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卵巢癌组织中ING4基因的表达及其与微血管密度的关系
ING4是新近发现的肿瘤抑制基因,可通过抑制肿瘤血管增生的途径抑制肿瘤的生长.卵巢癌的病死率居妇科恶性肿瘤的首位,一经发现多属晚期,预后不良,总的5年生存率仅为30%左右,其原因与癌组织血管丰富、易发生转移密切相关[1].卵巢癌组织中的微血管密度(microvessed density,MVD)是评价血管生成的重要指标[2].本研究采用免疫组化法探讨卵巢癌组织中ING4的表达及其与MVD的关系,现报道如下.
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AD-ING4对MCF-7/ADR乳腺癌细胞抑制及其对化疗药物增敏机制探讨
目的 探讨重组腺病毒介导的人生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因对人乳腺癌多药耐药MCF-7/ADR细胞体外抑制和化疗增敏作用及相关分子机制.方法 用携带ING4基因的重组腺病毒感染MCF-7/ADR细胞,本实验分为胎牛血清(PBS)阴性对照组、Ad-GFP空载体腺病毒组、Ad ING4重组腺病毒组、3.0 μg/mL ADR组和Ad-ING4+3.0 μg/mL ADR组5组,应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测各组ING4基因及蛋白质在MCF-7/ADR细胞中的表达情况;用CCK-8法检测各组MCF-7/ADR细胞生长情况;分别用流式细胞术(FCM) PI单染法和Annexin V PE/7-AAD双荧光标记法检测各组细胞周期和细胞凋亡情况;并使用RT PCR和蛋白质印迹法检测各组MCF-7/ADR细胞中Bax、Bcl-2和Survivin等相关基因的表达情况.结果 腺病毒介导的ING4基因在MCF-7/ADR细胞中成功表达;Ad-ING4和ADR对MCF 7/ADR细胞生长均有明显的生长抑制和促凋亡作用,Ad ING4使MCF 7/ADR细胞周期阻滞在G2/M期,F=129.294,P＜0.05.Ad ING4联合ADR对细胞的生长抑制和促凋亡作用更明显,培养至第4天,其生长抑制率可达(73.13±3.78)％,显著高于Ad-ING4组(19.29±1.53)％和ADR组(48.39±2.96)％,F=257.397,P＜0.05;其凋亡率可达(26.48±3.13)％,显著高于Ad-ING4组(11.57±1.26)％和ADR组(17.21±2.34)％,F=30.253,P=0.001.蛋白质印迹法结果分析显示,导入ING4基因和ADR处理使Bax的表达增强,Bcl 2和Survivin的表达下降.与其他组相比较,Ad ING4联合ADR使上述效应更加显著,差异有统计学意义,P值均＜0.05.结论 Ad-ING4在体外可抑制MCF-7/ADR细胞的生长,并诱导其凋亡,对ADR的细胞毒作用具有协同增敏效应,其机制可能与ING4降低Bcl 2/Bax比值和抑制Survivin的表达有关.
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ING4基因在肿瘤发生作用中的研究进展
ING4基因是近年来新发现的一种肿瘤抑制因子,可能通过抑制肿瘤血管增生、调节细胞周期、增强p53的活性、恢复细胞间的接触抑制等途径抑制肿瘤的生长.ING4基因在正常组织中表达丰富,而在肿瘤组织中表达下降,多种肿瘤细胞系中均发现其存在突变,但其在肿瘤发生、发展过程中的确切作用尚不清楚.
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腺病毒载体AdING4对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制及化疗增敏作用
目的:研究腺病毒载体AdING4对人MCF-7乳腺癌细胞的生长抑制及化疗增敏作用.方法:将搭载有ING-4基因的重组腺病毒载体AdING4感染人MCF-7乳腺癌细胞,用荧光显微镜观察感染后的MCF-7细胞形态学变化;RT-PCR和Western-Blot法检测ING-4基因在MCF-7细胞中的转录和表达;RT-PCR法检测凋亡相关基因在MCF-7细胞中的表达;CCK法测定Ad-ING4感染MCF-7乳腺癌细胞后所发挥的细胞增殖抑制作用.流式细胞技术检测ING-4对MCF-7乳腺癌细胞的促凋亡作用.CCK-8法分别测定病毒感染前后的MCF-7乳腺癌细胞的药物半数抑制浓度IC50,并观察Ad-ING4与化疗药物合用后对MCF-7细胞增殖抑制和化疗增敏现象.结果:MCF-7细胞在转染ING-4基因后,明显出现变圆、脱落、皱缩、聚集等现象;外源性ING-4基因在MCF-7细胞中获得成功表达;外源性ING-4基因作用下MCF-7细胞的增殖受到了明显抑制,凋亡率有所升高,凋亡相关基因Bax的表达水平明显上调,Bcl-2、Survivin的表达水平明显下调.ING-4基因感染MCF-7细胞后,使MCF-7细胞对相关化疗药物的敏感度更高;ING-4基因与化疗药物合用后对MCF-7细胞的增殖抑制作用,较之单用化疗药物更为明显.结论:MCF-7细胞在转染ING4基因后其增殖受到了明显抑制并更易凋亡,该现象可能是通过改变Bax,Bcl-2及Survivin表达水平来实现的,且对化疗药物的敏感性更高.
关键词： ING4基因 腺病毒载体 MCF-7人乳腺癌细胞 凋亡 化疗增敏 -
腺病毒介导ING4或/和P53基因表达对人肺腺癌细胞的生长抑制作用
目的 在本室已构建Ad.RGD空载体和Ad.RGD-ING4腺病毒基础上,再构建Ad.RGD-P53和Ad.RGD-ING4-P53单双基因重组腺病毒,研究其对人肺腺癌细胞的生长抑制作用.方法 PCR克隆P53基因,构建pAd.RGD-P53和pAd.RGD-ING4-P53同源重组腺病毒质粒,用QBI-293A细胞进行包装扩增和检测效价.将Ad.RGD、Ad.RGD-ING4、Ad.RGD-P53、Ad.RGD-ING4-P53分别感染A549细胞后,流式细胞仪检测各组重组腺病毒对A549细胞的感染效率.Western blotting检测A549和PC-9细胞中ING4或/和P53蛋白的表达.MTT法检测A549细胞生长,流式细胞仪检测各组A549和PC-9细胞的凋亡率.real-time PCR检测A549细胞内凋亡相关基因Caspase-3、BAX及BCL-2 mRNA的表达水平.结果 PCR和酶切鉴定结果表明:成功构建了pAd.RGD-P53和pAd.RGD-ING4-P53同源重组腺病毒质粒,包装扩增后经效价检测可达1×109 ～1×1010 pfu/mL;各组重组腺病毒感染A549细胞后,感染效率可达90％～95％.Western blotting检测结果表明ING4或/和P53蛋白可在A549和PC-9细胞中成功表达.MTT法检测发现ING4或/和P53单双基因重组腺病毒均能明显抑制A549细胞生长,流式细胞仪检测表明ING4或/和P53基因表达均可诱导A549和PC-9细胞凋亡,且Ad.RGD-ING4-P53双基因重组腺病毒组较Ad.RGD-ING4和Ad.RGD-P53单基因组更为明显(P＜0.05).real-time PCR检测表明腺病毒介导的ING4或/和P53基因表达能够上调A549细胞内Caspase-3、BAX mRNA表达,下调BCL-2 mRNA的表达,且双基因组较单基因组更为明显(P＜0.05).结论 成功构建了Ad.RGD-P53和Ad.RGD-ING4-P53重组腺病毒.各重组腺病毒目的基因表达均能明显抑制人肺腺癌细胞的生长,诱导细胞凋亡,且双基因组较单基因组效果更优,其分子机制可能与细胞内凋亡相关基因Caspase-3、BAX表达上调及BCL-2表达下调有关.
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ING4基因的克隆和真核表达载体的构建
目的分离小鼠ING4(inhibitor of growth family,member 4)基因并构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-ING4.方法从小鼠肝组织中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出ING4cDNA,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-ING4,分别用双酶切、PCR、基因测序进行鉴定.结果RT-PCR产物为约750bp的条带,构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)-ING4经双酶切、PCR鉴定均出现750bp大小的条带,基因测序正确.结论分离得到了小鼠ING4基因并成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-ING4.
关键词： ING4基因 真核表达载体 pcDNA3.1(+) 小鼠 -
神经胶质瘤中ING4基因蛋白表达的研究
目的 探讨ING4基因在神经胶质瘤发生、发展中的作用.方法 采用免疫组织化学方法 对34例神经胶质瘤患者和24例正常对照组ING4基因的蛋白表达进行研究.结果 ING4基因在神经胶质瘤患者中的表达明显低于正常对照组(P<0.001).ING4基因的表达水平与神经胶质瘤的恶性程度呈负相关(rs=-0.470,P<0.01).结论 ING4基因在神经胶质瘤的发生、发展中可能起重要的作用.
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Ad-ING4对人前列腺癌细胞PC-3体内外抑癌效应的研究
背景与目的:腺病毒作为载体已被广泛用于肿瘤的基因治疗.ING4是生长抑制因子家族中的一个成员,是一种潜在的抑癌基因.本研究旨在探讨腺病毒介导的人ING4基因(Ad-ING4)对人前列腺癌细胞PC-3的体内外抑癌效应及其分子机制.方法:将扩增的Ad-ING4重组腺病毒感染PC-3细胞,用RT-PCR法检测ING4在PC-3细胞中的转录;MTT法检测ING4基因对PC-3细胞增殖的影响;流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡的变化;半定量RT-PCR法检测ING4基因的表达对PC-3细胞中的bcl-2、bax、p53和caspase-3凋亡相关基因表达的影响.用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠PC-3移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,15 d后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重:用免疫组化法检测瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和CD34蛋白的表达.结果:腺病毒介导的人ING4基因在PC-3细胞中成功转录,明显抑制PC-3细胞增殖,上调p53、bax、caspase-3基因表达和下调bcl-2基因表达,并诱导细胞凋亡.Ad-ING4重组腺病毒能显著抑制裸鼠PC-3移植瘤的生长,瘤重的抑制率达37%,与空病毒载体Ad-GFP 组和细胞对照PBS组比较差异有统计学意义(P＜0.05);免疫组化结果显示Ad-ING4重组腺病毒能明显上调Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,下调Bcl-2和CD34蛋白的表达水平.结论:腺病毒介导的ING4基因在体内外均可明显抑制人前列腺癌细胞PC-3的生长,诱导其凋亡,其机制可能是上调P53、Bax、Caspase-3蛋白和下调Bcl-2蛋白表达水平.
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神经胶质瘤中生长抑制因子基因的表达
目的:探讨生长抑制因子4(ING4)基因在神经胶质瘤发生发展过程中的作用.方法:采用RT-PCR方法扩增34例神经胶质瘤惠者手术标本和24例正常脑组织标本的ING4基因和内参照GAPDH基因.凝胶分析软件对RT-PCR产物进行半定量分析,比较ING4基因mRNA在神经胶质瘤和正常脑组织中的表达情况.结果:所有的标本均扩增出ING4基因的目的条带.神经胶质瘤中的ING4基因mRNA表达水平明显低于正常脑组织(P<0.05).恶性度高的神经胶质瘤组明显低于低度恶性神经胶质瘤组(P<0.05).结论:ING4基因在神经胶质瘤的发生发展过程中可能起一定的作用,且与恶性程度有一定相关性.
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Ad-ING4-IL-24对骨肉瘤生长抑制效应的实验研究
目的：研究肿瘤生长抑制因子4（ING4）和人白细胞介素24（hIL-24）双基因共表达腺病毒载体对MG-63人骨肉瘤细胞及其裸鼠移植瘤的抑癌增效作用。方法：将 Ad-ING4-IL-24腺病毒感染 MG-63细胞，用 RT-PCR 法检测 ING4和（或）IL-24基因在肿瘤细胞中的表达。 MTT 法和流式细胞仪（FCM）检测ING4和（或）IL-24基因的表达对 MG-63的生长抑制和促凋亡的影响。用骨肉瘤细胞的裸鼠移植瘤动物模型，检测 Ad-ING-IL-24对移植瘤生长的抑制作用，并通过免疫组化法检测 Bcl-2、Bax、Caspase-3等基因的表达。结果：ING4和 IL-24基因在 MG-63细胞中成功表达，并对 MG-63增殖有明显抑制作用，并能引起细胞凋亡，其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值升高有关。动物实验表明 Ad-ING4-IL-24能显著抑制移植瘤生长，瘤重抑瘤率达75．7％。免疫组化结果显示 Ad-ING4-IL-24能明显上调 Bax、P21和 Caspase-3等基因的表达，同时下调 Bcl-2和 CD34的表达。结论：Ad-ING4-IL-24在肿瘤基因治疗中是非常理想的抑癌增效载体。
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ING4基因在肿瘤细胞凋亡过程中的研究进展
ING4(inhibitor of growth family member4)基因是近年来新发现的一种肿瘤抑制基因.作为抑癌基因家族的重要成员,其广泛参与基因调节转录、细胞周期、凋亡、细胞衰老、接触抑制、DNA修复、抑制血管生成、促进细胞自噬等多个过程,对肿瘤的进程和预后产生重要影响.肿瘤细胞的凋亡在肿瘤研究中处于热点话题.ING4基因在肿瘤细胞凋亡过程中具有重要作用,它可以通过调节线粒体依赖性途径和死亡受体途径诱导细胞凋亡,还可以通过调节凋亡基因参与肿瘤细胞的凋亡.
