首页 > 文献资料
-
人红细胞生成素单克隆抗体的制备研究
将杂交瘤细胞接种于BAIB/C小鼠腹腔内,令细胞增殖,抽取接种杂交瘤细胞后两周左右的腹水,采用硫酸胺盐析,饱和度为50%,然后上DEAE-Cellulose DE52柱,NaCl浓度梯度洗脱,所得单克隆抗体纯度达90%,可用于免疫亲和柱的制备.
关键词： 人红细胞生成素(hEPO) 单克隆抗体(Mab) -
发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及初步应用
目的 制备发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒( SFTSV)核衣壳蛋白(NP)的单克隆抗体,并探讨其在该病诊断中的作用.方法 克隆NP基因,构建原核表达载体pComb 3XSS-NP,并转化大肠杆菌Top10F',经诱导表达,纯化获得6HIS-NP融合蛋白.以该融合蛋白免疫Balb/c小鼠,经杂交瘤技术制备NP的鼠源单克隆抗体.经鉴定后,选择1株1C8-C6进行大量制备、纯化,并偶联辣根过氧化物酶(HRP),用该酶标抗体对SFTSV感染人的急性期血清进行Western blot检测.结果 成功表达、纯化SFTSV重组的NP.经小鼠免疫、细胞融合和ELISA筛选后,共获得4株鼠源单克隆抗体.具较高滴度的1C8-C6酶标抗体能与SFTSV感染人的急性期血清中的NP在Western blot水平上结合,而与汉坦病毒、登革热病毒感染人急性期血清及正常人血清不反应.结论 SFTSV NP的表达及其单抗的制备为该病的实验室诊断奠定了基础.
-
小鼠抗人亲环蛋白A (CypA)单克隆抗体的制备和应用
目的 原核表达人亲环蛋白A (CypA)、制备抗人亲环蛋白A(CypA)单克隆抗体(mAb)并初步探索其在结肠癌发生发展中的作用.方法 根据CypA基因序列,以原核表达系统表达CypA重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,免疫小鼠,杂交瘤法制备mAb;采用免疫组织化学染色法检测CypA在结直肠癌与癌旁组织中的差异表达,并分析与临床病理参数的相关性.结果 成功构建了CypA原核表达载体,获得纯化的目的蛋白;获得1株稳定分泌抗人CypA mAb的杂交瘤细胞株;研究表明,结直肠癌组织CypA阳性染色率显著增高并与肿瘤分化程度及淋巴结转移相关.结论 成功制备了小鼠抗人CypA mAb,并发现CypA在结直肠癌组织中高表达,与低分化和淋巴结转移呈正相关.
关键词： 亲环蛋白A 结直肠癌 单克隆抗体(Mab) -
小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1单克隆抗体的制备
目的 制备肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1特异性小鼠单克隆抗体(mAb)并检测其特异性.方法 合成编码EV71-VP1的基因并克隆入原核表达质粒pET21a;采用重组表达的VP1免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合并采用ELISA筛选可分泌抗VP1的mAb的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔,采用蛋白G亲和层析法从腹水中纯化mAb,并采用SDS-PAGE和Western blot法检测mAb的纯度和特异性;EV71感染Vero细胞,采用间接免疫荧光细胞化学染色和Western blot法评估所制备mAb识别EV71的能力.结果 成功表达了EV71-VP1,制备出了4株杂交瘤细胞(6E、8D、9F和10C),杂交瘤细胞所分泌的小鼠mAb均可识别EV71.结论 成功制备了小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1的mAb.
-
抗非洲马瘟VP7蛋白的小鼠单克隆抗体制备及其鉴定
目的 制备抗非洲马瘟病毒(AHSV)蛋白VP7的单克隆抗体(mAb)并进行鉴定及分析.方法 本研究以杆状病毒表达的VP7蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备mAb,通过ELISA、间接免疫荧光法(IFA)及阻断AHSV阳性血清等实验检测mAb的效果,利用mAb亚型分类鉴定试剂盒检测这四株mAb的亚型.结果 筛选出20A8、28B3、30G8、47E6四株mAb,其中47E6阻断效果好.结论 成功制备了抗VP7蛋白的mAb.
关键词： 非洲马瘟病毒(AHSV) 单克隆抗体(Mab) -
阻断型抗人CD258(LIGHT)单克隆抗体的研制及生物学特性的鉴定
目的 分析CD258 (LIGHT)/单纯疱疹病毒侵入介体(HVEM)介导的信号通路对T细胞的协同刺激作用与机制.方法 以基因转染细胞L929/LIGHT为免疫原免疫小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶脱氧核苷(HAT)选择性培养基培养杂交瘤细胞.流式细胞术分析筛选阳性克隆,经过4次亚克隆化培养,获得1株小鼠抗人LIGHT单克隆抗体(mAb),检测其是否识别特异性抗原位点,体外外周血单个核细胞(PBMC)与LIGHT mAb共培养.结果 反复筛选并亚克隆获得一株鼠抗人LIGHT单克隆抗体7A8,亚类为IgG2b,轻链为κ型.流式细胞术分析该mAb特异性识别细胞表面的LIGHT分子.LIGHT mAb与转基因细胞的结合率受到HVEM-Ig融合蛋白干预而有所降低.PBMC与LIGHT转基因细胞体外共培养实验证实,该mAb阻断淋巴细胞活化和增殖,进一步减少细胞因子分泌.结论 成功获得一株特异性识别人LIGHT分子的单克隆抗体7A8,与HVEM-Ig融合蛋白结合L929/LIGHT的抗原表位不完全相同,是一株有阻断效应的功能型抗体.
-
鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白单克隆抗体的制备及其初步鉴定
目的:经发表的鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)ORF214基因序列,利用PCR方法扩增出目的片段,测序后并克隆至原核表达载体pET-28a,用表达产物制备抗FPVORF214蛋白单克隆抗体(mAb).方法:以鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,用间接ELISA方法检测筛选.结果:阳性细胞株经3代克隆纯化后,获得3株能稳定分泌抗FPV ORF214蛋白mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2F10C9、3C3 B10、2G8G7.3株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与FPV ORF214蛋白反应,细胞上清ELISA效价均在1×102以上,mAb腹水效价达1×104以上.结论:该特异性mAb的研制成功为进一步研究ORF214的生物学特性奠定基础.
关键词： 鸡痘病毒 ORF214 单克隆抗体(Mab) -
识别不同结构域的PTA1/CD226的mAb与活化血小板的关系
目的:研究识别不同PTA1/CD226分子结构域的mAb与刺激血小板活化的关系.方法:采用识别不同结构域的抗PTA1/CD226的mAb(FMU1-7),应用免疫荧光染色、流式细胞术和血小板凝集试验,研究识别不同结构域mAb对血小板的活化作用.结果:识别CD226第1个结构域的3株mAb(FMU1、2和3)可以与血小板结合,并可刺激血小板发生凝集,而识别CD226第2个结构域的mAb FMU6、FMU7以及识别两个结构域之间序列的FMU4和FMU5既不能与皿小板表面天然的CD226分子结合,也不能刺激血小板活化.结论:抗PTA1/CD226mAb刺激血小板活化与抗体识别的结构域有关.
关键词： PTA1/CD226 血小板 单克隆抗体(Mab)
