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scTRAIL在E.coli中的重组表达及抗肿瘤活性的研究
目的:重组表达人单链TRAIL(single-chain TRAIL,scTRAIL)及研究其在抗肿瘤中的作用.方法:通过重组PCR获得编码scTRAIL的基因序列,构建含编码scTRAIL基因的重组质粒,将重组表达质粒转化到大肠埃希菌(E. coli)BL21(DE3),通过IPTG诱导,破碎细菌,上清行Amylose Resin亲和层析初步纯化融合蛋白.通过MTT法检测融合蛋白对人胰腺胆管上皮细胞SW1990、人大细胞肺癌NCI-H460和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的增殖抑制作用.结果:成功构建并克隆编码scTRAIL的基因序列,经IPTG诱导表达,表达产物的表达量约占菌体蛋白的20%左右,获得了相对分子质量约为110 kD的可溶性重组蛋白MBP-scTRAIL . MBP-scTRAIL分别作用于NCI-H460和SW1990,其增殖抑制作用IC50分别约为111 ng/ml和250 ng/ml,且MBP-scTRAIL增殖抑制率明显高于 TRAIL114-281(P ＜0. 01 ).结论:scTRAIL的抗肿瘤效果优于单体TRAIL114-281,是一种安全、有效的抗肿瘤生物制品.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 单链化 大肠埃希菌 重组表达 抗肿瘤活性 -
姜黄素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对前列腺癌细胞的抑制作用
目的:探讨姜黄素(curcumin,Cur)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)对前列腺癌细胞的抑制作用.方法:CCK-8法测定Cur、TRAIL及Cur联合TRAIL作用于PC-3细胞后的细胞生存率,流式细胞技术测定细胞周期及凋亡率,光学显微镜下观察细胞形态,Westernblot检测凋亡蛋白caspase-3表达水平的变化.结果:与对照组比较,Cur联合TRAIL组能显著抑制PC-3细胞增殖(P＜0.05),呈时间依赖性,且使PC-3细胞阻滞于G2/M期比例明显增多(P＜0.05).镜下可见联合应用Cur和TRAIL处理的PC-3细胞凋亡形态改变明显,凋亡率较对照组高(P＜0.05),凋亡蛋白caspase-3表达也增强.结论:Cur与TRAIL联用可明显增强PC-3细胞抑制效果和诱导凋亡作用,其凋亡作用机制可能与其上调caspase-3表达有关.
关键词： 前列腺癌 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 姜黄素 细胞凋亡 -
三氧化二砷增强TRAIL对肺癌移植瘤抑制作用的研究
目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对裸鼠肺癌移植瘤的抗肿瘤作用及可能机制.方法:将裸鼠肺癌移植瘤模型随机分为生理盐水组、TRAIL组、ATO组及TRAIL+ ATO组,称瘤重并计算抑瘤率,用RT-PCR检测NF-κB、Caspase-3、Survivin基因表达变化.结果:与生理盐水组比较,ATO组对裸鼠肺癌移植瘤具有抑制作用,联合用药具有协同增效作用,抑制NF-κB表达,下调Survivin mRNA,上调Caspase-3的表达.结论:ATO可能通过NF-κB通路,下调Survivin,上调Caspase-3增强TRAIL对裸鼠肺癌移植瘤的抗肿瘤作用.
关键词： 三氧化二砷 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 肺肿瘤 NF-κB -
埃克替尼提高胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性
目的:胃癌细胞大多对TRAIL(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand)不敏感.本研究为探讨胃癌细胞对TRAIL耐药的原因以及如何提高胃癌细胞对TRAIL的敏感性.方法:流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹法检测蛋白的表达.结果:TRAIL(100ng/ml)作用MGC803和SGC7901细胞20小时,TRAIL诱导少量细胞凋亡,同时检测到EGFR和下游Akt、ERK的活化.用新型的EGFR酪氨酸激酶抑制剂埃克替尼(10μmol/L)预处理MGC803和SGC7901细胞2小时,之后加用TRAIL,结果抑制了TRAIL引起的EGFR和下游Akt、ERK的磷酸化,并终提高了MGC803和SGC7901细胞对TRAIL的敏感性.结论:埃克替尼通过抑制EGFR通路从而增强了TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡.
关键词： 胃癌 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 表皮生长因子受体 AKT ERK -
TRAIL联合三氧化二砷诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究
目的:研究TRAIL和三氧化二砷共同作用于骨肉瘤OS732细胞对其产生的的杀伤作用,来探寻临床上骨肉瘤的治疗新策略.方法:选取骨肉瘤OS732细胞作为研究对象,将TRAIL及三氧化二砷分别独自或者共同作用于骨肉瘤细胞,对骨肉瘤细胞的杀伤作用通过MTT法来测定,以抑制率的形式体现出来,并在倒置显微镜、荧光显微镜下分别观察肿瘤细胞的形态改变.结果:50ng/ml的TRAIL与2μmol/L三氧化二砷共同作用于骨肉瘤细胞24小时后,肿瘤细胞抑制率为51.32％±4.71％,此作用明显强于单独应用TRAIL( 50ng/ml)时的9.85％±0.97％及单独应用三氧化二砷(2μmol/L)时的20.36％±3.84％ (P ＜0.01).从细胞形态结构的改变上体现出此种杀伤作用是通过诱导细胞凋亡实现的.结论:TRAIL与三氧化二砷可以协同杀伤骨肉瘤细胞,这种杀伤效应是通过促进OS732细胞的凋亡来实现的.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 骨肉瘤 三氧化二砷 -
干扰素-α通过上调DR5和抑制Akt的活性增加胃癌细胞对TRAIL的敏感性
目的:观察IFN -α对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响,并对死亡受体DR5和PI3 K/A kt通路在此过程中的作用机制进行探讨.方法:MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪PI染色检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测蛋白的表达.结果:IFN-α预处理可协同TRAIL抑制胃癌MGC803细胞增殖.单独用IFN -α或TRAIL处理MGC803细胞,仅有少量的细胞发生凋亡,IFN -α和TRAIL联合用药细胞凋亡明显增加(P＜0.01).IFN -α能上调DR5的表达,抑制Akt的磷酸化.结论:IFN -α能增强TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡,其机制可能与其上调DR5的表达和抑制Akt的活性有关.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 干扰素α 死亡受体5 PI3K/Akt通路 胃癌 -
rmhTRAIL诱导耐阿霉素细胞株K562/A02凋亡及作用机制的实验研究
目的:探讨recombinanat mutant human TNF-related apoptosis-inducing ligand,(rmhTRAIL)对阿霉素诱导的人慢性粒细胞白血病红白血病变耐药细胞株K562/A02(mdr-1+)的促凋亡作用及其机理.方法:以亲本阿霉素敏感细胞株K562(mdr-1-)为对照,观察rmhTRAIL作用后K562、K562/A02细胞形态变化,采用碘化丙啶染色法流式细胞术(FACSCalibur)定量检测细胞sub-G1%,MTT法测定rmhTRAIL对细胞增殖抑制,半定量逆转录-聚合酶链反应(semiquantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测K562、K562/A02细胞的四种TRAIL受体DcR1、DcR2、DR4、DR5mRNA表达水平.结果:rmhTRAIL可诱导K562、K562/A02细胞凋亡,有典型的细胞形态改变;流式细胞术检测显示K562/A02的sub-G1%大于K562(P＜0.05);rmhTRAIL对K562/A02的增殖抑制作用优于K562(P＜0.05);K562/A02中DR4、DR5mRNA的表达高于K562,DcR1mRNA在K562/A02表达低于K562,DcR2 mRNA在两种细胞中均不表达.结论:rmhTRAIL可以诱导K562/A02细胞凋亡;rmhTRAIL对K562/A02促凋亡和抑制增殖作用优于其亲本细胞K562;K562/A02细胞表面TRAIL死亡受体高表达及诱骗受体低表达可能是耐药细胞更敏感的原因.
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TRAIL 诱导 CHP212 细胞凋亡中 Caspase 8/Caspase 3 活性的变化
目的:探讨 Caspase 8 和 Caspase 3 在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导神经母细胞瘤细胞株 CHP212 细胞凋亡中活性的变化.方法:应用流式细胞仪检测 TRAIL、Caspase 8/Caspase 3 抑制剂+TRAIL 对 CHP212 细胞的诱导凋亡作用;比色法测定 Caspase 8、Caspase 3 相对活性;透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察.结果:TRAIL 可诱导 CHP212 细胞凋亡,并存在剂量依赖性;Caspase 8/Caspase 3 抑制剂能抑制 TRAIL 对 CHP212 细胞的诱导凋亡作用.随 TRAIL 作用时间的延长,Caspase 8、Caspase 3 活性逐步升高,分别于作用16h、8h后达高峰.透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征.结论:TRAIL 通过 Caspase 信号传导通路诱导 CHP212 细胞凋亡并伴随 Caspase 8 和 Caspase 3 活性增高.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 凋亡 半胱-天冬氨酸蛋白酶 -
Survivin,TRAIL在胶质瘤中的表达及其相关性
目的:探讨survivin,TRAIL在正常脑组织和不同级别胶质瘤中的表达情况及其相关性.方法:收集脑外伤后内减压正常脑组织8例,胶质瘤组织40例,免疫组化方法检测survivin及TRAIL的表达情况.结果:Survivin,TRAIL蛋白在正常脑组织和胶质瘤组织中阳性表达率比较差异都有统计学意义(P＜0.05).Survivin在胶质瘤低级别组(Ⅰ、Ⅱ级)与高级别组(Ⅲ、Ⅳ级)之间的阳性表达率比较差异有统计学意义(P＜0.05).TRAIL在胶质瘤低级别与高级别之间的阳性表达率比较差异没有统计学意义(P＞0.05).Spearman相关分析显示survivin表达强度与胶质瘤的恶性程度呈正相关(r=0.502,P＜0.05).Survivin蛋白和TRAIL蛋白在胶质瘤组织中的表达呈显著负相关(r=-0.553,P＜0.05).结论:胶质瘤细胞的增殖与凋亡可能与survivin和TRAIL的表达有关.
关键词： 存活素 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 胶质瘤 -
尖锐湿疣组织中的细胞凋亡与TRAIL受体的表达
目的探讨尖锐湿疣患者皮损中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体DR4,DR5的表达情况及其与细胞凋亡之间的相关性.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测30例尖锐湿疣患者皮损中DR4,DR5 mRNA的水平,并设15例正常皮肤组织作对照;原位末端标记法(TUNEL)检测皮损中角质形成细胞的凋亡.结果尖锐湿疣组织标本DR4,DR5 mRNA的平均水平分别为0.98±0.20,1.18±0.16,与正常皮肤组织相比显著升高(P<0.05);凋亡指数与DR4,DR5的水平有显著相关性(P<0.05).结论 DR4,DR5在尖锐湿疣组织中表达,并与病毒感染细胞的凋亡相关,可能在TRAIL/TRAIL-R系统诱导病毒感染细胞凋亡中发挥重要作用.
关键词： 尖锐湿疣 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体 凋亡 -
TRAIL和Caspase-3在尖锐湿疣组织中的表达
目的 观察尖锐湿疣(CA)组织中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达情况并探讨其意义.方法 采用免疫组化SP法检测30例CA患者组织中和20例正常包皮组织中TRAIL和Caspase-3的表达情况,并进行相关性分析.结果 CA组织中TRAIL阳性表达率(73.33％)和表达强度(+～3+)明显高于正常包皮组织(20.00％和+～2+),差异均有统计学意义(P均＜0.05).CA组织中Caspase-3阳性表达率(60.00％)略低于正常包皮组织(65.00％),差异无统计学意义(P＞0.05);但是CA组织中的Caspase-3表达强度(+～2+)低于正常包皮组(2+～3+),差异也有统计学意义(P＜0.05).CA组织中TRAIL和Caspase-3的阳性表达呈现正相关(P＜0.05).结论 CA组织中均存在TRAIL和Caspase-3异常表达,该两者可能共同参与了CA的发生和发展.
关键词： 尖锐湿疣 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 半胱氨酸蛋白酶-3 表达 -
hTERT启动子驱动的TRAIL联合放化疗对HeLa裸鼠移植瘤生长抑制的作用
目的:探讨hTERT启动子驱动的TRAIL联合放化疗对宫颈癌HeLa裸鼠皮下移植瘤生长抑制的作用. 方法:将含有hTERT启动子的TRAIL基因载体转染宫颈癌细胞HeLa,检测稳定转染细胞中GFP/TRAIL的表达;实验裸鼠分为基因组,化疗组,放疗组,综合组(基因+放化疗),对照组,每组5只,未转染HeLa组为对照组,不作任何处理;将稳定转染基因载体及未转染的HeLa细胞种植于裸鼠背部皮下,联合放化疗,来观察移植瘤成瘤情况,移植瘤的体积、质量以及质量抑制率的变化. 结果:转染hTERT-TRAIL细胞中GFP/TRAIL(绿色荧光蛋白)表达率高于对照组,有统计学意义 (P＜0.01);各组裸鼠在接种细胞第5～7日全部长出肿瘤小结节,结节出现的时间差异无统计学意义(P＞0.05);转染hTERT -TRAIL细胞与对照组HeLa细胞裸鼠的移植瘤质量相比差异有统计学意义(P＜0.05); hTERT -TRAIL细胞在裸鼠体内所形成的移植瘤生长较慢, 4 wk后肿瘤质量抑制率为43.08%,联合放化疗后肿瘤质量抑制率为61.63%,有统计学意义(P＜0.01). 结论:hTERT启动子驱动的TRAIL对人宫颈癌裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,联合放化疗能抑制裸鼠移植瘤的生长. 基因治疗联合放化疗等多途径综合治疗为以后的肿瘤研究和临床治疗提供思路.
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不同浓度葡萄糖对MG63细胞株TRAIL表达的影响
目的: 观察不同浓度葡萄糖环境下人成骨肉瘤MG63细胞株肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)的表达,探讨糖尿病骨质疏松症的发病机制. 方法: 用不同浓度葡萄糖(5.5, 16.7, 33.3 mmol/L)分别刺激培养的MG63细胞24 h, RT-PCR法检测TRAIL, OPG, OPGL mRNA的表达,免疫组织化学法检测MG63细胞中TRAIL的表达及分布. 结果: 葡萄糖对MG63细胞中TRAIL, OPGL mRNA的表达,均按照对照组、5.5 mmol/L组、16.7 mmol/L组、33.3 mmol/L组顺序递增(P＜0.05),OPG mRNA的表达按照此顺序递减(P＜0.05). 33.3 mmol/L组TRAIL mRNA的水平明显高于对照组[(1.004±0.070) vs (0.740±0.023), P＜0.05], TRAIL免疫反应阳性物质密度也明显高于对照组. 结论: 高糖环境可能导致成骨细胞中TRAIL和OPGL表达增多,OPG的表达减少,这可能是糖尿病骨质疏松症的重要发病机制之一.
关键词： 葡萄糖 MG63细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 -
TRAIL及其受体与蛛网膜下腔出血后痉挛动脉内皮细胞的凋亡
目的: 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体DR4、DR5在实验性蛛网膜下腔出血后痉挛血管内皮细胞表达与凋亡的关系.方法: 54只家兔随机分为3组,对照组(6只),SAH组(24只)和假手术组(24只).SAH组和假手术组再以时间随机分为4组,0,2,4,7 d组,每组6只.手术前及处死前分别行脑血管造影,评价血管痉挛模型.应用原位缺口末端标记(TUNEL)法显示痉挛血管内皮细胞的凋亡,免疫组化ABC的方法显示TRAIL、DR4、DR5在凋亡的内皮细胞中的表达.结果: 正常对照组基底动脉直径为(0.70±0.03) mm,SAH组与正常对照组基底动脉管径比较差异显著(P<0.01).痉挛血管内皮细胞的凋亡与对照组相比有显著性差异(P<0.01),TRAIL及其受体DR4、DR5在内皮细胞中有大量的表达,与对照组有显著性差异(P<0.01).结论: TRAIL及其受体DR4、DR5在蛛网膜下腔出血后痉挛血管内皮细胞的凋亡中有重要意义.TRAIL及其受体DR4和DR5介导的内皮细胞的凋亡在SAH后脑血管痉挛(CVS)的形成机制可能有重要的意义.
关键词： 蛛网膜下腔出血 血管痉挛 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 凋亡 -
TRAIL基因1595C/T多态性和LDD血瘀证、LDD风险及严重程度相关研究
目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因1595C/T多态性与腰椎间盘突出症血瘀证、腰椎间盘退变(LDD)的发病风险及严重程度的关联性.方法 本研究共纳入了LDD患者230例和健康对照者197例.采用核磁共振施耐德曼分型标准对椎间盘退变进行分级.采用比值比(0R)和95％置信区间(95％CI)表示风险比.结果 与对照组相比,LDD组中CT和TT基因型频率较低(x2=11.292,P=0.004).与CC基因型相比,CT和TT基因型与LDD发病呈负相关(OR =0.517,0.315-0.649,P=0.009;OR =0.397,0.229-0.689,P=0.001).T等位点频率与LDD患病风险呈负相关(OR=0.632,0.482-0.829,P=0.001).基因型为CT和TT的患者,其椎间盘退变分级要低于CC基因型患者(x2=19.452,P＜0.001).血瘀证患者椎间盘退变程度比非血瘀证患者更严重(P＜0.05).另外,椎间盘退变分级越高,T等位基因频率越低(Z=-4.035,P＜0.001).结论 在中国汉族人群中TRAIL基因1595C/T多态性与LDD患病和严重性相关联,患血瘀型腰椎间盘突出症的可能性更大.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 腰椎间盘退变 血瘀证 基因多态性 -
甲胎蛋白对人肝癌Bel 7402细胞caspase信号传递及耐受TRAIL的影响
目的 研究甲胎蛋白(AFP)对人肝癌Bel 7402细胞内caspase信息通路信号传递的影响,以及对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肝癌细胞凋亡的对抗作用.方法 激光共聚焦显微镜观察AFP与caspase-3、caspase-8 在Bel 7402细胞内的共定位;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与caspase-3、caspase-8的相互作用;RNA干扰(RNAi)技术封阻AFP表达,并用Western blotting检测RNAi干扰肝癌Bel 7402细胞内AFP表达的效果;用蛋白酶活性比色法检测AFP对肝癌细胞 caspase-3、caspase-8活性的影响;MTT法分析干扰AFP表达30 h后再给予TRAIL(2nmol/L)处理24 h,Bel 7402细胞的生长情况,并用荧光显微镜观察经TRAIL处理后肝癌细胞的凋亡状况.结果 共聚焦显微镜观察发现AFP、caspase-3、caspase-8主要表达于Bel 7402细胞的细胞质,发现AFP能与 caspase-3共定位于细胞质,但与caspase-8在细胞质的共定位可能性很小;Co IP技术研究发现AFP能与caspase-3结合,但不能与caspase-8结合;2nmol/L 剂量的TRAIL单独处理Bel 7402细胞并不能显著改变caspase-3活性,但能提升caspase-8活性,而用全反式维甲酸(ATRA)40 μmol/L加TRAIL(2nmol/L)处理时,则能提高Bel 7402细胞caspase-3活性;干扰AFP表达后,单独用TRAIL(2nmol/L)也能激活caspase-3,而干扰AFP表达前后对caspasE-8活性没有显著性改变;MTT分析发现, 2nmol/L剂量的TRAIL对Bel 7402细胞的生长并没有显著性抑制作用,但是干扰AFP表达后TRAIL(2nmol/L)能明显抑制Bel 7402细胞生长(抑制率为48.4%);荧光显微镜观察表明,干扰AFP表达后TRAIL(2nmol/L)能诱导Bel 7402细胞凋亡.结论 AFP选择性抑制caspasE-3活性是阻断人肝癌Bel 7402细胞内凋亡信息传递的重要机制,也是AFP抵抗TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的关键环节.
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中枢神经系统感染患者脑脊液中TRAIL、OPG、IFN-γ水平及其临床意义
目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)、骨保护素(OPG)、γ-干扰素(IFN-γ)在成人中枢神经系统感染患者脑脊液中的水平变化并探讨其临床意义. 方法 采用ELISA法检测20例结核性脑膜炎患者(结脑组)、20例病毒性脑膜炎患者(病脑组)和20例头痛患者(对照组)脑脊液中sTRAIL、OPG、IFN-γ的水平并进行比较. 结果 结脑组患者脑脊液中的sTRAIL、OPG、IFN-γ水平升高,与对照组比较,有显著性差异(P<0.05). 病脑组患者脑脊液中IFN-γ水平升高,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),但其脑脊液中sTRAIL、OPG水平和对照组比较,无显著性差异(P>0.05). 结脑组和病脑组脑脊液sTRAIL、OPG水平比较,均有显著性差异(P<0.05),而IFN-γ水平组间比较,差异无统计学意义(P>0.05). 结论 sTRAIL、OPG、IFN-γ参与中枢神经系统感染的病理生理过程,三者联合检测可提高诊断的特异性. 脑脊液中IFN-γ水平可作为诊断结核性脑膜炎和病毒性脑膜炎的敏感性依据.sTRAIL、OPG的检测在结核性脑膜炎与病毒性脑膜炎的鉴别诊断中有重要价值.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 骨保护素 γ-干扰素 中枢神经系统感染 -
TRAIL联合5-氟脲嘧啶体外杀伤胆管癌细胞作用的研究
目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)对人胆管癌的作用及联合化疗药物5-氟脲嘧啶(5-FU)共同作用胆管癌细胞对TRAIL抗瘤活性的影响.方法:应用四氮唑蓝快速比色(MTT)检测单独应用不同浓度TRAIL(1、10、100、1 000 ng/ml)及不同浓度(1、10、100、1 000 ng/ml)TRAIL +10 mmol/ml 5-FU对胆管癌细胞QBC939活性的抑制作用.结果:单独应用(1、10、100、1 000 ng/ml)TRAIL作用于QBC939细胞后抑制率分别为15.6%、31.2%、37.5%、40.6%(1、10、100、1 000 ng/ml)TRAIL +10 mmol/ml 5-FU作用于QBC939细胞后抑制率分别为46.9%、62.4%、68.7%、78.1%,5-FU与TRAIL联合应用对QBC939细胞抑制率明显高于单独应用TRAIL(P＜0.05).结论:TRAIL通过诱导胆管癌细胞凋亡而起到抑癌作用,化疗药物5-FU能加强TRAIL的抗癌活性.
关键词： 胆管癌细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 5-氟脲嘧啶 -
TRAIL受体在胆管癌组织中的表达及意义
目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的受体在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株(QBC939)的表达及其临床意义.方法:应用原位杂交组织化学法检测TRAIL受体mRNA在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株(QBC939)中的表达.结果:DR4mRNA、DR5mRNA在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株(QBC939)均呈阳性表达.只有3例DcR1(3/52)和7例DcR2(7/52)在人胆管癌组织呈弱阳性表达.DcR1、DcR2mRNA在癌旁胆管组织呈阳性表达,而在胆管癌细胞株(QBC939)均不表达.结论:TRAIL死亡受体和诱捕受体在人胆管癌、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株(QBC939)的表达不同,这些受体表达的变化可能在调控人胆管癌凋亡中发挥重要作用.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 受体 原位杂交 凋亡 胆管癌 -
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合雷公藤甲素诱导胰腺癌细胞凋亡的机制研究
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合雷公藤甲素(Triptolide)诱导胰腺癌细胞凋亡的机制.方法 (1)将人胰腺癌细胞MiaPaca-2(简称MiaPaca-2细胞)分为4组:空白对照组(不加任何药物),TRAIL+ Triptolide-组(仅加TRAIL),TRAIL-Triptolide+组(仅加Triptolide)和TRAIL+Triptolide+组(加TRAIL和Triptolide).采用CCK-8检测各组细胞活力.采用Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-8(Caspase-8)的表达.加入Caspase-8特异性抑制剂Z-IETD-FMK后,采用CCK-8检测细胞活力,采用Caspase-Glo荧光检测法检测Caspase-8活性.采用Western blot检测各组细胞髓样细胞白血病-1(Mcl-1)、额外的大B细胞淋巴瘤(Bcl-xL)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达.(2)将MiaPaca-2细胞分为8组:①TRAIL-Mcl-1 siRNA-组(不加TRAIL、不转染Mcl-1 siRNA),TRAIL+ Mcl-1siRNA-组(加TRAIL、不转染Mcl-1 siRNA),TRAIL-Mcl-1 siRNA+组(不加TRAIL、转染Mcl-1 siRNA)和TRAIL+ Mcl-1 siRNA+组(加TRAIL、转染Mcl-1 siRNA).②TRAIL-Bcl-xL siRNA-组(不加TRAIL、不转染Bcl-xL siRNA),TRAIL+ Bcl-xL siRNA-组(加TRAIL、不转染Bcl-xL siRNA),TRAIL-Bcl-xL siRNA+组(不加TRAIL、转染Bcl-xL siRNA),TRAIL+ Bcl-xL siRNA+组(加TRAIL、转染Bcl-xL siRNA).采用CCK-8检测各组细胞活力.采用Western blot检测各组细胞Caspase-3和Caspase-8蛋白的表达.符合正态分布的计量资料以(x)±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 (1)空白对照组、TRAIL+ Triptolide-组、TRAIL-Triptolide+组和TRAIL+ Triptolide+组MiaPaca-2细胞活力分别为100.0％±1.1％、81.2％±2.3％、78.6％±3.6％、40.1％±2.5％;PARP蛋白相对表达量分别为0.510 ±0.028、0.720±0.072、1.250±0.023、2.560±0.220;Caspase-3蛋白相对表达量分别为0.080±0.004、0.080±0.003、0.110±0.005、2.720 ±0.003;Caspase-8蛋白相对表达量分别为0.070±0.003、0.080±0.005、0.120 ±0.003、0.990±0.006,4组比较,差异均有统计学意义(F=203.607,1 457.785,332 421.900,35 437.218,P＜0.05).TRAIL+ Triptolide+组MiaPaca-2细胞活力与空白对照组、TRAIL+ Triptolide-组和TRAIL-Triptolide+组分别比较,差异均有统计学意义(t=34.583,355.936,36.271,P＜0.05);TRAIL+ Triptolide+组MiaPaca-2细胞中PARP蛋白相对表达量与空白对照组、TRAIL+ Triptolide-组和TRAIL-Triptolide+组分别比较,差异均有统计学意义(t =591.784,63.739,2 268.987,P＜0.05);TRAIL+ Triptolide+组MiaPaca-2细胞中Caspase-3蛋白相对表达量与空白对照组、TRAIL+ Triptolide-组和TRAIL-Triptolide+组分别比较,差异均有统计学意义(t=3 266.153,9 145.228,1 738.713,P＜0.05);TRAIL+Triptolide+组MiaPaca-2细胞中Caspase-8蛋白相对表达量与空白对照组、TRAIL+ Triptolide-组和TRAIL-Triptolide+组分别比较,差异均有统计学意义(=663.953,1 432.878,327.584,P＜0.05).TRAIL+ Triptolide+组MiaPaca-2细胞加Z-IETD-FMK前,Caspase-8活性为711.0％±5.1％;加入Z-IETD-FMK后,细胞活力为70.0％±4.8％,Caspase-8活性为73.0％±2.4％;加Z-IETD-FMK后细胞活力升高,Caspase-8活性降低,两者比较,差异均有统计学意义(t=17.956,55.027,P＜0.05).空白对照组、TRAIL+ Triptolide-组、TRAIL-Triptolide+组和TRAIL+ Triptolide+组MiaPaca-2细胞中Mcl-1蛋白相对表达量分别为1.68±0.22、2.08±0.11、0.73±0.15、0.58±0.18,Bcl-xL蛋白相对表达量分别为0.65±0.03、0.47±0.03、0.32±0.03、0.26±0.05,Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.65 ±0.03、0.67±0.03、0.62 ±0.05、0.67±0.03,4组比较,差异均有统计学意义(F =55.178,88.683,3.411,P＜0.05).TRAIL-Triptolide+组和TRAIL+ Triptolide+组MiaPaca-2细胞中Mcl-1蛋白相对表达量与空白对照组分别比较,差异均有统计学意义(=23.506,47.631,P ＜0.05);上述两组与TRAIL+ Triptolide-组分别比较,差异均有统计学意义(t=58.457,37.115,P＜0.05).TRAIL-Triptolide+组和TRAIL+Triptolide+组MiaPaca-2细胞中Bcl-xL蛋白相对表达量与空白对照组分别比较,差异均有统计学意义(t=38.105,42.219,P ＜0.05);上述两组与TRAIL+ Triptolide-组分别比较,差异均有统计学意义(t=32.476,15.814,P ＜0.05).TRAIL-Triptolide+组和TRAIL+ Triptolide+组MiaPaca-2细胞中Bcl-2蛋白相对表达量与空白对照组分别比较,差异均无统计学意义(t=4.724,1.732,P＞ 0.05);上述两组与TRAIL+ Triptolide-组分别比较,差异均无统计学意义(t=3.464,0.000,P＞0.05).(2)TRAIL-Mcl-1 siRNA-组、TRAIL+ Mcl-1siRNA-组、TRAIL-Mcl-1 siRNA+组和TRAIL+ Mcl-1 siRNA+组MiaPaca-2细胞活力分别为100.0％ ±2.2％ 、79.3％±1.8％ 、71.2％±3.2％ 、37.3％±5.4％,Caspase-8蛋白相对表达量分别为0.100 ±0.003、0.100 ±0.005 、0.100±0.003、0.350±0.005,Caspase-3蛋白相对表达量分别为0.020±0.003、0.060±0.003 、0.020 ±0.003、0.590 ±0.004,4组比较,差异均有统计学意义(F=136.681,2 717.391,44471.429,P＜ 0.05).TRAIL+ Mcl-1 siRNA+组MiaPaca-2细胞活力与TRAIL-Mcl-1 siRNA-组、TRAIL+ Mcl-1 siRNA-组和TRAIL-Mcl-1 siRNA+组分别比较,差异均有统计学意义(t=33.937,20.207,26.689,P＜ 0.05);TRAIL+ Mcl-1 siRNA+组MiaPaca-2细胞Caspase-8蛋白相对表达量与TRAIL-Mcl-1 siRNA-组、TRAIL+Mcl-1 siRNA-组和TRAIL-Mcl-1 siRNA+组分别比较,差异均有统计学意义(=216.506,433.013,144.338,P＜ 0.05);TRAIL+ Mcl-1 siRNA+组MiaPaca-2细胞Caspase-3蛋白相对表达量与TRAIL-Mcl-1 siRNA-组、TRAIL+ Mcl-1 siRNA-组和TRAIL-Mcl-1 siRNA+组分别比较,差异均有统计学意义(t=329.090,458.993,987.269,P＜ 0.05).TRAIL-Bcl-xL siRNA-组、TRAIL+ Bcl-xL siRNA-组、TRAIL-Bcl-xL siRNA+组和TRAIL+ Bcl-xL siRNA+组MiaPaca-2细胞活力分别为100.0％±2.3％、87.2％±4.1％、74.1％±3.7％、56.3±5.4％,Caspase-3蛋白相对表达量分别为0.060±0.004、0.070±0.003、0.060±0.004、0.390±0.003,4组比较,差异均有统计学意义(F=70.074,4 643.478,P＜0.05).TRAIL+ Bcl-xL siRNA+组MiaPaca-2细胞活力与TRAIL Bcl-xL siRNA-组、TRAIL+ Bcl-xL siRNA-组和TRAIL-Bcl-xL siRNA+组分别比较,差异均有统计学意义(=24.416,41.170,18.136,P ＜0.05);TRAIL+ Bcl-xL siRNA+组MiaPaca-2细胞Caspase-3蛋白相对表达量与TRAIL-Mcl-1 siRNA-组、TRAIL+ Mcl-1 siRNA-组和TRAIL-Mcl-1 siRNA+组分别比较,差异均有统计学意义(t=285.788,554.256,190.526,P＜0.05).结论 Triptolide可能通过抑制Mcl-1与Bcl-xL表达水平,致敏TRAIL,激活Caspase-8及其下游的Caspase-3,终诱导胰腺癌细胞凋亡.
关键词： 胰腺肿瘤 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 雷公藤甲素
