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变形链球菌gtfs在不同蔗糖浓度下的差异性表达
目的 检测具有不同产细胞外多糖能力的变形链球菌株,在不同培养条件下产细胞外多糖的能力及与gtfA、B、C、D表达变化的关系.方法 选取变形链球菌高产糖与低产糖的临床分离菌株各10株及标准菌株UA159,用蒽酮法分别检测在1％、2％蔗糖培养下产细胞外多糖的能力;再用real-time PCR方法检测这些条件下与变链产糖能力密切相关的毒力因子葡萄糖基转移酶A、B、C、D的表达变化.结果 蔗糖能诱导各菌株产生细胞外多糖.不同蔗糖浓度,高产糖菌株葡萄糖基转移酶A、B、C、D的表达均高于低产糖菌株.1％蔗糖浓度下,高产糖株与低产糖株葡萄糖基转移酶A、B、C、D表达均有不同程度升高.2％蔗糖浓度下,低产糖株gtfB、C、D表达均不同程度降低,葡萄糖基转移酶A略有升高,而高产糖株葡萄糖基转移酶A、B、D表达升高,仅葡萄糖基转移酶C略有降低.结论 变形链球菌葡萄糖基转移酶的表达水平和产生细胞外多糖的能力受蔗糖浓度的影响.
关键词： 变形链球菌 葡萄糖基转移酶 Real-time PCR -
甜茶苷对变形链球菌致龋能力的影响
目的 研究甜茶苷对变形链球菌Streptococcus mutans致龋能力的影响.方法 将变形链球菌菌液加入甜茶苷后于恒温厌氧环境下培养,测试其pH值变化、黏附率,运用碳氢化合物法测定其表面疏水率.采用Bradford法以Neson-samogyi 分别测量总蛋白的量以及还原糖的量,计算葡萄糖基转移酶(glucosyltransferase,GTF)活力,采用Anihrone法测量水不溶性葡聚糖(water-insoluble glucans,WIG)的量.结果 加入甜茶苷的菌液pH变化值、黏附率、表面疏水率、GTF活力及WIG的量与对照组之间均有显著性差异(P＜0.01).结论 甜茶苷对变形链球菌产酸能力、黏附能力、GTF活力及WIG合成具有显著抑制作用.
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原花青素对变形链球菌耐氟菌株抑菌效果的研究
目的 研究葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)对变形链球菌耐氟菌株生长、产酸及葡萄糖基转移酶(GTF)的影响.方法 选用变形链球菌标准菌株UA159诱导耐氟突变株(UA159-FR),采用液体稀释法测定GSPE对UA159-FR的低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),将UA159-FR接种于含有梯度浓度GSPE的培养基,厌氧培养并测定其生长曲线和pH变化曲线.提取GTF粗酶,Neson-Somogyi法测定还原糖含量,计算酶活性.结果采用SPSS19.0软件包进行数据分析.结果 GSPE对UA159-FR的MIC为1.00g/L,各实验组UA159-FR的生长曲线在生长对数期较对照组低,进入平台期时间延后.各实验组中GSPE对GTF活性的抑制作用相比对照组有统计学意义(P＜0.05).结论 GSPE对UA159-FR的生长、产酸、GTF酶的活性均有抑制作用.
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氟化微量元素对变形链球菌葡萄糖基转移酶影响的比较研究
目的 比较氟化微量元素制剂对变形链球菌葡萄糖基转移酶活性的抑制作用.方法 含相同氟浓度的5种氟化微量元素制剂(氟化锌、氟化镧、氟化亚锡、氟化锶、氟钼酸铵)和氟化钠分别加入到含变形链球菌悬液的TYC培养基中,采用Neson-Somogyi法,观察变形链球菌葡萄糖基转移酶活性的变化.结果 氟化钠、氟化锌、氟化锶、氟化亚锡、氟化镧、氟钼酸铵制剂均有抑制变形链球菌ATCC25175葡萄糖基转移酶活性的作用,其中尤以氟化亚锡抑制作用强(P＜0.05). 结论锡可提高氟化物的防龋生物活性,在抑菌防龋方面,氟化微量元素有广泛的应用前景.
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葡萄糖神经酰胺合成酶在肿瘤多药耐药中的研究
葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)参与神经酰胺(Cer)糖基化代谢途径,能阻断Cer对细胞凋亡信号的转导.研究表明在多种肿瘤多药耐药细胞株中GCS含量增加且与耐药表型相关,GCS和P-糖蛋白(P-gP)在细胞耐药的生物学机制中有相关性.通过化学抑制剂以及RNA干扰技术下调GCS的水平和活性能增强肿瘤细胞对药物的敏感性.因此,抑制GCS是逆转肿瘤多药耐药的一种新机制.
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变异链球菌葡萄糖基转移酶转录调控因子的研究进展
葡萄糖基转移酶是变异链球菌自身合成的一种重要的固有酶,是变异链球菌重要的致龋因子,它以蔗糖作为代谢底物,合成生物膜重要的胞外多糖葡聚糖,葡聚糖一方面介导细菌蔗糖依赖的生物膜形成,另一方面当外源性糖源缺乏时,被降解供细菌继续代谢.因此可以通过控制葡萄糖基转移酶而控制龋病的发生发展.本文就变异链球菌葡萄糖基转移酶基因转录的调控因子作一综述.
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变形链球菌中葡萄糖基转移酶的研究进展
1.前言龋病是发生于牙齿硬组织的感染性疾病,为常见的口腔疾病.龋病的发生主要与变形链球菌有关,这主要是因为它具有产酸和耐酸性,能够合成细胞内多糖(intracellular polysaccharide,ICP)与细胞外多糖(extracellular polysaccharide,ECP),其中细胞外多糖特别是水不溶性葡聚糖(water insolubal glucan,WIG)与合成葡聚糖的葡萄糖基转移酶(glucosyltransferase,GTF)已被广大学者公认为致龋的主要因子.变形链球菌有不同的血清型,其中变形链球菌(Streptococcus mutans) c型在人类中的检出率高,高达80%,其次为远缘链球菌(Streptococcus sobrinus,有的文献称之为Streptococcus mutans 6715)为9%[1].
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含碘的乳过氧化物酶-过氧化氢-硫氰化物系统对变异链球菌致龋性的影响
目的：研究含不同浓度碘（I-）的乳过氧化物酶-过氧化氢-硫氰化物系统（LPO-H2O2-SCN-）对变异链球菌生长、黏附、产水不溶性细胞外多糖以及葡萄糖基转移酶（GTF）活性的影响。方法选用S. mutans ATCC 25175为实验菌株。采用菌落形成单位（CFU）计数法进行生长实验；用分光光度计法测定细菌的黏附抑制率；用蒽酮法测定水不溶性细胞外多糖的质量浓度；用蒽酮法测定还原糖量，计算GTF活性。结果随着I-浓度的增高，含I-的LPO-H2O2-SCN-抗菌系统对S. mutans致龋力的抑制作用增强。当I-≥100μmol·L-1时，对S. mutans的生长抑制明显高于对照组（P<0.05）；且当I-≥1000μmol·L-1时，对S. mutans的生长抑制显著高于以硫氰酸盐（SCN-）为单底物的实验组（P<0.05）；当I-≥100μmol·L-1时，对S. mutans的黏附抑制率达到50%以上，水不溶性细胞外多糖生成量明显减少（P<0.05），GTF活性也明显降低（P<0.05）。结论通过增加I-的浓度，可以抵消生理浓度的SCN-的抑制作用，使含I-的LPO-H2O2-SCN-系统能显著抑制变异链球菌的生长、黏附、水不溶性细胞外多糖生成和GTF活性。
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变异链球菌gtfs在不同pH条件下表达的差异性
目的 检测具有不同产胞外多糖(EPS)能力的变异链球菌菌株在不同pH条件下产EPS的能力及其与gtfA、gtfB、gtfC、stfD表达变化的关系.方法 选取变异链球菌(血清型c)临床分离株502(高产糖株)和参考株UA159(低产糖株),以实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)方法检测在不同pH条件下与变异链球菌产糖能力密切相关的毒力因子gtfA、gtfB、gtfC、gtfD的表达变化.结果 在pH5.5条件下,高产糖株和低产糖株gtfA、gtfB、gtfD的表达均有不同程度的升高,而gtfC略降低,高产糖株gtfB、gtfC的表达水平高于低产糖株.结论 gtfs的表达水平与变异链球菌的致龋力密切相关.
关键词： 变异链球菌 葡萄糖基转移酶 实时定量逆转录聚合酶链反应 -
伊犁黑蜂蜂胶对变形链球菌属及其生物膜代谢影响研究
目的：探讨伊犁黑蜂蜂胶乙醇提取物（Ethanol extract of Propolis，EEP）与氟化钠（NaF）对致龋变形链球菌属产酸、产糖代谢关键酶乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase， LDH ）与葡萄糖基转移酶（Glycosyltransferase，GTF）及基因表达的影响及其防龋机制。方法分别培养游离状态与生物膜状态下生长的变形链球菌、远缘链球菌，以含梯度浓度 EEP 的脑心浸液培养基（Brian Heart Infusion，BHI）作为实验组，50 mg／L NaF 的 BHI 培养基作为阳性对照组，以不添加任何药物的 BHI 培养基作为阴性对照组。各组与不同生长状态的细菌作用18 h。采用还原性辅酶 I 氧化法测定乳酸脱氢酶活性。硫酸铵盐析结合超滤离心法提取 GTFs 粗酶，蒽酮法测定 GTFs 活性。RT-qPCR 法测定各组 LDH 编码基因 ldh 表达和各组 GTFs 编码基因 gtfb 、gtfc 、gtfd 表达。结果在游离状态与生物膜状态下，变形链球菌、远缘链球菌各实验组和 NaF 组 LDH 活性均明显受到抑制（P ＜0．05）。在游离状态和生物膜状态下，EEP 组、NaF 组变形链球菌 GTFs 活性没有变化（P ＞0．05）。游离状态时，变形链球菌、远缘链球菌实验组和 NaF 组 ldh 表达明显受到抑制（P ＜0．05）；生物膜状态下，变形链球菌实验组在1、1／2、1／4MBEC 浓度时 ldh 表达受到抑制（P ＜0．05），远缘链球菌实验组在1、1／2、1／4、1／8MBEC 浓度时ldh 表达受到抑制（P ＜0．05），NaF 组细菌在 ldh 表达差异没有统计学意义（P ＞0．05）。游离状态与生物膜状态下，变形链球菌实验组 gtfb 、gtfc 、gtfd 基因表达与阴性对照组差异无统计学意义（P ＞0．05）。游离与生物膜生长状态下，变形链球菌 NaF 对 gtfb 基因表达有促进作用（P ＜0．05）。结论伊犁黑蜂蜂胶是通过抑制产变形链球菌属糖代谢途径 LDH 活性及其转录来抑制变形链球菌产酸，从而达到防龋的效果。
