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USH2A新复合杂合突变引起中度感音神经性耳聋
目的 寻找并确定一例中度感音神经性耳聋患者的遗传分子病因,探讨该突变的致病性,为该家庭再生育提供遗传指导.方法 采集一个耳聋小家系(No.1501ZJS)样本3例,包括1例听力下降患者、2例正常听力父母亲,临床资料完整;对No.1501ZJS家系患者样本进行140个已知耳聋基因捕获、二代测序及生物信息学分析,确定可疑致病突变后采用突变位点PCR扩增,Sanger测序在该家系内部进行验证.采用生物信息学方法对新突变的致病性进行预测.结果 USH2A基因复合杂合突变c.8342C＞T(p.T2781I)和c.6628C＞G(p.P2210A)是No.1501ZJS家系的致聋突变.结论 目标区域捕获结合二代测序技术为具有高度遗传异质性的耳聋个体及家庭提供了有力的检测手段.采用该方法我们成功为No.1501ZJS家庭明确了致聋突变,其中c.8342C＞T(p.T2781I)是已报道的致聋突变,而c.6628C＞G(p.P2210A)则为首次发现.我们的研究丰富了遗传性聋的突变谱.
关键词： USH2A基因 致病新突变 常染色体隐性遗传性耳聋 -
常染色体隐性遗传视网膜色素变性患者致病突变基因分析
目的 研究一常染色体隐性遗传视网膜色素变性家系(autosomal recessive retinitis pigmentosa,ARRP)的致病突变基因.方法 选取2016年就诊于本院眼科门诊的来自山东的一视网膜色素变性家系,采用目标区域捕获高通量测序方法对先证者Ⅱ7(女,48岁)基因组DNA进行检测,锁定患者的致病基因,进一步在该家系其他研究对象中进行相关突变位点的验证,终确定该家系患者的致病基因突变位点.结果 该家系为USH2A基因上多个突变位点复合杂合突变所致,患者Ⅱ7和Ⅱ9均由USH2A上的c.4649C＞A和c.970G＞A两个位点组成的复合杂合突变致病,患者Ⅲ5是由USH2A上的c.4649C＞A和c.8559-2A＞G两个位点组成的复合杂合突变致病.结论 采用目标区域捕获高通量测序技术,可以在ARRP患者中筛查致病基因,结合家系内其他成员的Sanger验证,可明确该家系患者的致病基因及突变位点.
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中国人与欧美人USH2A基因突变谱不同
Usher综合征是一种常见的综合征性视网膜色素变性(RP),为常染色体隐性遗传性疾病,具有临床和遗传高度异质性.迄今已将Usher综合征的致病基因定位了12个染色体位点,确定了其中的9个致病基因.很多研究证实USH2A基因是Usher综合征的主要致病基因,USH2A基因突变还可引起单纯性RP,但国内的一些研究结果发现,中国人USH2A基因突变谱与欧美人不同.中国人RP致病的热点基因谱尚有待进一步研究.
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一个Usher综合征家系USH2A基因的突变分析
目的 探讨一个Usher综合征家系的致病基因突变.方法 对一个疑似为Usher综合征Ⅱ型家系的所有11名成员进行全面的眼科检查和听力测试,并提取外周血基因组DNA,采用PCR和直接测序对先证者进行USH2A基因的突变筛查.以正常人和患者的基因组DNA为模版,分别构建包含USH2A基因第42外显子、第42内含子及第43外显子的野生型和突变型minigene真核表达质粒.采用脂质体法将携带minigene的质粒转染Hela细胞,通过实时定量PCR检测minigene的剪切情况.结果 家系分析和临床诊断提示该家族患有常染色体隐性遗传的Usher综合征Ⅱ型.测序发现先证者的USH2A基因中存在纯合的c.8559-2A＞G突变.对其他家系成员进行测序验证发现该突变与疾病共分离.c.8559-2A＞G突变为剪切突变,可能引起第42内含子的剪切异常.Minigene结果证实该突变可导致第42内含子不能剪切,从而保留至成熟的mRNA中.结论 USH2A基因c.8559-2A＞G突变是该Usher综合征Ⅱ型家系的致病原因.该突变可以导致USH2A pre-mRNA的剪切异常.
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一个Usher综合征2型家系USH2A基因的突变分析
目的 鉴定1个Usher综合征2型家系USH2A基因的致病性突变,为其提供分子遗传学依据.方法 对1个Usher综合征家系2例患者与4名表型正常家系成员的USH2A基因的全部编码区及侧翼剪切位点进行PCR扩增,产物直接测序进行突变分析,同时选择100名无亲缘关系的正常对照进行检测.结果 家系中2例患者(先证者及其妹妹)均携带了USH2A基因第42外显子c.8272G＞T(p.E2758X)和第63外显子c.12376-12378 ACT＞TAA(p.T4126X)复合杂合性突变.而患者的父亲为c.12376-12378 ACT＞TAA杂合突变携带者,其母亲为c.8272G＞T杂合突变携带者,两名表型正常的家系成员未检测到突变.经检索HGMD数据库两个突变均为新突变,且与家系疾病表型共分离.100名无血缘关系的正常人中未发现该突变.结论 USH2A基因的c.8272G＞T(p.E2758X)和c.1237612378ACT＞TAA(p.T4126X)复合杂合性突变可能为该家系的致病原因,为该Usher综合征家系的病因诊断提供了分子遗传学依据.
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耳聋患儿的TECTA基因突变分析
目的 探讨1例耳聋患儿的分子遗传病因,为家系的遗传咨询和产前诊断提供依据.方法 提取先证者外周血基因组,用芯片法富集纯化127种耳聋相关基因,以＞ 100×测序深度进行二代测序,通过数据库分析比对,寻找致病突变.用Sanger测序法进一步验证疑似突变,排除二代测序错配误差.结果 先证者TECTA基因发生c.1893C＞A纯合突变,该突变使TECTA蛋白翻译提前终止,丧失功能;USH2A基因存在c.13010C＞T和c.12790G＞A复合杂合突变,前者疑似致病突变,后者临床意义不明.家系分析证实先证者的突变均遗传自父母.结论 TECTA基因c.1893C＞A纯合突变可能是先证者耳聋的主要原因,该位点遵循常染色体隐性遗传.
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Usher综合征一家系的致病基因分析
目的:对一Usher综合征家系的临床特征进行分析,探索该家系的致病基因.方法:收集于我院就诊的一视网膜色素变性家系,详细询问患者病史并进行临床检查,诊断为Usher综合征,抽取家系成员静脉血4mL,提取全基因组DNA,对先证者进行靶向捕获高通量测序获得突变位点,对于筛选出的可疑突变扩展至家系全体成员进行Sanger测序验证,同时在100名正常对照者中验证.结果:患者除视网膜色素变性表现外,还存在轻至中度感音神经性耳聋,测序结果发现家系患者USH2 A基因复合杂合突变c.23102311insA(p.E771Rfs*8)和c.8559-2A>G(IVS42),而在与患者有直系血缘关系的亲属中发现仅存在其中1个突变,其他家属成员和正常人中未发现该两种突变.结论:USH2A基因为该家系的致病基因,c.8559-2A>G(IVS42)突变为已报道的热点突变,而c.23102311insA(p.E771Rfs*8)突变则为首次报道,本研究扩展了USH2 A基因导致Usher综合征的突变谱.
