腹腔巨噬细胞第二信使系统--胞浆游离钙浓度的变化
目的:探讨子宫内膜异位症患者腹腔巨噬细胞第二信使系统--胞浆游离钙浓度的变化与其活性关系.方法:选择18例行腹腔镜检查的不孕患者,根据术后诊断分为两组:异位症组(n=10)和正常盆腔组(n=8),术时抽取腹腔液,分离巨噬细胞.应用Frua-2检测患者腹腔巨噬细胞浆游离钙浓度(fCa2+li.同时在腹腔巨噬细胞中加入浓度为100ng/ml丹那唑,观察丹那唑体外对腹腔巨噬细胞[Ca2+li的影响.结果:异位症患者腹腔巨噬细胞[Ca2+1i明显高于正常盆腔组(P<0.01),浓度为100ng/ml的丹那唑体外能明显降低患者腹腔巨噬细胞[Ca2+]i.结论:异位症患者腹腔臣噬细胞活性改变涉及细胞内第二信使系统的变化,丹那唑可通过降低细胞内ICa2+li抑制巨噬细胞活性.
